SVT – Lycée Camille Claudel L`électrophorèse

SVT – Lycée Camille Claudel
L'électrophorèse
Intérêt:
Cette technique permet de séparer les différents constituants chimiques (le plus souvent ADN et protéines).
Principe:
Cette technique utilise le fait que certaines molécules sont chargées électriquement.
A taille et d masse moléculaire égales, les molécules migrent d'autant plus facilement qu'elles possèdent une forte charge électrique.
Technique:
1. On place les molécules à analyser sur un support (papier d électrophorèse pour les protéines, gel d'agarose ou de polyacrylamide pour
l'ADN). Elles sont déposées en ligne et baignent dans une solution tampon de pH déterminé, en effet selon les conditions du milieu (pH),
elles se comportent comme des cations ou des anions :
Ex :à pH = 8,6 les protéines sont chargées négativement et se comportent donc comme des anions.
2. On applique au support un champ électrique qui oriente la migration des molécules en fonction de leur charge.
3. Les différents constituants vont alors migrer d des vitesses différentes:
- à masses moléculaires égales, le constituant le plus rapide est celui dont la charge électrique est la plus forte
- à charges électriques équivalentes, le constituant le plus rapide est celui dont la masse moléculaire est la plus faible
4. On révèle les différents fragments en les colorant :
- la ninhydrine pour les protéines, on obtient alors un protéinogramme
- le bromure d'éthidium pour les fragments d'ADN, ce qui les rend fluorescents sous les UV.