Intérêts et indications de la recherche des instabilités
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Centre Jean Perrin Centre de Lutte contre le Cancer d'Auvergne Clermont-Ferrand - France - Intérêts et indications de la recherche des instabilités microsatellitaires dans les cancers du colon et de l’endométre Frédérique Penault-Llorca, Nancy Uhrhammer, Cécile Aubé, Yves-Jean Bignon et Anne Cayre COMMENT ? Instabilité microsatellitaire (MSHI-H) • Due à soit la mutation autosomique dominante d’un gène impliqué dans réparation des erreurs de réplication de ADN de l’ADN – – – – MLH1: 3p21.3 MSH2 : 2p22-p21 MSH6 : 2p16 PMS2 : 7p22 • Si MSI-H et perte IHC de MLH1 rechercher si anomalie non germinale (methylation) via mut de BRAF tumorale Instabilité microsatellitaire • Par convention, un patient est défini MSI-H quand au moins 40 % des microsatellites sont instables. • Les microsatellites sont des courtes séquences d'ADN (répétition d'un motif 1-4 bases) • Les plus étudiés sont les répétitions (CA)n. • BAT25, BAT26, NR40, D5S346, D2S123, D17S250, NR21, NR22, NR24, NR27 (R Hamelin) soit au moins 2/5 instables = MSI Cancer colorectaux 15-20% Microsatellite Instability MSI / RER+ 1/3 Mutations constitutionnelles des gènes MMR Syndrome de Lynch 2/3 Hyperméthylation somatique du promoteur de MLH1 Analyse par génotypage de l’ADN tumoral 1) Sélection d’une région riche en cellules tumorales (HES) par cerclage 2) Prélèvement de 3 carottes dans la zone sélectionnée 3) Extraction de l’ADN avec le kit Qiagen 4) Amplification par PCR-multiplex des marqueurs microsatellitaires NR21, NR24, NR27, Bat26, Bat25 sur tissu tumoral (et sain si possible) 5) Analyse sur séquenceur (ABI-3730) Identification du profil tumoral Identification du profil tumoral Prélèvement SAIN en Bat 26 Prélèvement TUMORAL En Bat 26 Allèles surnuméraires Conclusion : INSTABLE en bat 26 Identification du profil tumoral Identification du profil tumoral Identification du profil tumoral Séquence analytique complète de la fonction MMR d’un cancer A) Génotypage de l’ADN tumoral Bat26 Bat25 NR21 NR24 B) Immunohistochimie des 4 protéines C) Caractérisation de BRAF si MLH1- D) Analyse complète de(s) gène(s) ciblé(s) c.1799T>A (p.Val600Glu) T C A (Ser) T G A (X) Altérations somatiques Mutation germinale MSS MSH2/MSH6 neg MSI ? MSI-H IHC MLH1 neg MSH2 criblage MSH6 criblage MLH1 criblage BRAF V600E ? Méthylation MLH1 ? Oui Non Séquence de dépistage du syndrome de Lynch Indication Tumeur du spectre large < 60 ans ou ATCD 1er degré 1. Génotypage de l’ADN microsatellite Génotype MSS Génotype MSI 2. IHC MMR x 4 a) Extinction MLH1±PMS2 b) Extinction MSH2±MSH6 ou PMS2 seul c) Normale 3. Génotype BRAF p.Val600Glu Pas d’analyse constitutionnelle des gènes MMR Normal 4. Analyse constitutionnelle des gènes MMR orientée complète Faut-il se fier aux caractéristiques histologiques ? MSI-H • Colon droit • Diffrenciation variable • Mucineux ou bague à chaton • “pushing borders” • Reaction inflammatoire “crohn like” • 2 ou > TILs/HPF – très évocateurs de MSI-H Mais • 50% des CCR n’auront pas de traits phénotypiques type MSI-H • Il y a moins de 5% de chance qu’avec ces aspects une tumeur soit MSI-H • Le plus important reste l’âge et les ATCD familiaux (critères de BETHESDA) Intérêt de la recherche Colon • MSI-H – Intérêt pronostique et thérapeutique – Rechercher un éventuel syndrome de Lynch car 95% des Lynch sont MSI-H + =>Puis recherche ciblées en fonction des protéines atteintes Endomètre • Lynch – Risque de cancer de endomètre 22% Ovaire • Lynch – Risque de cancer de ovaire de 8-15 % mais altérations plus fréquentes Séquence de dépistage du syndrome de Lynch Indication Tumeur du spectre large < 60 ans ou ATCD 1er degré 1. Génotypage de l’ADN microsatellite Génotype MSS Génotype MSI 2. IHC MMR x 4 a) Extinction MLH1±PMS2 b) Extinction MSH2±MSH6 ou PMS2 seul c) Normale 3. Génotype BRAF p.Val600Glu Pas d’analyse constitutionnelle des gènes MMR Normal 4. Analyse constitutionnelle des gènes MMR orientée complète ET AUSSI …..
