2 – techniques de microscopie

Année Universitaire 2010-2011
UE5
Cours du Dr R. GARNOTEL
La culture comme moyen d’étude du métabolisme :
Expression de macromolécules
(protéines, enzymes, acides nucléiques)

1 –INTRODUCTION
2 –TECHNIQUES DE MICROSCOPIE
2.1. La technique photonique
2.2. La microscopie électronique
3 –TRIEUR DE CELLULES ACTIVE PAR FLUORESCENCE
4 –FRACTIONNER LES CELLULES
4.1. Séparation des organites et des macromolécules
par ultracentrifugation
4.2. Séparation des protéines par chromatographie

5 –ETUDE DES PROTEINES
5.1. Technique d’électrophorèse SDS-PAGE
5.2 Technique d’électrophorèse bidimensionnelle
sur gel de polyacrylamide
5.3. Immuno-transfert ou Western-Blot
5.4. Clivage spécifique des protéines
5.5. Analyse de la composition en acides aminés des
peptides et des protéines
6 –ETUDE DES ENZYMES
6.1. Technique de zymographie
6.2. Etude des activités enzymatiques
7 –ETUDE DES ACIDES NUCLEIQUES
7.1. Etude de l’ADN
7.2. Etude de l’ARN
CONCLUSION

1 –INTRODUCTION
Techniques d’examen de la cellule dans son ensemble
Techniques d’analyse des macromolécules constitutives
de la cellule :
- protéines
- enzymes
- acides nucléiques : ADN
ARN

2 –TECHNIQUES DE MICROSCOPIE
Une cellule animale type mesure de 10 à 20 µm de diamètre
utilisation du microscope
Les cellules animales sont incolores et translucides
techniques de coloration