Sujet de stage de Master 2 Recherche Année 2013/2014 Laboratoire : Institut de Biologie Structurale Intitulé de l'équipe : Equipe Pathogénie Bactérienne Directeur : E. Pebay-Peyroula Responsable : A. Dessen Nom et qualité du responsable du stage : Viviana Job Adresse : 41 Rue Jules Horowitz Tél :0438789590 email : [email protected] HDR oui ☐ non x Spécialité MASTER : ☐ Biodiversité - Ecologie – Environnement x Biochimie, Biologie Structurale ☐ Immunology, Microbiology, Infectiology ☐ Neurosciences and Neurobiology ☐ Physiology Epigenetics Development Titre du sujet : Caractérisation structurale du système de sécrétion de type VI de Pseudomonas aeruginosa Objectifs recherchés (3 lignes max) : Ce projet vise la compréhension biochimique et structurale de deux protéines essentielles pour le système de sécrétion de type IV de Pseudomonas aeruginosa, TagQ et TagR. Résumé (10 lignes max) : Pseudomonas aeruginosa est un pathogène majeur pour l’homme, agent causal d’infections pulmonaires majeures, et particulièrement dangereux pour des patients atteints de la mucoviscidose. Le système de sécrétion de type VI (T6SS) est un système macromoléculaire récemment découvert chez ce pathogène, impliqué dans la sécrétion de différentes toxines dans les cellules humaines. Notre équipe vise l’étude de protéines spécifiques de ce système, en particulier les protéines TagQ et TagR, qu'on suppose forment un complexe essentiel pour la fonction du T6SS de P. aeruginosa. Les protéines seules seront d'abord purifiées et caractérisées biochimiquement et ensuite on cherchera a confirmer la formation d'un complexe. Un fera également des études par cristallographie aux rayons X des deux protéines et du complexe. Ces études pourront aider au développement de nouveaux antibiotiques qui bloquent la virulence de P. aeruginosa due a ce système. Approches & matériel utilisés (3 lignes max) : Biologie moléculaire, expression et purification de protéines recombinantes en E.coli, biochimie des protéines et du complexe, cristallogenese. Des expériences in vivo sur Pseudomonas pourront être réalisées en collaboration avec l'iRTSV de Grenoble. Publications pertinentes de l'équipe (3 max) : Gendrin C, Contreras-Martel C, Bouillot S, Elsen S, Lemaire D, Skoufias DA, Huber P, Attree I, Dessen, A (2012) Structural basis of cytotoxicity mediated by the type III secretion toxin ExoU from Pseudomonas aeruginosa. PLoS Pathog. e1002637. Izoré, T., Perdu, C., Job, V., Attree, I., Faudry, E., and Dessen, A. (2011) Structural characterization and membrane localization of ExsB from the type III secretion system (T3SS) of Pseudomonas aeruginosa. J. Mol. Biol. 413, 236-246. Izoré, T., Job, V., and Dessen, A. (2011) Biogenesis, regulation, and targeting of the type III secretion system. Structure 19, 603-612. Domaines de compétences souhaités (quelques mots clés) : Microbiologie: transformation et mise en culture de bactéries, Biochimie: purification de proteines