Tuberculose en Roumanie : Contribution à la mise en évidence... facteurs de risque et des caractéristiques cliniques et biologiques des

THÈSE DE DOCTORAT
Présentée par :
Pacifique NDISHIMYE
Discipline : Biologie
Spécialité : Sciences de la vie et de la Santé
Soutenue le 02/07/2016
Devant le Jury Composé de :
Président
M. YAHYAOUI Ahmed PES Faculté des Sciences, Université Mohammed V de Rabat
Examinateurs
M. SADAK Abderrahim PES Faculté des Sciences, Université Mohammed V de Rabat
M. FOUAD Seghrouchni Docteur Laboratoire d’Immunologie Cellulaire, INH-Rabat
M. SADKI Khalid PES Faculté des Sciences, Université Mohammed V de Rabat
M. BAKRI Youssef PES Faculté des Sciences, Université Mohammed V de Rabat
M. BOURKADI Jamaleddine PES Faculté de Médecine et de Pharmacie, Université
Mohammed V de Rabat
Mme POP Carmen Monica PES Université de Médecine et Pharmacie de Cluj-Napoca
Tuberculose en Roumanie : Contribution à la mise en évidence des
facteurs de risque et des caractéristiques cliniques et biologiques des
patients hospitalisés dans la région de Cluj-Napoca.

Tuberculose - Roumanie - Facteurs de Risque – Interleukine 10 - Lymphocyte T Régulateur
Ndishimye P. Thèse de Doctorat II
Écrire encore au XXIème siècle sur la tuberculose démontre que nous ne sommes pas tout à fait
gagnants vis-à-vis de cette maladie infectieuse. Plusieurs éléments restent d'actualité.

Tuberculose - Roumanie - Facteurs de Risque – Interleukine 10 - Lymphocyte T Régulateur
Ndishimye P. Thèse de Doctorat III
PUBLICATIONS
- Ndishimye, P., Seghrouchni, F., Domokos B., Soritau O., Sadak A., Homorodean D., Rajae
E.A., Pop, C. M. (2015). Evaluation of Interleukin-10 levels in the plasma of patients with
various stages of tuberculosis. Clujul Medical, 88(2), 164. PubMed Central: PMC4576778.
- Ndishimye P., Domokos B., Stillo J., Seghrouchni F., Mrabet O., Homorodean D., Pop C.
M, Sadak A. (2016). A case control study of risk factors associated with pulmonary
tuberculosis in Romania: Experience at a clinical hospital of pneumology. Clujul Medical.
- Pacifique Ndishimye, Cenariu Mihai, Olga Soritau, Karima Sahmoudi, Abderrahim Sadak,
Carmen Monica Pop, Fouad Seghrouchni. (2016). Increased levels of CD4+ FoxP3+
Regulatory T Cells and CD4+ CD38+ HLA DR+ Activated T Cells in New Active and
Relapse Pulmonary Tuberculosis. Research Journal of Immunology. Accepted for publication.
- Pacifique Ndishimye, Domokos Bianca, Faiçal Hattimy, Abderrahim Sadak, Fouad
Seghrouchni, Abdelmajid Soulaymani, Carmen Monica Pop. Diabetes mellitus in tuberculosis
patients and its impact on clinical presentations: a district based analysis in Romania. En
rédaction.
- Pacifique Ndishimye, Fouad Seghrouchni, Abderrahim Sadak, Homorodean Daniela, Rajae
El Aouada, Carmen Monica Pop. Clinical characteristics and outcome of tuberculosis patients
whose high level of Interleukin-10 in plasma after 6 months of treatment. En rédaction.
COMMUNICATIONS SCIENTIFIQUES
- Pacifique Ndishimye, Fouad Seghrouchni, Daniela Homorodean, Abderrahim Sadak,
Carmen Monica Pop. The possible association of IL-10 high level in plasma and recurrent
tuberculosis. Applied Biotechnology in Africa. Kigali, Rwanda, 24-25 September 2015.
- P. Ndishimye, F. Seghrouchni, D. Homorodean, A. Sadak, C. Monica Pop. Regulatory T
cells and immune activation in drug-susceptible and multidrug-resistant tuberculosis. 3ème
Congrès Maghrébin d’Immunologie et 6ème Journées Scientifiques de la Société Marocaine
d’Immunologie. Marrakech, Morocco, 25-28 November 2014.
- P. Ndishimye, D. Homorodean, A. Sadak, C. Monica Pop. Increased levels of CD4+ Foxp3
regulatory T cells and Serum IL-10 in patients with Tuberculosis. “Romanian Society of
Pneumology” Conference. Arad, Romania, 29-31 May 2014.
- Pacifique Ndishimye, Daniela Homorodean, Abderrahim Sadak, Carmen Monica Pop. The
role of CD4+ CD25high CD127- Foxp3 Regulatory T cells in different infections. 17th
Rwanda Medical Association Scientific Conference. Butare, Rwanda, 22-23 November 2013.

Tuberculose - Roumanie - Facteurs de Risque – Interleukine 10 - Lymphocyte T Régulateur
Ndishimye P. Thèse de Doctorat IV
RÉSUMÉ
La tuberculose (TB) est une maladie infectieuse qui peut être évitable et curable, et pourtant elle
représente un grand défi pour la santé publique mondiale. Une meilleure compréhension des
facteurs environnementaux et biologiques qui conditionnent la transmission de l’infection,
l’activation de la maladie et la résistance au traitement est cruciale pour établir des programmes
efficaces de lutte contre cette maladie. En effet, en plus des facteurs socioéconomiques et
culturels, le risque de développer ou réactiver la TB se fait suite à l’échappement du bacille
mycobactérien au control immunitaire. Ce processus est essentiellement provoqué par la
régulation de la réponse immune antituberculeuse orchestrée particulièrement par les lymphocytes
T régulateurs (Tregs) et leur production en Interleukine-10 (IL-10). L’objectif principal de cette
thèse est d’évaluer les paramètres socio-économiques, cliniques et biologiques pour la prédiction
de l’infection par M. tuberculosis chez les patients hospitalisés dans la région de Cluj-Napoca,
Roumanie. Pour répondre à cet objectif global, 3 aspects ont été déterminés : (a) Evaluer les
facteurs de risque potentiels pour la TB en Roumanie ; (b) Evaluer la fréquence des lymphocytes
T régulateurs CD4+ FoxP3+, l'expression des marqueurs d'activation (CD38+ et HLA-DR+) et les
niveaux d'Interleukine-10 dans le plasma des patients atteints de la TB active et de rechute ; (c)
Evaluer l’effet du traitement antituberculeux sur les niveaux d'IL-10 et une possible association
des niveaux élevés de cette cytokine avec la TB récurrente. Pour ce faire, 305 patients recrutés au
niveau du Centre de Pneumologie « Leon Daniello », ont participé aux différentes parties de
l'étude. Les résultats ont montré que les facteurs associés à la TB en Roumanie étaient
l'analphabétisme, le chômage, le faible revenu, le tabagisme, une mauvaise connaissance de la
maladie, la présence du patient tuberculeux dans la famille, le traitement préalable de la TB et le
diabète. Les résultats ont également montré que les Tregs et les marqueurs d’activation sont
élevés à la fois chez les patients atteints de la TB active et de rechute par rapport aux témoins (p
<0,05). Les taux d'IL-10 étaient plus élevés chez les patients par rapport aux sujets sains (p
<0,05), et une corrélation a été trouvée entre le niveau élevé d'IL-10 dans le plasma des patients à
la fin du traitement et le risque de développer une TB récurrente. Cette étude a confirmé l'aspect
multifactoriel de la TB et a montré que la présence du nombre élevé des marqueurs d’activation,
le nombre élevé de Tregs ainsi qu’un niveau élevé d’IL-10 reflète la dysrégulation du système
immunitaire qui peut prédisposer les patients à différentes formes cliniques de la TB. D'autres
recherches sont nécessaires pour confirmer la pertinence de l’utilisation de ces déterminants dans
le suivi comme biomarqueurs cliniques de réponses aux traitements antituberculeux.
Mots clés : Tuberculose, Roumanie, Facteurs de risque, Interleukine-10, Lymphocytes T
régulateurs.

Tuberculose - Roumanie - Facteurs de Risque – Interleukine 10 - Lymphocyte T Régulateur
Ndishimye P. Thèse de Doctorat V
SUMMARY
Tuberculosis (TB) is an infectious disease that can be preventable and curable, and yet it
represents a great challenge for global public health. A better understanding of the
environmental and biological factors that influence the transmission of the infection, the
activation of the disease and the resistance to treatment is crucial to establish effective
programs to fight against this disease. Indeed, in addition to the socio-economic and cultural
factors, the risk of developing or reactivating the TB is due to the escape of the mycobacterial
bacillus to control immune. This process is essentially caused by the regulation of the immune
response of tuberculosis orchestrated particularly by regulatory T cells (Tregs) and their
production in Interleukin-10 (IL-10). The main objective of this thesis is to evaluate the socio-
economic, clinical and biological parameters to predict Mycobacterium tuberculosis among
hospitalized patients in Cluj County, Romania. To fulfil that overall objective, 3 aspects have
been determined: (a) to evaluate the potential risk factors for TB in Romania; (b) to evaluate
the frequency of CD4+ FoxP3+ regulatory T cells (Treg cells), the expression of activation
markers (CD38+ and HLA-DR+) and the levels of Interleukin-10 (IL-10) in the plasma of
patients with new active and recurrent TB; (c) to assess the effects of treatment on IL-10
levels and the possible association of IL-10 high level in plasma and recurrent TB. A total of
305 patients were enrolled in the different parts of the study. The results showed that factors
associated with TB in Romania were illiteracy, unemployment, low household income,
smoking, poor knowledge of TB, presence of TB patient in household, prior TB treatment and
diabetes. The results also showed that Treg cells and activated CD4+ T cells are elevated both
in patients with active and recurrent TB compared to controls (p<0.05). The levels of IL-10
had significant differences between the TB and control groups (p<0.05). The patients with
abnormal chest X-Ray findings had higher IL-10 levels when compared to patients with
normal X-Rays (p=0.03). A correlation was found between IL-10 high levels in plasma of TB
patients at the end of treatment and recurrent TB rates. This study confirmed the multifactorial
aspect of TB and showed that the presence of high percentage of activated CD4+ T cells, the
corresponding high number of Treg cells and high level of IL-10 may reflect immune
dysregulation that can predispose patients to different clinical forms of TB. Further
investigations are necessary to confirm if these determinants could be used in follow-up as
clinical biomarker of the success of TB therapy.
Key words: Tuberculosis, Romania, Risk Factors, Interleukin 10, Regulatory T cells.