Stage M1 - Institut de Biologie Structurale

Stage M1
Labo d’accueil : Institut de Biologie Structurale, UMR 5075
Equipe d’accueil : Membranes et Pathogènes, Structure et Stabilité des Protéines
membranaires en Solution
Responsable : Cécile Breyton tel : 04 38 78 30 37 E-mail : [email protected]
Objectifs : Optimiser la surexpression dans E. coli, mener à bien la purification et la
caractérisation une protéine de la queue du phage T5.
Résumé : Les phages, virus attaquant les bactéries, détournent à leur profit
certaines protéines de la bactérie : par exemple, le phage T5 reconnaît de façon très
spécifique un transporteur de la membrane externe de E. coli, FhuA. L’interaction
entre l’extrémité de la queue du phage et FhuA provoque l'injection de l'ADN dans le
cytoplasme bactérien, initiant le cycle lytique. L’éjection d’ADN implique la
transmission de l’information de liaison à FhuA à la capside, permettant son
ouverture, et la formation d’un canal transperçant l’enveloppe bactérienne. Le projet
s’intègre dans un projet plus vaste, portant sur la caractérisation au niveau
moléculaire des protéines de la queue du phage et leur assemblage en vue de
comprendre les réorganisations que cet assemblage subit lors de l’interaction du
phage avec son récepteur : caractérisation (biochimique, biophysique, structurale et
fonctionnelle) des protéines impliquées, et exploration du réseau d’interactions entre
ces protéines.
Principales techniques : Surexpression d’une protéine dans E. coli (test de
différentes conditions de cultures : type de milieu, température, durée et force de
l’induction, etc), purification (à l’aide de l’étiquette polyHisitidine : chromatographie
d’affinité et autres), caractérisation (gels d’acrylamide, chromatographies d’exclusion
de taille, spectroscopies, etc…) et cristallogenèse (diffusion de vapeur) en vue
d’études structurales.
Phage T5, tueur de bactérie. La capside
renferme le matériel génétique, et la queue
permet la reconnaissance de l’hôte, la
perforation de sa paroi et l’injection de
l’ADN viral dans le cytoplasme bactérien.