2.2. (2,5 points)
- réalisation d’un frottis sur une lame avec une suspension bactérienne ou un prélèvement
(séchage, fixation à l’alcool ou par la chaleur) ;
- coloration primaire au violet de gentiane (1 mn) et mordançage au lugol (1 mn) le cytoplasme
de toutes les bactéries est alors violet ;
- décoloration à l’éthanol pendant quelques secondes : les bactéries à paroi épaisse conservent le
complexe violet-lugol mais les bactéries à paroi fine sont décolorées ;
- après rinçage à l’eau, le frottis est contre-coloré avec de la fuchsine : les bactéries décolorées
précédemment deviennent roses ;
- lors de l’observation microscopique, les bactéries violettes sont dites « Gram + » ; les bactéries
roses sont dites « Gram – ».
2.3.
2.3.1. composant : peptidoglycane.
1. pont interpeptidique ; 2. N-acétyl glucosamine ;
3. acide N-acétyl muramique ; 4 : pentapeptide (2,5 points)
2.3.2. Fixation sur le dipeptide d’alalnine (0,5 point)
2.4.
2.4.1. La transpeptidase catalyse la formation du pont interpeptidique. (0,5 point)
2.4.2. Toutes les -lactamines (pénicillines, céphalosporines) (1,5 point)
2.4.3. Résistance par production de -lactamase (inactivation de l’antibiotique) (1 point)
2.5. (4 points)
2.5.1. Une souche bactérienne est inoculée dans un milieu de culture liquide. La suspension
obtenue est introduite dans des tubes (ou des puits) contenant différentes
concentrations d’antibiotiques à tester. Généralement, deux concentrations sont
soumises à l’essai :
- une concentration « faible » c ou concentration critique inférieure (taux sanguin
d’antibiotique obtenu pour une administration d’une dose normale) ;
- une concentration « forte « C ou concentration critique supérieure (taux sanguin
d’antibiotique obtenu pour une administration d’une dose forte)
Après incubation, un trouble dans le tube (ou le puits) indique que le germe s’est développé
malgré la présence de l’antibiotique ; un contenu limpide indique l’inhibition du germe par
l’antibiotique.
- si CMI < c, le germe est sensible ;
- si CMI > C, le germe est résistant ;
- si c < CMI < C, le germe est intermédiaire.
2.5.2. Témoin : culture dans les cupules, l’antibiogramme peut être lu. Vancomycine : culture
aux concentrations c et C ; la souche est résistante (CMI > 16 mg/L).