RECUEIL INTERNATIONAL DES METHODES D’ANALYSES – OIV
Acide lactique – Méthode enzymatique
OIV-MA-AS313-07 : R2009
3. Réactifs
Eau bidistillée
3.1. Solution tampon pH 10 (glycylglycine 0,6 mole/l ; L-glutamate 0,1 mole/l).
Dissoudre 4,75 g de glycylglycine, 0,88 g d'acide L-glutamique dans environ
50 ml d'eau bidistillée ; ajuster le pH à 10 avec quelques millilitres de solution
d'hydroxyde de sodium 10 M et porter à 60 ml avec de l'eau bidistillée.
La solution reste stable pendant au moins 12 semaines à + 4 °C.
3.2. Solution de nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD) environ 40 × 10-3 M ;
dissoudre 900 mg de NAD dans 30 ml d'eau bidistillée. La solution reste
stable pendant au moins 4 semaines à + 4 °C.
3.3. Suspension de glutamate-pyruvate-transaminase (GPT) à 20 mg/ml. La
suspension est stable pendant au moins un an à + 4 °C.
3.4. Suspension de L-lactate-déshydrogénase (L-LDH) à 5 mg/ml. La suspension
est stable pendant au moins un an à + 4 °C.
3.5. Suspension de D-lactate-déshydrogénase (D-LDH) à 5 mg/ml. La suspension
est stable pendant au moins un an à + 4 °C.
Il est recommandé de procéder, préalablement au dosage, à la vérification de
l'activité de l'enzyme.
Remarque : L'ensemble des réactifs nécessaires pour le dosage est disponible
dans le commerce.
4. Préparation de l'échantillon
Le dosage du lactate s'effectue généralement directement sur le vin sans
décoloration préalable et sans dilution si la concentration en acide lactique est
inférieure à 100 mg/l. Si la concentration du vin en acide lactique est comprise
entre : 100 mg/l et 1 g/l diluer 1/10 avec de l'eau bidistillée ;
1 g/l et 2,5 g/l diluer 1/25 avec de l'eau bidistillée ;
2,5 g/l et 5 g/l diluer 1/50 avec de l'eau bidistillée.
5. Mode opératoire
Remarques préliminaires :
Eviter de toucher avec les doigts la partie de la verrerie qui entre en contact avec le
milieu réactionnel, ceci pouvant être une cause d’apport d’acide L-lactique qui
fausserait le résultat.
La solution tampon doit être ramenée à 20-25 °C avant de procéder au dosage.
5.1. Dosage de l'acide lactique total
Le spectrophotomètre étant réglé sur la longueur d'onde 340 nm, les mesures
d'absorbance se font dans les cuves de 1 cm de trajet optique, l'absorbance zéro
étant réglée par rapport à l'air (pas de cuve sur le trajet optique) ou par rapport
à l'eau.