amplide x - Theradiag

AMPLIDE X
™
Génétique
Diagnostic des pathologies liées à l’X
Theradiag propose un
nouvel outil de biologie
moléculaire
performant
permettant de diagnostiquer
les patients porteurs de
répétitions CGG anormales
Une méthode
RAPIDE
SIMPLE
FIABLE
de diagnostic
du syndrome
de l’X fragile
sur le gène FMR1.
PATHOLOGIES LIÉES AU GÈNE FMR1
3 millions d’européens de tous âges sont touchés par une pathologie liée au gène FMR1
situé sur le chromosome X.
Ces pathologies se caractérisent par des répétitions anormales du codon CGG sur le gène
FMR1.
(CGG)n
<45
Mutation
Normal
45-54
Intermédiaire
55-200
Pré-mutation
>200
Mutation complète
Transmission
Pas de phénotype particulier.
Instabilité possible lors de la transmission.
Conseil génétique indiqué.
Instabilité lors de la transmission.
Risque d'évolution vers une mutation complète.
Conseil génétique indiqué.
Instabilité lors de la transmission.
Risque de transmission de la mutation complète.
Conseil génétique indiqué.
Le syndrome de l’X fragile (FXS)

Chez les patients porteurs d’une mutation complète (plus de 200 répétitions).

Ce syndrome se caractérise par un retard mental plus ou moins important, des
troubles autistiques et des problèmes émotionnels et psychiatriques.

Premier syndrome génétique connu associé à un retard mental et à l’autisme.
Insuffisance ovarienne prématurée liée à l'X fragile (FXPOI)

Chez les patientes portant une pré-mutation (entre 55 et 200 répétitions).

Cause majeure de dysfonctionnement ovarien.
Syndrome d’ataxie et de tremblement lié à l’X fragile (FXTAS)

Chez les patients porteurs d’une pré-mutation (entre 55 et 200 répétitions).

Associé à une démence et à un syndrome parkinsonien après 50 ans.
7 POINTS CLÉS
AMPLIFICATION JUSQU’À 1300 CGG ET QUANTIFICATION PRÉCISE DES RÉPÉTITIONS JUSQU’À 200 TRIPLETS
DÉTERMINATION DE LA ZYGOTIE CHEZ LES PATIENTES
IDENTIFICATION DES TRIPLETS AGG INTERCALÉS
UTILISATION DE QUANTITÉS RÉDUITES D’ADN (20-80 NG)
SENSIBILITÉ ANALYTIQUE DE L’ORDRE DE 1%
TEMPS DE MANIPULATION RÉDUIT (DE L’ORDRE DE 10H DONT 2H DE TEMPS TECHNICIEN)
POSSIBILITÉ DE S’AFFRANCHIR DU SOUTHERN BLOT
UNE TECHNIQUE RAPIDE ET SIMPLE EN 3 ÉTAPES
Méthode moléculaire basée sur :
 L’amplification par PCR.
 L’électrophorèse capillaire.
®
 L’analyse par le logiciel GeneMapper .
Durée moyenne de 10 heures pour un temps
de manipulation réduit.
Sang total
ADN extrait
Temps de manipulation
Temps instruments
Total: environ 10 heures
PCR FMR1
EC*
Analyse
30 min
30 min
30-60 min
6 hrs
1-6 hrs
* Electrophorèse Capillaire
AMPLIFICATION PERFORMANTE DU GÈNE FMR1
Un programme de PCR permettant d’amplifier jusqu’à 1300 répétitions CGG.
Deux PCR au choix :
Une PCR classique permettant d’amplifier le gène FMR1 grâce à deux amorces (sens et
anti-sens).
 Une seconde intégrant une troisième amorce CGG permettant de détecter les insertions
de codon AGG, facteur pronostic positif de la stabilité du gène.

Faible quantité d’ADN nécessaire : 20-80 ng.
Possible sur différents thermocycleurs : ABI 9700, ABI Veriti, MJ PTC-200, Mastercycler
d’Eppendorf, Biometra, Biorad C1000.
EVALUATION DE LA TAILLE DES AMPLICONS PAR ÉLECTROPHORÈSE CAPILLAIRE
L’électrophorèse capillaire permet d’évaluer précisément la taille des fragments amplifiés
jusqu’à 200 répétitions et de détecter les mutations complètes.
Réalisable sur ABI 3130(xl), ABI 3500(xl), ABI 3730(xl) sur des capillaires de 36 ou 50 cm
(POP7 requis).
INTERPRÉTATION FIABLE DES RÉSULTATS
Analyse simplifiée sur le logiciel GeneMapper®, permettant la détection de la zygotie chez
les femmes.
Détection des mutations dites en mosaïque.
ASU76008 - V.01/2013
Sensibilité analytique de l’ordre d’1% en dilution supérieure au southernblot.
Exemple de pré-mutations en « mosaïque »
accompagnées d’une mutation complète
chez une patiente hétérozygote.
Exemple d’une patiente hétérozygote présentant
une mutation complète. Visualisation des codons
AGG intercalés.
Référence
Désignation
Conditionnement
ASU 76008
Amplide X FMR1
100 tests
Asuragen Inc (USA)
Theradiag SA:
4-6 bd de Beaubourg
CS 90136 CROISSY BEAUBOURG
77435 MARNE LA VALLEE CEDEX 2
Tel: +33 (0)1 64 62 10 12
Fax: +33 (0)1 64 62 09 66
email: [email protected]
http://www.theradiag.com/
Lire attentivement les instructions figurant sur l’étiquetage et/ou dans la notice d’utilisation
Technique