analyse d`article à partir de la publication de

Immunologie de base
Master 1
Biologie & Santé
Année 2010-2011
TD basé sur la publication
A distinct lineage of CD4 T cells regulates tissue
inflammation by producing interleukin 17
Heon Park, Zhaoxia Li, Xuexian O Yang, Seon Hee Chang, Roza Nurieva, Yi-Hong Wang, Ying
Wang, Leroy Hood, Zhou Zhu, Qiang Tian & Chen Dong
Nature Immunology 6, 1133 - 1141 (2005)
AUTEURS :
ANDRIAMANANTENA Vohary
ENCADREMENT :
MAAKNI Smail
Monsieur Jean KANELLOPOULOS
WANG Xinyue
Monsieur Pierre BOBE
CARPIER Jean-Marie
Sommaire
Remise en contexte
. Réponse immunitaire et différ²enciation des lymphocytes T
. Lymphocytes T CD4 positifs différenciés
. Modèle de sclérose en plaque expérimentalement induite
Caractérisation d’une nouvelle sous population de lymphocytes auxiliaires,
LTh17 (Park et al., 2005. Nature Immunology.)
2
Contexte
Aspects
fonctionnels
Réponse immunitaire et différenciation des lymphocytes T
RI et
différenciation
Tissu
Reconnaissance par le SI
Entrée
Macrophage
(rupture de la barrière
&épithéliale)
Lymphocyte B
Pathogène porteur de
motif(s) antigénique(s)
Migration vers
les organes
lymphoïdes
secondaires
Cellule
dendritique
Expression d’un
peptide immunogène
au CMH II
Expression au CMH I d’un peptide immunogène
par cross-présentation (Ex. virus)
Circulation
Organe lymphoïde secondaire
Présentation à des LT CD8+
naïf ayant un TCR spécifique
lymphatique
1
Présentation à des LT CD4+
naïf ayant un TCR spécifique
HEV
LICOS
ICOS
Activation des LT8 en LT8
cytotoxique et de LT4 en
LTh0
Tissu
TCD8+ activée
Th0
CYTOTOXICITE
Th1
?
Th2
IL-17
?
Contexte
Aspects
fonctionnels
RI et
différenciation
Les lymphocytes T auxiliaires
Souspopulation
TH1
TH2
Fonction
Activation de la fonction microbicide
des macrophages
Activation des LB présentateurs
d’Antigènes et commutation
isotypique
Activation des LB présentateur d’Antigène et
commutation isotypique (IgE +++)
Sécrétion
IFNγ
IL-2
IL-4
IL-5
IL-13
LT helpers
Activation
(signal3)
IFNγ
IL-12
IL-4
STAT-6
(Cellules dendritiques,
macrophages, cellules NK)
Récepteur JAK (RTK)
STAT-1
GATA-3
(FT)
C-MAF
IL-4
T-bet (FT)
IFNγ
+
r. IL-12
STAT-4
Expansion/différenciation
3
Contexte
Interleukine 17
Inflammation
et médiateurs
EAE
Experimental autoimmune encephalomyelitis
. Modèle de sclérose en plaque expérimentalement induite
. Injection de MBP ou MOG (constituants de la
myéline et des oligodendrocytes) d’une espèce
différente => immunisation => production de
LT autoréactifs
. Infiltration leucocytaire au sein du CNS
. Destruction des gaines de myéline des fibres
nerveuses et lésions multiples au niveau du
SNC.
= Modèle animal de sclérose en plaque.
4
Contexte
Interleukine 17
Inflammation
et médiateurs
EAE
SPACH K. M, 2004. Gene expression analysis suggests that 1,25 –dihydroxyvitamin D3 reverses EAE
by stimulating inflammatory cell apoptosis. Physiologycal Genomics, 18:141-151.
5
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche expérimentale
Démarche
Hypothèse initiale :
L’IL-17 est exprimée par une sous-population de lymphocytes Thelpers
Mode de différenciation
des lymphocytes TH-17
?
Régulation de la
différenciation en
LTH17?
Implication dans la mise
en place d’un contexte
inflammatoire
Existence d’un pool de
cellules productrices ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vitro?
Rôle de l’IL-17?
Ce pool est-il restreint au
LT4 ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vivo ?
IL-17 et pathogénèse de
l’EAE?
Particularité du signal 2,
spécifique de cette voie de
différenciation ?
Rôles des complexes
transcriptionnels ?
Influence du traitement
anti-IL-17 sur les LT
reconnaissant MOG
Régulation de l’expression
de IL-17 par les LTCD4+
effecteur/mémoire ?
Raison du recrutement des
LT autoréactifs et des
macrophages dans le SNC
Second modèle :
IL-17 et inflammation
pulmonaire
6
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche expérimentale
Démarche
Mode de
différenciation
Hypothèse initiale :
L’IL-17 est exprimée par une sous-population de lymphocytes Thelpers
Mode de différenciation
des lymphocytes TH-17
?
Existence d’un pool de
cellules productrices ?
Ce pool est-il restreint au
LT4 ?
Particularité du signal 2,
spécifique de cette voie de
différenciation ?
7
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Souris B6 ( C57BL/6)
Mode de différenciation des LTh-17
Question 1 :
Y-a-t-il une un pool de cellules productrices d’IL-17 ?
Deux contrôles :
- Nonimm, contrôle
négatif assurant du
taux basal d’expression
des cytokines
- CFA, contrôle négatif
assurant que la réponse
n’est pas lié à l’adjuvant
seul.
Immunisation
avec peptide MOG
+ adjuvant CFA
Délai de 7 jours
Extraction des OL IIr
(rate et ganglions)
Parmi les LT CD4+, une souspopulation produirait de l’IL17 et serait différente de
celle produisant l’IFNγ (Th1)
Restimulation avec
MOG
Mesures de la présence
de cytokines
intra/extracellulaire
a) Mesure par ELISA
de cytokines
extracellulaires
b) Détection par cytométrie de
flux de cytokines intracellulaires
de LTCD4+
8
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Souris B6 ( C57BL/6)
Mode de différenciation des LTh-17
Question 2 :
Ce pool de cellules productrices d’IL-17 est-il restreint au LT CD4+ ou
bien concerne-il les LT CD8+?
Immunisation
avec protéine KLH
induisant réponse
LT CD8 et CD4
Expression de
IFNγ
Expression de
IL-17
LT CD8+ CD4-
+++
-
Extraction des OL IIr
(rate et ganglions)
LT CD8- CD4+
+++
+++
Détection de cytokines
intracellulaires
Ainsi, les LT CD8+ n’expriment pas d’IL-17 même
une fois activés. L’expression est donc restreinte à
certains LT CD4+
Figure 1c Détection de cytokines
intracellulaires par cytométrie de
flux dans cellules CD4 ou CD8
9
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Mode de différenciation des LTh-17
Question 3 :
Quel mécanisme de co-stimulation est nécessaire pour une
différenciation vers des LT CD4+ exprimant de l’IL-17?
Souche transgénique
B6 WT
Souche transgénique
B6 ICOS-/-
Sélection de LT4 in vitro
LT4 naïf TCR –OVA
ICOS-/-
LT4 naïf TCR –OVA
ICOS+/+
Culture en présence de l’Antigène (ovalbumine)
CPAg B7+/+
CPAg B7-/-
10
Lavage
Stimulation non spécifique par anticorps anti-CD3
LT4 TCR –OVA
ICOS+/+
LT4 TCR –OVA
ICOS-/ELISA (SURNAGEANT)
11
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Souris B6 ICOS+/+ ou
ICOS -/Sélection de LT4 TCROVA (OTII cells)
Culture en présence
de l’antigène
(ovalbumine)
Lavage
Stimulation LT4 par
anticorps anti-CD3
Détection de cytokines
par ELISA
Mode de différenciation des LTh-17
Question 3 :
Quel(s) mécanisme(s) de co-stimulation sont nécessaire(s) pour une
différenciation vers des LT CD4+ exprimant de l’IL-17 in vitro?
Expression
d’IFNγ
Expression de
IL-4
Expression de
IL-17
B7WT et ICOS +/+
(témoin positif)
++
+++
+++
B7KO et ICOS +/+
+
+
+
B7WT et ICOS -/-
+++
+/-
+
B7KOet ICOS -/(témoin négatif)
-
-
-
Sous-population
de LTh associé
LTh1
LTh2
LTh17 ?
Les partenaires de co-stimulation sont requis de manière
différentielle dans la polarisation des différentes souspopulations de LTh.
B7 et ICOS sont nécessaires pour l’expression de IL-17
Figure 1d Détection de cytokines
extracellulaires par ELISA.
12
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Mode de différenciation des LTh-17
Démarche
Mode de
différenciation
Souches WT ou
déficientes pour B7
et/ou ICOS
Question 3 :
Quel(s) mécanisme(s) de co-stimulation sont nécessaire(s) pour une
différenciation vers des LT CD4+ exprimant de l’IL-17 in vivo?
Expression
d’IFNγ
Expression de
IL-4
Expression de
IL-17
B7KOet ICOS -/-
-
-
-
Immunisation avec
KLH (+ CFA, adjuvant)
B7KO et ICOS +/+
+
+
+
B7WT et ICOS -/-
+++
-
+
Rappel
B7WT et ICOS +/+
++
+++
+++
Détection de cytokines
splénique par ELISA
Résultats très similaires à ceux trouvés in vitro :
La différenciation d’une sous-population lymphocytaire
sécrétant de l’IL-17 dépend à la fois des deux partenaires de
co-stimulation CD28 et ICOS, à l’inverse des LTh1 par
exemple qui n’auraient besoin que d’ICOS.
Figure 1f Détection de cytokines spléniques par ELISA
en fonction de la concentration en antigène.
13
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de différenciation des LTh-17
Mode de
différenciation
BILAN
LICOS
ICOS
LT sécrétant IL-17
LTh1 sécrétant INFγ
14
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche expérimentale
Démarche
Hypothèse initiale :
L’IL-17 est exprimée par une sous-population de lymphocytes Thelpers
Mode de différenciation
des lymphocytes TH-17
?
Régulation de la
différenciation en
LTH17?
Existence d’un pool de
cellules productrices ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vitro?
Ce pool est-il restreint au
LT4 ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vivo ?
Particularité du signal 2,
spécifique de cette voie de
différenciation ?
Rôles des complexes
transcriptionnels ?
15
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Régulation de la différenciation en LTh-17
Question 1 :
Quel environnement en cytokines est nécessaire pour induire ou inhiber in vitro
la différenciation en un pool lymphocytaire sécréteur d’IL-17 ?
OTII cells
Activation
(incubation en
présence
d’ovalbumine) en
condition variables
Rappel et activation
médiée par Ac anti-CD3
Détection de la
production de cytokines
par ELISA et cytométrie
de flux
Figure 2a. Détection de cytokines extracellulaires par ELISA en fonction des conditions.
La neutralisation différentielle de cytokines conduit à la détection de cytokines différentes
et donc de sous-populations lymphocytaires sécrétrices différentes:
- Ac anti-IFNγ => LTh2
- Ac anti-IL4 => LTh1
Phénomène d’auto-entretien des pools sécréteurs respectifs.
- Ac anti IL-4, anti-IFNγ, + IL-23 => LT sécréteur de IL-17
Exclusion mutuelle dans la régulation des différentes différenciations: régulation négative
de la différenciation des LTh17 en présence de LTh1/2. IL-23 semble avoir un rôle
spécifique sur LTh-17.
16
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Régulation de la différenciation en LTh-17
Question 2 :
Quel environnement en cytokines est nécessaire pour induire ou inhiber in vivo
la différenciation en un pool lymphocytaire sécréteur d’IL-17 ?
Souris IFNγ -/Immunisation
(MOG +CFA)
+ Restimulation ex
vivo
En l’absence d’IFNγ in vivo, augmentation de la sécrétion d’IL17 et donc augmentation du pool de LTh-17. L’IFNγ est bien à
l’origine d’une régulation négative de la différenciation en
LTh17
Détection de la
production de cytokines
extracellulaires
par ELISA et
intracellulaires par
cytométrie de flux
Figure 2b. Détection de cytokines
extracellulaires et intracellulaire par
respectivement ELISA et cytométrie de flux.
17
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Régulation de la différenciation en LTh-17
Démarche
Question 3 :
Mode de
différenciation
Quel est le rôle des voies de transcription connues dans la différenciation en
LTh17 : STAT6 et STAT4 ?
Régulation de
différenciation
Stat4-/-
Souris Balb/c
ou Stat6-/-
Immunisation
(KLH +CFA)
+ Restimulation ex
vivo
Détection de la
production de cytokines
extracellulaires
par ELISA et
intracellulaires par
cytométrie de flux
Expression d’IFNγ
STAT4-/-
STAT6-/-
Sécrétion d’IL-4
inchangé
diminution
Sécrétion d’IFNγ
diminution
inchangé
Sécrétion d’IL-17
inchangé
inchangé
Les voies faisant intervenir STAT6/4 n’interviennent pas dans
la différenciation de LTh17
Figure 2c. Détection de cytokines spléniques par ELISA
en fonction de la concentration en antigène.
18
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Régulation de la différenciation en LTh-17
Question 3 :
Quel est le rôle des voies de transcription connues dans la différenciation en
LTh17 : T-bet ?
Souris B6 T-bet-/-
En absence du FT :
Immunisation
(MOG+CFA)
+ Restimulation ex
vivo
Détection de la
production de cytokines
extracellulaires
par ELISA et
intracellulaires par
cytométrie de flux
-
concentration en IFNγ extracellulaire et intracellulaire plus
faible donc la différenciation d’un pool LTh1 est moindre
(résulat attendu).
-
concentration en IL-17 plus élevée soit lié à
- Régulation négative de la part de ce FT
- La diminution en LTh1 qui n’inhibe pas la
différenciation en LTh17
Figure 2b. Détection de cytokines
extracellulaires et intracellulaire par
respectivement ELISA et cytométrie de flux.
19
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Régulation de la différenciation en LTh-17
Démarche
Question 3 :
Mode de
différenciation
Quel est le rôle des voies de transcription connues dans la différenciation en
LTh17 : c-MAF?
Régulation de
différenciation
Souris B6 ICOS+/+ ou
ICOS -/-
Purification de LT
CD4+
Transfection gène
codant pour FT c-Maf
ou non
Les cellules portant le transgène de c-Maf et exprimant
ainsi le FT sécrète davantage d’IL-4 et bien moins de IL-17.
c-Maf réguleraient négativement la différenciation des
LTh17 et de manière directe
(pas de manière indirecte dans le cas où provoquerait la
différenciation de LTh2 qui inhiberaient par sécrétion d’IL-4 la
différenciation en LTh17, puisqu’ici on utilise un transgène)
Activation médiée par Ac
anti-CD3 et APC wt
ELISA
Figure 1e. Détection de cytokines de LT CD4+ par ELISA
en fonction de la concentration en antigène.
20
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Régulation de la différenciation en LTh-17
Mode de
différenciation
BILAN
Régulation de
différenciation
LTh1
c-Maf
IFNγ
LTh17
LTh2
IL-4
c-Maf
Les évènements ayant un rôle régulateur de la différenciation des LTh17 sont différents de
ceux des LTh1/2 (FT mis en jeu)
21
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche expérimentale
Démarche
Hypothèse initiale :
L’IL-17 est exprimée par une sous-population de lymphocytes Thelpers
Mode de différenciation
des lymphocytes TH-17
?
Régulation de la
différenciation en
LTH17?
Existence d’un pool de
cellules productrices ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vitro?
Ce pool est-il restreint au
LT4 ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vivo ?
Particularité du signal 2,
spécifique de cette voie de
différenciation ?
Rôles des complexes
transcriptionnels ?
Régulation de l’expression
de IL-17 par les LTCD4+
effecteur/mémoire ?
22
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Régulation des
LTh17
Régulation de l’expression de IL-17 par des LTh17 effecteurs /
mémoires
Figure 3.
Détection d’IL17 par ELISA.
Trie des LT4
effecteurs/mémoire
(CD4+ / CD62Llow) par
FACS
STIMULI DIVERS
Détection d’IL-17 par
ELISA
23
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de l’expression de IL-17 par des LTh17 effecteurs /
mémoires
Régulation de
différenciation
BILAN
Régulation des
LTh17
IL-4
IFNγ
IL-23
TCR/CD28
Expression
IL-17
LTh
17
Pas d’expression
d’IL-17
24
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche expérimentale
Démarche
Hypothèse initiale :
L’IL-17 est exprimée par une sous-population de lymphocytes Thelpers
Mode de différenciation
des lymphocytes TH-17
?
Régulation de la
différenciation en
LTH17?
Implication dans la mise
en place d’un contexte
inflammatoire
Existence d’un pool de
cellules productrices ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vitro?
Rôle de l’IL-17?
Ce pool est-il restreint au
LT4 ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vivo ?
IL-17 et pathogénèse de
l’EAE?
Particularité du signal 2,
spécifique de cette voie de
différenciation ?
Rôles des complexes
transcriptionnels ?
Influence du traitement
anti-IL-17 sur les LT
reconnaissant MOG
Régulation de l’expression
de IL-17 par les LTCD4+
effecteur/mémoire ?
Raison du recrutement des
LT autoréactifs et des
macrophages dans le SNC
25
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Implication dans l’inflammation
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
LTh1
IFNγ
Activation de l’effet
microbicide
Réponse humorale
médiées par les IgG
LTh2
IL-4
IL-5
IL-13
Réponse humorale médiée
par les IgE
LTh17
IL-17
Inflammation
Pro-inflammatoire
Sur divers type
cellulaire in vitro
?
Régulation de gène
pro-inflammatoire
en synergie avec TNF
26
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Inflammation
Implication dans l’inflammation
Question 1 :
L’IL-17 a-t-elle un impact sur le transcriptome de « cellules-cibles »?
Hygromycine
IL-17
IgG1-tag
Transfection
Lignée cellulaire de
drosophile
ELISA
Production IL-17
Mouse embryonic
fibroblast (MEF)
Dans un contexte IL-17, les fibroblastes synthétisent et sécrètent de l’IL-6
S1. Détection de la sécrétion d’IL-6 par les MEFs en culture
27
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Inflammation
Implication dans l’inflammation
Question 1 :
L’IL-17 a-t-il un impact sur le transcriptome de « cellules-cibles »?
Hygromycine
IL-17
Détection par RT-PCR de
l’expression de gènes
(approche par « gène
candidat »
IgG1-tag
Transfection
Lignée cellulaire de
drosophile
RNA total
Production IL-17
Mouse embryonic
fibroblast (MEF)
Détection par micropuces à ADN de
l’expression de gènes
(approche « systématique »)
Fig4. Détection de la variation différentielle de l’intensité de transcription en présence
d’IL-17 et de cytokines pro-inflammatoires
28
1-Préparation de le micropuce
Distribution de la collection d’ADN c sur un substrat
solide (membrane de nylon ou une lame de verre ) à
des localisations précises
2- Marquage de l’ADN c par incorporation cytosine
marquée par des fluorochromes (Cy3 Ou Cy5) lors de
l’amplification d’ARNm
• Synthèse du brin complémentaire d’ ARN m à partir
d’un nucléotide conjugué au Cy3.
•Utilisation d’ARN m de la seconde population
cellulaire pour la synthèse d’ADN c conjugué avec un
nucléotide conjugué au Cy5.
•hybridation de cible avec sa sonde complémentaire :
une fluorescence verte(Cy3) ou rouge (Cy5) est
détectée . Si les deux s’hybrident à l’ ADN c ,la
fluorescence jaune est détectée.
Noire absence de signal
•l’expression du signal est proportionnelle à l’intensité
d’hybridation donc à l’expression des gènes
29
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Inflammation
Implication dans l’inflammation
Question 1 :
L’IL-17 a-t-il un impact sur le transcriptome de « cellules-cibles »?
Hygromycine
IL-17
Détection par RT-PCR de
l’expression de gènes
(approche par « gène
candidat »
IgG1-tag
Transfection
Lignée cellulaire de
drosophile
RNA total
Production IL-17
Mouse embryonic
fibroblast (MEF)
Détection par micropuces à ADN de
l’expression de gènes
(approche « systématique »)
IL-17 est une cytokines proinflammatoire au sens où elle stimule
l’expression de gènes proinflammatoires.
30
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Implication dans l’inflammation
Démarche
Mode de
différenciation
Question 2 :
L’IL-17 a-t-elle un rôle dans certaines maladies inflammatoires?
Exemple de l’EAE.
Régulation de
différenciation
Inflammation
Souche B6
Immunisations
(MOG)
Infiltration de LT dans le
SNC à partir du 7e jour
Traitement au
9e jour
Fig5a. Variations des signes
cliniques de l’EAE en fonction
du traitement.
Pas de traitement
Symptômes au
jour avec infiltration
de mononucléaires
dans le SNC
Ac anti-IL-17
(1 injections tout les
jours jusqu’au 12e jour)
12e
Symptômes au 18e jour
IgG contrôle
(1 injections tout les
jours jusqu’au 12e jour)
Symptômes au 12e
jour avec infiltration
de mononucléaires
dans le SNC
31
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Traitement
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Ac anti-IL-17
IgG contrôle
S2a. Variations des signes cliniques de
l’EAE en fonction du traitement
Régulation de
différenciation
Inflammation
Evaluation des signes cliniques
Evaluation de l’infiltration tissulaire par
cytométrie de flux basée sur la présence des
marqueurs CD4 (LT4) et CD11 (Macrophage)
Délai dans la survenue des signes cliniques accordées par un
traitement anti-IL17
Régression des signes cliniques et notamment de l’infiltration des
LT4 et des macrophages dans le cadre d’un traitement anti-IL17
S2b. Analyse de l’infiltration tissulaire
32
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Implication dans l’inflammation
Question 3 :
Un traitement anti-IL-17 atténue-t-il l’activation des LT ?
Inflammation
Souche B6
EAE
Souche B6
EAE + Ac anti-IL17
Splénocytes + MOG
Splénocytes + MOG
Après restimulation in vitro,
détection par ELISA des cytokines
pro-inflammatoires sécrétées
Mesure de la prolifération des LT
33
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Fig5b. Détection des cytokines
pro-inflammatoires
Publication
Démarche
S2b. Détection des cytokines
pro-inflammatoires en
fonction de la concentration
en MOG
Impossible d’afficher l’image.
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Inflammation
Pas d’inhibition majeure
de la sécrétion et de la
prolifération des LT
S2c. Analyse de la prolifération de LT
en fonction de la concentration en
MOG.
Impossible d’afficher l’image.
34
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Implication dans l’inflammation
Question 4 :
Quelle est la cause de la diminution de l’infiltration tissulaire?
Inflammation
Tissu cérébral d’une
souche B6
EAE
Tissu cérébral d’une souche B6
EAE + Ac anti-IL17
EXTRACTION ARN total
Real-time RT-PCR afin de
quantifier les transcrits de
certaines chimiokines
Fig5c. Résultat de real-time RT-PCR
Un traitement anti-IL17
neutralise l’IL-17 qui n’induit
plus la sécrétion de
chimiokines par le tissu local
d’où une diminution de
l’infiltration tissulaire
35
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche
Implication dans l’inflammation
Mode de
différenciation
Régulation de
différenciation
Inflammation
IL-17
INDUCTION
LTh17
effecteur
Sécrétion de
chimiokines
Infiltration tissulaire
de macrophages
INFLAMMATION
Circulation
36
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Démarche expérimentale
Démarche
Hypothèse initiale :
L’IL-17 est exprimée par une sous-population de lymphocytes Thelpers
Mode de différenciation
des lymphocytes TH-17
?
Régulation de la
différenciation en
LTH17?
Implication dans la mise
en place d’un contexte
inflammatoire
Existence d’un pool de
cellules productrices ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vitro?
Rôle de l’IL-17?
Ce pool est-il restreint au
LT4 ?
Rôle de cytokines au cours
du développement des
LTH17 in vivo ?
IL-17 et pathogénèse de
l’EAE?
Particularité du signal 2,
spécifique de cette voie de
différenciation ?
Rôles des complexes
transcriptionnels ?
Influence du traitement
anti-IL-17 sur les LT
reconnaissant MOG
Régulation de l’expression
de IL-17 par les LTCD4+
effecteur/mémoire ?
Raison du recrutement des
LT autoréactifs et des
macrophages dans le SNC
Second modèle :
IL-17 et inflammation
pulmonaire
37
But: détermination les conséquences chronique de surexpression de IL17
Expérience in vivo: Production et analyse des-IL17-souris transgéniques CC10 .CC10–IL-17
- Fig a Construction de CC10-IL-17
- Fig b ELISA de l'IL-17 contenu dans le liquide de lavage broncho-alvéolaire recueillis
auprès des souris transgéniques (Tg +) et des souris non transgéniques(Tg -).
Construction de Cc 10 IL17
Présence de IL17 dans le
liquide broncho alvéolaire.
Surexpression des
chemokines
38
Comparaison histologique du tissu pulmonaire
10 mois
5 mois
Fig f: présence de fine cristal
dans le bronchiole
Production de
mucus
Fig e:- production de mucus
quantité importante de
dans les cellules épithéliales
collagène
-infiltration et
sur le
accumulation des cellules
mononucléaires
sub épithélium de
bronchiole
39
Expérience:
RT PCR :traitement de MLE12 cellule avec IL17 Ig ,TNFγ et ILβ pendant 6
H
I L17 Ig , IFNγ et IL1 β profil d’expression des similaire
des chemokines et
des métallo protéinases
CSF2 facteur de stimulation des
granulocytes
40
IL 17 induit directement la production de
cytokines par les cellules épithéliales et
augmente l’adhésion de l’expression de ICAM
donc l’adhésion des cellules ,proinflammatoires
41
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Test ELISA
Publication
Annexes
42
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Real-time PCR
Publication
Annexes
43
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Annexes
Figure 1
44
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Annexes
Figure 2
45
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Figure 3
Annexes
46
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Annexes
Figure 4
47
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Annexes
Figure 5
48
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Figure 6
Annexes
49
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Sup. Data S1
Annexes
50
Contexte
Interleukine 17
et inflammation
Publication
Sup. Data S2
Annexes
51