Enzymes utilisées en génie génétique

Enzymes utilisées en génie génétique
Abréviations : ss/ds : "single / double strand"
1
Nucléases
1.1
Hydrolysent la liaison phosphodiester entre les nucléotides.
RNases
RNase H
Uniquement l'A.R.N. en hétéroduplexe
Utilisée lors de la synthèse d'ADNc
RNase A
Tout type d'ARNss et ds
Destruction des ARN
1.2 DNases
1.2.1 Endonucléases
Enzymes de restriction (cf. fiche) : endonucléase qui hydrolyse l'A.D.N. double brin en un site spécifique
et souvent palindromique. Utilisées pour le clonage, les cartographies de restriction.
DNase I : non spécifique de sites : utilisées pour créer des amorces 3'OH ("nick translation")
1.2.2
Exonucléases
Polymérases
Enzyme \
propriétés
Sous types
Besoin de
matrice
Pol I*
ADN
ADN polymerase
Amorce
3' OH
ADN ou
ARN
monomère
Activité
exonucléase
5'>3' et 3'>5'
thermorésistante
dXTP
Taq
Terminale
non
ADN
transférase
Transcriptase
ARN
inverse
A.R.N.
Phage T7
polymérase
SP6, T3
• dans le fragment de Klenow qui dérive de l'A.D.N. pol I une digestion ménagée détruit l'activité
exonucléase 5'>3' (en avant).
2
Enzymes Diverses
Agissant sur le Phosphate en 5'
Polynucléotide kinase dATP
Mg2+ Phosphatase alcaline Mg2+
Ajoute un phosphate en 5' OH
Hydrolyse un phosphate
Ligase cellulaire : jonction sur coupure simple brin (besoin ATP + Mg2+)
Ligase du phage T4 ligation sur brin phosphorylé en 5', sur bouts collants ou francs.