TP Microbiologie Générale BCG-S4 : Techniques Pratiques & Isolement

UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE
FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES DE BENI
MELLAL
DEPARTEMENT : SCIENCES DE LA VIE
TRAVAUX PRATIQUES DE LA MICROBIOLOGIE
GENERALE
BCG-S4
Responsable
Pr. Azeddin EL BARNOSSI
APPRENDRE LES TECHNIQUES
DE LA MICROBIOLOGIQUE PRATIQUE
Année universitaire : 2023-2024

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PROGRAMME
INTRODUCTION
Règles à suivre au cours des travaux pratiques de microbiologie
Matériel utilisé en microbiologie
PREMIERE SEANCE
MISE EN EVIDENCE DES MICROORGANISMES DE L’ENVIRONNEMENT ET
TECHNIQUES D’ENSEMENCEMENT DES MILIEUX DE CULTURE LIQUIDE
I- Mise en évidence des microorganismes de l’environnement
I.1- But
I.2- Matériel
I.3- Procédure
I.3.1- Source de prélèvements
I.3.2- Manipulation
I.4- Incubation
I.5- Lecture des résultats
II- Techniques d’ensemencement des milieux de culture liquide
II.1- Principe
II.2- But
II.3- Matériel
II.4- Mode opératoire
II.5- Lecture des résultats
DEUXIEME SEANCE
TECHNIQUES D’ENSEMENCEMENT DES MILIEUX DE CULTURE SOLIDE ET
DENOMBREMENT DES MICROORGANISMES
I- Principe
II- But
III- Techniques d’ensemencement d’un milieu solide par striation ou méthode de quadrant
III.1- Matériel
III.2- Mode opératoire
III.3- Lecture des résultats
IV- Dénombrement des microorganismes du sol
IV.1- Prélèvement de l’échantillon
IV.2- Préparation de la suspension mère
IV.3- Préparation des suspensions-dilutions
IV.4- Techniques d’ensemencement utilisées
IV.4.1- Méthode d’étalement en surface
IV.4.1.1- Matériel
IV.4.1.2- Mode opératoire
IV.4.2- Méthode d’étalement en profondeur (ensemencement dans la masse)
IV.4.2.1- Matériel

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IV.4.2.2- Mode opératoire
IV.4.3- Lecture des résultats TROISIEME SEANCE
ISOLEMENTS DES SOUCHES BACTERIENNES PAR DES MILIEUX SELECTIFS
ET DIFFERENTIELS
I- Introduction
II- But
III- Matériel
IV- Isolement des Staphylocoques
IV.1- Introduction
IV.2- Nature du milieu de culture
IV.3- Mode opératoire
IV.4- Lecture des résultats
V- Isolement des coliformes
V.1- Introduction
V.2- Nature du milieu de culture
V.3- Mode opératoire
V.4- Lecture des résultats
VI- Isolement des Bacillus
VI.1- Introduction
VI.2- Nature du milieu de culture
VI.3- Mode opératoire
V.I.4- Lecture des résultats QUATRIEME SEANCE
MORPHOLOGIE ET OBSERVATION MICROSCOPIQUE DES
MICROORGANISMES
I- Introduction
II- But
III- Observation de l’état frais des levures (Frottis frais)
III.1- But
III.2- Matériel
III.3- Mode opératoire
III.4- Lecture des résultats de l’observation au microscope
IV- Coloration de Gram (Frottis sec)
IV.1- But
IV.2- Matériel
IV.3- Mode opératoire
IV.4- Lecture des résultats de l’observation au microscope
V- Coloration des spores
V.1- But
V.2- Matériel
V.3- Mode opératoire
V.4- Lecture des résultats de l’observation au microscope
Liste des milieux de culture

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INTRODUCTION
La microbiologie est la science qui étudie les microorganismes. Ces derniers sont des êtres
vivants de petite taille qui ne peuvent être vues à l’œil nu (quelques protistes unicellulaires sont
visibles à l’œil nu). Ils ne peuvent donc être observés qu’à l’aide d’un microscope. Les
microorganismes se distinguent les uns des autres par leur forme, leur taille et leur mode de vie.
La majorité sont inoffensifs, certains même indispensables à notre digestion. Les
microorganismes apportent de nombreux avantages à l’homme par la production des produits
alimentaires, des antibiotiques, des vaccins, des vitamines, des enzymes et beaucoup d’autres
produits importants. Certains microorganismes sont nuisibles à la santé humaine et se trouvent
dans un environnement pollué.
Les microorganismes constituent un groupe très diversifié, ils existent à l’état de cellule isolée
ou en groupe. Ils sont aussi désignés sous le nom de « microbes » qui est un terme générique
et non scientifique visant les bactéries, les actinomycètes, les levures, les moisissures, les
algues, les protozoaires et les virus.
Les microorganismes sont rencontrés dans tous les types d’environnement présent dans la
nature. Ils se trouvent dans le sol, l’eau, l’air, mais aussi dans des environnements plus hostiles
tel que les pôles, les déserts, le fond des océans, etc. De nombreux microorganismes sont
associés aux plantes ou aux animaux avec lesquels ils peuvent entretenir des relations de
symbiose, de commensalisme ou de parasitisme. Certains microorganismes peuvent être
pathogènes ou phytopathogènes, c’est-à-dire entrainer une maladie chez les plantes ou les
animaux.
Les objectifs des travaux pratiques sont :
 Se familialiser avec un laboratoire de microbiologie, son matériel et son
fonctionnement, etc.
 Recherche et mise en évidence des microorganismes de l’environnement : air, sol,
paillasse, etc.
 Pratiquer les techniques d’ensemencement des milieux de culture liquides et solides.
 Apprendre les techniques d’isolement des bactéries sur des milieux sélectifs et
différentiels.
 Apprendre les techniques d’observation microscopique et coloration de Gram et de la
spore.

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REGLES A SUIVRE AU COURS DES TRAVAUX PRATIQUES
DE MICROBIOLOGIE
Les manipulations microbiologiques telles que : ensemencement, isolement,
coloration, observation, identification doivent être effectuées avec soin en appliquant
les règles suivantes :
Le port d’une blouse blanche et propre est obligatoire.
Ne jamais oublier de se laver les mains avant et après chaque séance de TP.
Travailler sur une paillasse dégagée au maximum et qui pourra être facilement
désinfectée.
Désinfecter les paillasses avant et après chaque période de travaux pratiques en
employant un antiseptique efficace (Eau de Javel).
Désinfecter les mains avec de l’alcool à 70°.
Avant de commencer à manipuler, ranger et disposer, convenablement le matériel pour
éviter les maladresses.
L'étudiant (e) aux chevaux longs verra à les attacher obligatoirement surtout lors
d’un travail exigent l'emploi d’un bec Bunsen.
Eviter de porter ses doigts ou tout objet à sa bouche.
Penser que chaque pipette, ou chaque instrument qui a été mis en contact avec les
germes doit immédiatement être déposé dans le bac. Les objets métalliques doivent
être correctement flambés sur une flamme.
Eviter de laisser les becs Bunsen allumés inutilement.
Pendant les manipulations, éviter de parler, notamment lorsque des ensemencements
sont faits, éviter également de se déplacer inutilement.
Ne jamais toucher avec les mains la partie de bouchon de coton qui pénètre dans le
tube. Eviter de déposer ce bouchon sur la paillasse.
Déposer tout matériel qui n’est pas utile, dans les récipients destinés à cette fin.
Maintenir les récipients ouverts le moins longtemps possible pour éviter la sédimentation
des poussières. Pour la même raison, maintenir les tubes (par conséquent les pipettes)
inclinés le plus horizontalement possible.