/ . Embryol. exp. Morph., Vol. 12, Part 4, pp. 651-664, December 1964 Printed in Great Britain Induction de l'endoderme pre-hepatique par le mesoderme de Faire cardiaque chez Tembryon de poulet par NICOLE LE DOUARIN1 Laboratoire d'Embryologie experimentale du College de France Directeur: Professeur Et. Wolff AVEC DEUX PLANCHES D A N S des travaux anterieurs (Le Douarin, 1961, 1962) j'ai localise les territoires presomptifs du foie chez l'embryon de Poulet de 9 a 15 somites. Ces territoires s'etendent de part et d'autre de l'axe somitique jusqu'au niveau du 15eme somite environ et se reunissent sur la ligne medioventrale dans le repli cardiaque. L'etude des potentialites histogenetiques des differentes regions de ces aires hepatiques a montre que seules les parties contenant le repli cardiaque peuvent fournir du foie lorsqu'elles sont isolees et transplantees en greffes coelomiques (Le Douarin, 1964). II est apparu ainsi que le territoire presomptif endodermique du foie n'est pas aussi etendu que le territoire mesodermique. II est localise des un stade precoce dans la levre anterieure de l'ombilic intestinal (Text-fig. 1). Au stade de 20 a 22 somites, la premiere ebauche hepatique apparait dans la levre anterieure de l'ombilic intestinal sous la forme d'une evagination de l'endoderme (Keibel et Abraham, 1900; Brouha, 1898; Choronshitzky, 1900; Hildebrandt, 1902; Kingsbury, Alexanderson et Kornstein, 1956). Cette evagination donne, peu apres, naissance a deux bourgeons epitheliaux qui, par rapport au ductus venosus, sont l'un cranial et l'autre caudal. C'est a partir de ces bourgeons que se formeront les travees de cellules hepatiques qui envahissent les villosites mesodermiques du septum transversum. J'ai montre qu'il est possible d'isoler experimentalement une partie du mesenchyme hepatique en empechant son invasion par les travees de cellules epitheliales endodermiques (Le Douarin, 1962, 1963, 1964). J'obtiens ce resultat en placant un obstacle mecanique transversal dans la partie anterieure du territoire presomptif du mesenchyme hepatique chez des embryons de 9 a 13 somites. Ayant ainsi isole la composante mesodermique de l'ebauche du foie, j'ai pu etudier son role dans l'organogenese hepatique et en particulier dans revolution 1 Adresse de Vauteur: Laboratoire d'Embryologie experimentale, College de France, 49 bis Avenue de la belle Gabrielle, Nogent-sur-Marne, France. 652 N. LE DOUARIN de l'endoderme (Le Douarin, 1963, 1964): le mesenchyme hepatique exerce une double action sur l'ebauche epitheliale du foie en stimulant la proliferation de ses cellules et en induisant leur differentiation en hepatocytes. Cependant, le mesenchyme propre du foie ne peut exercer cette action inductrice que sur un territoire endodermique deja determine. En effet, il s'est revele incapable d'induire la formation de cellules hepatiques a partir de fragments d'endoderme digestif ou vitellin preleve chez des embryons de 10 a 20 somites. aire presomptive du :.•.•.•• mesenchyme hepatique. MM» Endoderme $w$ hepatique. TEXT-FIG. 1. Embryon de 15 somites en vue ventrale montrant la repartition des aires presomptives endodermique et mesodermique du foie. J'ai cherche a quel stade et sous quelle influence s'effectue la determination de l'endoderme hepatique. I. Potentialites histogenetiques de Vendoderme hepatique presomptif a diffirents stades du developpement METHODE Pour savoir si un fragment d'endoderme est determine a fournir du foie, je le greffe dans l'aire presomptive du mesenchyme hepatique chez un embryon de induction de V endoderme pre-hepatique 653 9 a 13 somites. La greffe est effectuee en arriere d'un obstacle place vers le tiers anterieur de l'aire hepatique laterale droite. Cet obstacle empeche l'invasion du mesenchyme de Phote par ses propres travees endodermiques. Dans des experiences anterieures j'avais utilise un fragment de membrane coquilliere inseree dans un fente transversale interessant les trois feuillets embryonnaires. Cette methode entraine un fort pourcentage de mortalite, c'est pourquoi j'ai Z.F. Z.exc. Z.M.H. 2. Schema de l'intervention pratiquee sur un embryon de 12 somites en vue d'obtenir le developpement du mesenchyme hepatique depourvu de cordons epitheliaux. Une partie de l'aire laterale est excisee (Z. exc.) du cote droit au niveau des somites 3 a 6. Cette excision joue le role d'un obstacle. En arriere de la region operee, l'endoderme dont on veut eprouver les potentialites histogenetiques est greffe (Gr.), il se developpe au contact du mesenchyme hepatique de l'hote. Z.F. = zone ou le foie se differencie. TEXT-FIG. cherche a lui substituer un procede permettant d'obtenir une meilleure survie des embryons. J'excise un fragment rectangulaire de l'aire pellucide dans la region anterieure droite du territoire hepatique. Ce fragment s'etend de l'axe somitique a l'aire opaque au niveau des somites 3 a 6 (Text-fig. 2). Chez 1'embryon de 5 jours d'incubation, on peut voir que la cicatrisation a provoque la soudure des trois feuillets embryonnaires au niveau des levres de la plaie. Les mouvements morphogenetiques de ces feuillets ont ete arretes, et la blessure a joue le role d'un obstacle. Ainsi, le repli cardiaque ne se deplace pas vers l'arriere, et l'intestin anterieur reste ouvert ventralement jusqu'a l'ombilic intestinal. Le foie se forme 654 N. LE DOUARIN du cote non opere et, du cote opere, le mesenchyme hepatique reste vide (Planche 1, Figs. A, B et C). L'endoderme hepatique ayant besoin pour evoluer d'etre associe a du mesenchyme homologue, les fragments endodermiques dont on veut eprouver les potentialites en ce qui concerne l'histogenese hepatique sont greffes en arriere du niveau de l'ablation. Deux series experimentales ont ete realisees. 1. L'endoderme du repli cardiaque est preleve chez des embryons de 16 a 5 somites. 2. L'endoderme est preleve dans les aires hepatiques presomptives bilaterales aux stades du prolongement cephalique et du repli cephalique transverse. Association au mesenchyme hepatique de Vendoderme du repli cardiaque d'embryons de 16 a 5 somites L'endoderme hepatique est localise, des un stade precoce du developpement, dans la levre anterieure de l'ombilic intestinal. Au stade de 21 somites, auquel debute l'organogenese du foie, nous savons deja qu'il est apte a reagir a l'influence morphogene du mesenchyme propre du foie en se differenciant et en proliferant. Je me suis demande s'il possede deja cette propriete a des stades plus precoces. Le repli cardiaque preleve chez des embryons de 5 a 16 somites est soumis a l'action de la trypsine (solution a 1 % dans du liquide de Tyrode depourvu de calcium et de magnesium) pendant 20 min. a la temperature de 2°C. environ. Ainsi l'endoderme se decolle du mesenchyme sous-jacent. II est ensuite greffe dans le territoire du mesenchyme hepatique chez un embryon de 10 a 13 somites. L'examen histologique est pratique au 5eme jour de l'incubation de l'hote. Les resultats obtenus sont indiques dans le Tableau 1. On voit que sur 23 cas 2 seulement n'ont pas fourni de foie. L'examen histologique de ces deux exempPLANCHE 1 FIG. A. Coupe transversale d'un embryon de 5 jours d'incubation. Une aire laterale (du cote droit) a ete enlevee au niveau des somites 3 a 6 au stade de 10 somites. La coupe passe au niveau de l'ablation. On voit que la splanchnopleure dans laquelle s'est differencie le gesier (G.) s'est soudee (en S.) a la somatopleure. Le foie (F.) et le poumon (Po.) ne se sont formes que du cote non opere. Le coeur (Co.) est place a gauche. La cavite coelomique gauche est divisee en cavite hepato-enterique (C.H.E.) et pleuro-peiitoneale (C.p.p.). FIG. B. Meme embryon: au-dessous du niveau de l'ablation, le mesenchyme hepatique (M.H.) reste vide de cordons epitheliaux. P.d. = pancreas dorsal. B.H. = Bourgeon hepatique. C.Coe. = Cavite coelomique. Autres abreviations, comme precedemment. FIG. C. Mesenchyme hepatique (M.H.) vu a un plus fort grossissement. E. Coe = Epithelium coelomique. t.m. = travees mesenchymateuses. S.S. = sinus sanguins. Mes. = mesonephros. FIG. D. Mesenchyme hepatique (M.H.) colonise par les cordons epitheliaux de foie (C.H.) issus d'un fragment d'endoderme pre-hepatique greffe dans l'aire presomptive du foie chez un embryon de 10 somites, en arriere de la zone excisee. (Le schema experimental est represente sur la figure 4 du texte). Cet endoderme etait accompagne de cellules du mesoderme precardiaque qui ont suffi a l'induire, et a partir desquelles s'est developpe un nodule de tissu cardiaque (T.C.). J. Embryol. exp. Morph. NICOLE LE DOUARIN Vol. 12, Part 4 {Facing page 654) J. Embryol. exp. Morph. NICOLE LE DOUARIN Vol. 12, Part 4 (Facing page 655) Vinduction de Vendoderme pre-hepatique 655 TABLEAU 1 Evolution de Vendoderme du repli cardiaque preleve chez des embryons de 5 a 16 somites et associe in ovo au mesenchyme hepatique Stades {Nombre de somites) 12al5 7all 5a 6 Nombre de cas 1 6 12 Formation de tissu hepatique r+ 0 6 1 0 6 11 1 laires n'a d'ailleurs pas permis de retrouver le greffon qui vraisemblablement est tombe dans la cavite sous-germinale peu apres son implantation. II apparait done qu'au stade de 5 somites l'endoderme presomptif du foie est determine. Le stade auquel cet endoderme est encore indetermine doit done etre recherche chez des embryons plus jeunes. Association au mesenchyme hepatique de Vendoderme presomptif du foie preleve au stade du prolongement cephalique et du repli cephalique transverse II a ete etabli, en particulier par les travaux de Rawles (1936), que les aires presomptives du foie forment, chez l'embryon de Poulet au stade du prolongement cephalique, deux aires laterales localisees de part et d'autre du prolongement cephalique et s'etendant en arriere jusqu'au tiers anterieur environ de la ligne primitive. J'ai preleve l'aire presomptive du foie au stade du prolongement cephalique age et du repli cephalique transverse ou elle a la meme localisation (Text-fig. 3). Les fragments de blastoderme obtenus sont soumis a l'action de la trypsine en solution a 0,5% dans du liquide de Tyrode sans calcium ni magnesium pendant 20 a 30 min. a froid, comme precedemment. Dans ces conditions, l'endoderme, qui est constitue d'une tres mince couche de cellules cubiques, se decolle du mesoderme auquel il adherait etroitement. La dissociation complete des feuillets PLANCHE 2 FIG. A. Un fragment d'endoderme pre-hepatique preleve au stade du repli cephalique transverse est greffe en arriere de la zone excisee chez un embryon de 10 a 12 somites. (Le schema experimental est represente sur la figure 4 du texte.) A 4 jours \ d'incubation de l'hote, l'endoderme greffe (E.G.) n'est pas completement coapte avec l'endoderme de l'hote (E.H.). Les cellules blessees au moment de la greffe sont en cours d'elimination. m.c. = marques de charbon accompagnant le greffon. M.H. = mesenchyme hepatique. FIG. B. Meme experience. A 5 jours, l'endoderme greffe (E.G.) est completement soude a l'endoderme de l'hote (E.H.) mais le niveau de la soudure (S.) est encore bien visible. FIGS. C et D. Le greffon introduit dans le territoire presomptif du mesenchyme hepatique comportait l'endoderme pre-hepatique et le mesoderme de l'aire cardiaque preleves chez un embryon au stade du repli cephalique transverse. L'endoderme subit l'induction du mesoderme de l'aire cardiaque et fournit un bourgeon epithelial hepatique (B.H.) a partir duquel se developpent des cordons de foie (C.H.) dans le mesenchyme hepatique de l'hote (Fig. C). Dans ce meme mesenchyme s'est developpe a quelques coupes d'intervalle, du tissu cardiaque (T.C.) aux depens du mesoderme precardiaque greffe (Fig. D). 656 N. LE DOUARIN est realisee a l'aide de deux fines aiguilles. Si la moindre union existe encore entre les deux feuillets, l'endoderme peut entrainer quelques cellules mesodermiques. A un stade plus precoce du developpement, le feuillet endodermique est si mince et surtout si peu coherent, qu'il est difficile de le separer convenablement du mesoderme. Le fragment endodermique est greffe dans la region presomptive du mesenchyme hepatique (Text-fig. 3) et l'examen histologique est pratique au 5eme jour de l'incubation de l'hote. 3. Association in ovo du mesenchyme propre du foie et de l'endoderme pre-hepatique preleve au stade du prolongement cephalique. (Legendes comme pour lafigureprecedente.) TEXT-FIG. Dans 25 cas sur 28, l'endoderme greffe ne fournit pas de foie. Dans tous les cas considered, le greffon a ete retrouve grace aux marques de charbon qui l'accompagnaient au moment de la greffe. II a ete introduit dans une fente pratiquee dans les trois feuillets embryonnaires, mais il est retenu par le feuillet de meme nature que lui. On le trouve toujours en effet coapte avec l'endoderme digestif de l'hote, comme on le voit sur les Figs. A et B de la Planche 2. L'endoderme de l'aire hepatique, preleve aux stades du prolongement cephalique et du repli cephalique transverse, se comporte done, transplants dans le mesenchyme hepatique, comme une partie quelconque de l'endoderme digestif. II n'a pas encore subi l'induction le determinant a fournir des cellules de foie, U induction de Vendoderme pre-hepatique 657 c'est pourquoi je l'appellerai endoderme pre-hepatique. Cette induction a lieu entre le stade du repli cephalique transverse et celui de 5 somites. Les travaux de Willier et Rawles (1935) suggerent qu'aux jeunes stades du developpement les histogeneses hepatique et cardiaque sont liees. En effet, dans des experiences de transplantation de blastoderme en greffe chorioallantoidienne, ces auteurs n'observent pratiquement jamais de formation de tissu hepatique en l'absence de tissu cardiaque. Des observations analogues ont ete faites par Dalton (1935), Kume (1935) et Hunt (1937). Ces faits m'ont incitee a etudier l'influence exercee par le mesoderme de l'aire cardiaque sur l'endoderme pre-hepatique. Ces deux tissus ont d'ailleurs aux jeunes stades la meme localisation. 4. Association in ovo du mesenchyme hepatique et de l'endo-mesoderme de l'aire cardio-hepatique preleve au stade du repli cephalique transverse ou du prolongement cephalique. TEXT-FIG. II. Induction de Vendoderme pre-hepatique par le mesoderme de l'aire cardiaque Des fragments de blastoderme identiques a ceux de la serie experimental precedente ont ete preleves. Us ont egalement ete soumis a l'action de la trypsine, mais cette fois seul le feuillet ectodermique a ete enleve. L'endomesoderme a ete greffe dans l'aire presomptive du mesenchyme hepatique (Text-fig. 4). 658 N. LE DOUARIN Sp.P. E.D. E.H.h. Endoderme seul E.H.g. Endoderme + Mesoderme B C TEXT-FIG. 5. Schema des experiences concemant Vinduction primaire de Vendoderme hepatique. A. Potentialites hepatogenetiques de l'endoderme hepatique au stade de 5 somites. Representation schematique de la splanchnopleure (Sp.P.) de l'embryon hote. EUe comprend le mesenchyme hepatique (M.H.); l'endoderme digestif (E.D.) et l'endoderme hepatique (E.H.h.). Un obstacle (Obs.) empeche les cordons hepatiques de l'hote d'envahir la totalite du mesenchyme propre du foie. En arriere de cet obstacle on greffe l'endoderme hepatique presomptif d'un embryon de 5 somites (E.H.g.). Cet endoderme produit des cordons hepatiques (C.H.) au contact du mesenchyme de l'hote. II se constitue du foie en arriere de l'obstacle. L'endoderme hepatique est determine a ce stade. B et C. Influence inductrice du mesoderme de Vaire cardiaque sur Vendoderme pre-hepatique. B. L'endoderme de l'aire hepatique ne fournit pas de foie lorsqu'il est associe au mesenchyme hepatique. II n'est done pas induit a ce stade. C. L'endo-mesoderme de la meme region, associe au mesenchyme hepatique fournit du foie. Ce mesoderme induit l'endoderme pre-hepatique. Les fleches 1 symbolisent ce premier stade de l'induction du foie; elle se produit normalement entre le stade du prolongement cephalique et celui de 5 somites. Linduction de Vendoderme pre-hepatique 659 Le resultat est etudie au 5eme jour de l'incubation de l'hote. Dans 13 cas sur 15 des cordons hepatiques se forment a partir de l'endoderme greffe. Dans les deux cas qui ont fourni un resultat negatif, le greffon s'est mal developpe et presentait une importante necrose. Dans les autres cas, l'endoderme greffe s'est soude a l'endoderme digestif de l'hote et a emis dans le mesenchyme hepatique de ce dernier un bourgeon qui a fourni des cellules hepatiques (Planche 2, Fig. C). On observe en outre que le mesoderme greffe produit du tissu cardiaque en abondance (Planche 2, Fig. D). TABLEAU 2 Evolution de Vendoderme presomptif du foie preleve aux stades du prolongement cephalique et du repli cephalique transverse et associe in ovo au mesenchyme hepatique Nature du greffon Endoderme pre-hepatique seul Endoderme pre-hepatique + Mesoderme de l'aire cardiaque Nombre de cas 28 15 Formation de tissu hepatique , " , + 0 3 25 13 2 II apparait done qu'aux stades consideres les resultats sont totalement differents selon que l'endoderme pre-hepatique est greffe isolement ou en association avec le mesoderme de l'aire cardiaque, comme le montre le Tableau 2. On peut conclure que le mesoderme de l'aire cardiaque exerce une action inductrice sur l'endoderme pre-hepatique. Celui-ci devient alors apte a subir l'action morphogene du mesenchyme propre du foie. La Text-fig. 5 resume les resultats obtenus: la premiere induction a lieu entre le stade du prolongement cephalique et celui de 5 somites (fleches (1) de la Text-fig. 5), la deuxieme beaucoup plus tardive est liee a l'histogenese proprement dite. Les 3 cas aberrants obtenus dans la premiere serie experimentale qui consistait a greffer l'endoderme seul, au stade ou il est encore indetermine, peuvent s'expliquer de la facon suivante: lors de la dissociation de l'endoderme et du mesoderme, quelques cellules mesodermiques sont restees adherentes a l'endoderme et ont suffi a l'induire. Dans deux de ces trois cas, on a pu en effet trouver dans le mesenchyme hepatique de l'hote, a cote des cellules de foie, un petit amas de tissu cardiaque (Planche 1, Fig. D), signant la presence dans le greffon des cellules mesodermiques. J'ai ensuite cherche a preciser le stade auquel s'effectue l'induction de l'endoderme pre-hepatique par le mesoderme de l'aire cardiaque. III. Stade de l'induction de Vendoderme pre-hepatique par le mesoderme de Vaire cardiaque On sait que l'endoderme des regions antero-laterales du blastoderme (Bellairs, 1953) ainsi que le mesoderme pre-cardiaque (De Haan, 1961, 1963) effectuent 43 660 N. LE DOUARIN au cours des jeunes stades du developpement, des mouvements morphogenetiques qui les amenent a se localiser ventralement dans le repli cardiaque. Je me suis demande a quel moment de cette migration s'eifectuait l'induction de l'endoderme pre-hepatique par le mesoderme de l'aire cardiaque. Chez des embryons de 1 a 4 somites, la region anterieure du blastoderme a ete subdivisee en trois parties: la zone du repli endodermique dans laquelle s'insinue le mesenchyme pre-cardiaque, et deux zones laterales posterieures a ce repli et s'etendant jusqu'au niveau du noeud de Hensen (Text-fig. 6). Ces Pl.E. 6. Embryon de 3 somites en vue ventrale. La region anterieure de l'embryon est separee en 3 parties dont on eprouve les potentialites histogenetiques hepatiques: la zone du pli endodermique (Z. PI.) dans laquelle s'insinue le mesenchyme pre-cardiaque (Mes. PC.) et les zones laterales posterieures du pli (Z.P.P1.). En bas a droite, schema d'une coupe sagittale montrant le niveau de la section effectuee pour prelever la region du pli endodermique (Pl.E.). D. = face dorsale; V. = face ventrale. TEXT-FIG. territoires lateraux contiennent l'endoderme pre-hepatique et le mesoderme pre-cardiaque non encore incorpores au pli. II est evident que, par suite de la migration du mesoderme pre-cardiaque et des mouvements morphogenetiques de l'endoderme, ces differents territoires n'ont pas exactement la meme constitution aux stades de 1 et de 4 somites. Ainsi, au stade de 4 somites le mesoderme commence a s'insinuer dans le repli endodermique transversal, et les primordia hepatiques et cardiaques sont dans une plus grande proportion incorpores au pli cardiaque. L induction de Vendoderme pre-hepatique 661 A partir de ces fragments de blastoderme, soumis a l'action de la trypsine, on preleve soit le feuillet endodermique seul, soit l'endo-mesoderme. Les potentialites hepatogenes ont ete eprouvees par la meme methode que precedemment. L'endo-mesoderme des memes regions a ete greffe egalement a titre de controle. Les series experimentales realisees sont resumees dans le Tableau 3. TABLEAU 3 Association au mesenchyme hepatique de Vendoderme et de Vendo-mesoderme de la region anterieure de blastodermes aux stades de 1 a 4 somites Zone du pli Nature de greffon Endoderme+ Mesoder me Endoderme seul Nombre , de cas 10 10 Formation de tissu hepatique " + 0 9 1 2 8 Zone posterieure au pli N Nombre de cas 12 13 , Formation de tissu hepatique * > + 0 12 0 2 11 Les resultats obtenus montrent que ni dans la partie anterieure ni dans la partie posterieure de l'aire hepatique l'endoderme seul ne peut fournir de foie jusqu'au stade de 4 somites inclus. Ceci a 4 cas pres sur23. En effet, comme dans l'experience precedente, un certain nombre de greffons d'endoderme ont probablement ete accompagnes de quelques cellules mesodermiques qui ont suffi a assurer leur induction. Au stade de 4 somites l'induction de l'endoderme pre-hepatique par le mesoderme de l'aire cardiaque n'a pas encore eu lieu. Par contre, comme nous l'avons vu precedemment, au stade de 5 a 6 somites, l'endoderme de la zone du pli est induit. L'induction de l'endoderme pre-hepatique par le mesoderme precardiaque a done lieu au stade de 5 somites environ, lorsque le materiel mesodermique bilateral est sur le point d'effectuer sa soudure sur la ligne medioventrale et que le materiel endodermique est, au moins partiellement, integre a la levre anterieure de l'ombilic intestinal dans laquelle il demeurera jusqu'a la formation du foie. CONCLUSIONS L'ensemble des experiences que j'ai realisees sur Porganogenese du foie chez l'embryon de Poulet montre que deux phenomenes successifs d'induction interviennent dans le developpement de cet organe: le premier, ou induction primaire, provoque la determination de l'endoderme presomptif du foie. II est du au mesoderme de l'aire cardiaque, et s'effectue au stade de 5 somites, lorsque les 2 primordia hepatiques et cardiaques se reunissent sur la ligne medio-ventrale. Cette premiere induction est insufRsante pour entrainer la differenciation des cellules endodermiques en cellules hepatiques. Elle doit etre renforcee par un processus inducteur plus tardif qui active la multiplication des cellules de 662 N. LE DOUARIN l'endoderme deja determinees et provoque leur differenciation. Cette action morphogene peut etre qualifiee d'induction secondaire. Elle est effectuee par le mesenchyme qui entre dans la constitution du foie. Ce dernier provoque la formation des bourgeons endodermiques et a partir de ceux-ci la differenciation des cordons de cellules hepatiques. La Text-fig. 7 resume l'ensemble de ces resultats. stades: PC 21s 5s 1 1 1 1 1 Endoderme •>* Pre-Hepatique 3f Endoderme Hepatique Induit \ Cordons A T3 C Mesoderme de Mesenchyme l'aire Cardiaque Hepatique Hepatiques Tissu Hepatique Tissu Cardiaque TEXT-FIG. 7. RESUME 1. L'endoderme des jeunes bourgeons epitheliaux hepatiques preleve dans la levre anterieure de l'ombilic intestinal au stade de 21 somites est induit a former du foie par le mesenchyme hepatique. Cette induction est necessaire a la differenciation de l'endoderme des bourgeons de foie. Par contre, le mesenchyme hepatique n'induit pas a former des hepatocytes un fragment quelconque d'endoderme digestif prospectif. L'endoderme des bourgeons hepatiques est done determine. 2. J'ai cherche si, avant le stade de 21 somites, l'endoderme hepatique presomptif est deja determine. II est preleve dans la levre anterieure de l'ombilic intestinal chez des embryons de 5 a 16 somites, et associe in ovo au mesenchyme hepatique. II fournit du foie dans ces conditions; il est done deja determine. 3. Aux stades du prolongement cephalique et du repli cephalique transverse, les aires hepatiques et cardiaques sont confondues et situees bilateralement Vinduction de Vendoderme pre-hepatique 663 dans la region anterieure du blastoderme. Deux series experimentales ont ete realisees pour eprouver les capacites hepatogenes de l'endoderme de l'aire presomptive du foie a ce stade. (a) L'endoderme seul de cette region est associe au mesenchyme hepatique. II ne fournit pas de foie; on peut conclure qu'il n'est pas encore determine, il est appele pour cette raison endoderme pre-hepatique. (b) L'endo-mesoderme de cette meme region (endoderme pre-hepatique + mesoderme de l'aire cardiaque) est associe au mesenchyme hepatique. Dans ce cas l'endoderme greffe fournit du foie. On peut conclure que l'endoderme presomptif du foie subit de la part du mesoderme de l'aire cardiaque une action inductrice, entre le stade du prolongement cephalique et celui de 5 somites. Cette induction primaire lui permet d'etre sensible a l'action morphogene plus tardive qu'exerce sur lui le mesenchyme propre du foie (induction secondaire). Deux inductions successives interviennent done dans l'organogenese du foie. 4. A quel moment du developpement l'induction primaire a-t-elle lieu? Les resultats obtenus indiquent que l'endoderme pre-hepatique est induit au stade de 5 somites par le mesoderme de l'aire cardiaque, lorsque les deuxprimordia hepatiques et cardiaques sont sur le point de se reunir sur la ligne medio-ventrale. SUMMARY Induction of pre-hepatic endoderm by mesoderm of the presumptive cardiac region in the chick embryo 1. The endodermal liver primordium which is located in the anterior intestinal portal is determined as early as the 5-somite stage. If, indeed, that primordium is isolated and associated with hepatic mesenchyme it differentiates into liver cords. 2. Until this stage, i.e. from head-process to 4-somite stage, the endoderm of the hepatic area, when it is separated by trypsination from the presumptive cardiac mesoderm, is incapable of differentiating into hepatocytes even when it is associated with homologous hepatic mesenchyme. At these very early stages the endoderm is not yet determined and may be called pre-hepatic endoderm. 3. In contrast, the pre-hepatic endoderm can differentiate into liver cords when it remains in contact with the pre-cardiac mesoderm. Thus the latter is responsible for the determination of the hepatic endoderm. 4. In conclusion liver organogenesis occurs in two steps. The first step— primary induction—involves the determination of the pre-hepatic endoderm under the influence of the mesoderm of the presumptive cardiac area. In a second step the hepatic endoderm differentiates into liver cords; that secondary induction is realized under the stimulus of the mesenchyme of the septum transversum. 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