Congrès - John Libbey Eurotext

Congrès
Ann Biol Clin 2012 ; 70 (1) : 33-84
Journées nationales de la SFBC –
Journées internationales de biologie 2011
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Les journées scientifiques nationales de la SFBC ont eu
lieu les 8, 9 et 10 novembre 2011 dans le cadre des JIB à
Paris – La Défense. Nous reproduisons ci-dessous les résumés des communications affichées acceptées par le Comité
scientifique des JIB auquel la SFBC participe activement.
BIOCHIMIE
Purification and biochemical
characterization of a highly thermostable
cellulase-free xylanase from Actinomadura
sp. Strain cpt20 isolated from poultry
compost
Taibi Z1 , Saoudi B1 , Boudelaa M1 , Trigui H2 , Belghith H2 ,
Gargouri A2 , Ladjama A1
1
doi:10.1684/abc.2011.0660
Laboratoire de biochimie et de microbiologie appliquées,
Faculté des sciences de Annaba, Université Badji Mokhtar
de Annaba. B.P 12, 23000, Annaba, Algeria ; 2 Laboratoire
de valorisation de la biomasse et production des protéines
chez les eucaryotes, Centre de biotechnologie de Sfax, Université de Sfax, B.P 1177, Route de Sidi Mansour Km 6,
3018 Sfax, Tunisia
An extracellular thermostable xylanase (XYN20) from a
newly isolated thermophilic Actinomadura sp. strain Cpt20
was purified and characterized. Based on MALDI-TOF
mass spectrometry analysis, the purified enzyme is a monomer with a molecular mass of 20110.13 Da. The 19 residue
N-terminal sequence of the enzyme showed 84% homology
with those of actinomycetes endoxylanases. The optimum
pH and temperature values for xylanase activity were pH
10 and 80 ◦ C, respectively. This xylanase was stable within
a pH range of 5 - 10 and up to a temperature of 90 ◦ C. It
showed high thermostability at 60 ◦ C for 5 days and the
half-life time of XYN20 at 90 ◦ C was 3-h. The xylanase
was specific for xylans, showing higher specific activity on
soluble oat-spelt xylan followed by beechwood xylan. This
enzyme obeyed the Michaelis-Menten kinetics, with the Km
and Vmax values being 1.55 mg soluble oat-spelt xylan/ml
and 781.71 ␮mol min−1 mg−1 protein, respectively. While
XYN20 was activated by Mn2+ , Cu2+ , and Co2+ , it was
strongly inhibited by Hg2+ , Zn2+ , and Ba2+ . These properties make XYN20 a potential candidate for future use in
biotechnological applications particularly in the pulp and
paper industry.
Production of ␣-amylase from archaeal
source
Attar A1 , Ejder G1 , Başaran-Elalmış Y1 , Yücel S1 ,
Birbir M2
1
Bioengineering Department, Faculty of Chemistry
and Metallurgy, Yıldız Technical University, Istanbul,
Turkey ; 2 Biology Department, Faculty of Science,
Marmara University, Istanbul, Turkey
Depending on the phylogenic arguments it has been thought
that Archaea may have played a key role in the early history
of life (Forterre et al., 1992). Archaea can adapt their biological systems to different types of habitats. Their molecular
adaptations are responsible for the ability to survive and
grow in extreme environments (Jacquemet et al., 2009).
Extremely halophilic archaea are obligate halophiles that
require more than 15% salt for optimal growth. Intracellular and extracellular proteins from halophilic archaea
face very saline conditions which must be stable and functional at those extremely salty conditions (Hutcheon et
al., 2005). Therefore, haloarchaeal proteins are subject of
interest that contain specific adaptations to prevent aggregation and loss of activity in such conditions. Enzymes
are protein structured molecules which catalyze biochemical reactions on mild conditions. Enzymes that found
wide and extensive research topic in medicine, biochemistry and biology have got into daily and economical
life. Among these enzymes, ␣-amylase (EC.3.2.1.1) is a
commonly used one in industry. In this study, secreted
␣-amylase enzyme and its activity was determined using
Haloarcula hispanica 2TK2 strain isolated for the first time
in 2004 from Tuzköy Salt Mine of Turkey. Enzyme production capacity of Haloarcula hispanica 2TK2 strain was
determined and the activity of archaeal ␣-amylase was characterized. Enzyme assays were measured with the DNS
assay using starch as the substrate. The effects of buffer
Pour citer cet article : Journées nationales de la SFBC – Journées internationales de biologie 2011. Ann Biol Clin 2012 ; 70(1) : 33-84 doi:10.1684/abc.2011.0660
33
Congrès
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
and salt concentration were tested. NaCl concentration was
investigated from 3 M to 5 M and the highest ␣-amylase
activity is obtained from the growth media which had the
highest salt concentration. Also 20% starch was added to
the growth media with the same conditions for comparison. The highest enzyme activity obtained from growth
media containing 5 M NaCl with starch. Haloarcula hispanica will be a source of a microorganism promising in
industry due to its new defined halophilic structure and high
thermostability.
Dosage de l’homocystéine
par spectrométrie de masse
Louis M, Tse C, Jacob N, Jardel C, Lamari F
Laboratoire de biochimie, GH Pitié Salpêtrière, 47,
boulevard de l’hôpital, 75013 Paris
Objectifs : Mise au point du dosage de l’homocystéine
plasmatique (Hcy) par spectrométrie de masse, triple quadripolaire, couplée à une chromatographie liquide, avec
dilution isotopique (LC-MS). Comparaison des résultats
à ceux obtenus par chromatographie liquide haute performance avec détection fluorimétrique (CLHP-FD). Sujets :
L’Hcy est un acide aminé soufré ayant un rôle majeur
dans le cycle de la méthionine. Le dosage de l’Hcy totale
sert au diagnostic et au suivi des hyperhomocystéinémies
d’origine génétique. L’hyperhomocystéinémie est associée
à un risque accru de thromboses artérielles et veineuses.
C’est aussi un facteur de risque athérogène de classe IIb.
Matériels et méthodes : Le dosage de l’Hcy a été effectué par LC-MS équipée d’une colonne HSST3 (Waters).
L’homocystine deutérée est le standard interne. La gamme
étalon est réalisée dans l’eau ultrapure. Après réduction
de l’Hcy par le dithiothréitol, le plasma est déprotéinisé
par un mélange d’acétonitrile, d’acide trifluoroacétique et
d’acide formique. Après centrifugation, le surnageant est
analysé par LC-MS. La validation analytique a été réalisée selon le guide de validation technique d’une portée
flexible B du Cofrac (Comité français d’accréditation).
Résultats : La méthode est spécifique (caractérisée par 2
transitions et un temps de rétention) et sensible (limite de
détection : 0,1 ␮mol/L). Il n’y a pas d’effet matrice par
comparaison d’un étalonnage dans l’eau ultrapure, dans un
plasma et dans une solution d’albumine. La linéarité a été
vérifiée jusqu’à 211 ␮mol/L. La répétabilité et la reproductibilité sur 2 niveaux de contrôles (10,3 et 28 ␮mol/L)
ont montré des coefficients de variation respectivement de
2,9 et 4,5 % (valeur basse) et de 3,9 et 4,4 % (valeur
haute). La contamination inter-échantillon est quasi nulle
(0,05 %). La justesse, étudiée sur 3 valeurs physiopathologiques (13, 48 et 117 ␮mol/L), montre un biais négligeable
34
(- 5,2, + 2,8 et + 12,4 % respectivement). La comparaison
des résultats obtenus par CLHP-FD et LC-MS réalisée sur
74 échantillons, montre une excellente corrélation entre les
2 méthodes : coefficient de corrélation de 97,7 %, moyenne
d’Hcy de 28,2 ␮mol/L pour la LC-MS et de 31,4 ␮mol/L
pour la CLHP-FD. Conclusion : La méthode mise au point
est simple, rapide, sensible et spécifique. La comparaison
de méthode avec la CLHP-FD permet une parfaite transférabilité des résultats.
Vitamin C attenuates physiological
and behavioral changes induced by noise
Angrini Ma , Leslie Jb
a
Fatima College of Health Science, Al Ain, United Arab
Emirates ; b Head of Research Graduate School, University
of Ulster, Coleraine, Northern Ireland. UK
Persistent, high intensity noise is an environmental pollutant that plays a destructive role in daily life, especially in
industrialized communities. Three experiments examined
the possibility that pre-treatment with vitamin C (100 mg
or 200 mg/kg) could attenuate behavioral and the anxiogenic effects of 100-dB noise exposure for two months,
5 days per week, 4 hours daily on male mice, by using
open-field and plus maze tests of emotionality, and by
measuring the neutrophils-to-lymphocytes ratio, a physiological stress measure. The effects seen on behavior in open
field and plus maze were consistent with the hypothesis
that noise could be considered as stress factor. The results
also showed that the neutrophils-to-lymphocytes ratio was
increased as a result of noise exposure, thus noise produced
both behavioral and physiological changes as a stress factor.
Furthermore, there was good evidence from all 3 experiments that that vitamin C supplementation can attenuate
and prevent the psychological and physiological damage
induced by prolonged noise exposure.
Mesure de l’HBA1C chez les porteurs
d’hémoglobinopathie : évaluation
de l’Afinion
Dupé M, Delaroche O, Le Carrer D, Bigot E
CHU de Nantes, Laboratoire de biochimie, Hôpital G et R
Laennec, Bd J. Monod 44800 Saint Herblain
Objectifs : Evaluation d’un nouvel appareil de mesure
de l’HbA1c : l’Afinion (Instrumentation laboratory) chez
les sujets porteurs d’anomalies de l’hémoglobine. Comparaison avec une technique HPLC (Tosoh G8) et DCA
Vantage (Siemens). Matériels et méthodes : Sur une
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
période de 3 mois, les sujets porteurs d’une hémoglobinopathie (connue ou découverte) pour lesquels un dosage
d’HbA1c était demandé ont été sélectionnés. L’HbA1c a
été mesurée par HPLC (Tosoh G8, technique du laboratoire) et parallèlement sur l’Afinion et sur le DCA Vantage.
Les dosages de fructosamines et d’albuminémie ont été
réalisés en complément. Résultats : Une étude de répétabilité et de reproductibilité, sur deux niveaux de contrôles,
a préalablement été réalisée sur l’Afinion. Les CV obtenus, respectivement : 1,45 % et 1,41 % pour la répétabilité
(n = 31), et 1,66 % et 1,2 % pour la reproductibilité (n = 33)
pour des niveaux en HbA1c à 6,3 % et 8,3 %, sont conformes
aux exigences Afssaps. Sur l’ensemble des sujets présentant une hémoglobinopathie hétérozygote, la corrélation
entre les valeurs d’HbA1c obtenues sur l’Afinion et l’HPLC
est bonne : y = 1,054 x – 0,238, r = 0,987. Une différence
notable est toutefois observée entre les sujets présentant
une drépanocytose hétérozygote où la corrélation est correcte entre Afinion et HPLC : y = 1,093x – 0,597 r = 0,995,
et les sujets présentant un autre type d’anomalie hétérozygote (Hb C, D ou thalassémie. . .) où la corrélation est moins
satisfaisante : y = 0,576x +2,719 r = 0,874. Cette différence
est également retrouvée entre le DCA et l’HPLC avec une
corrélation de y = 1,073x -0,074 r = 0,993 chez les hétérozygotes drépanocytaires et y = 0,675x + 2,226 r = 0,881 pour
les hétérozygotes non drépanocytaires. Au laboratoire lors
de la présence d’un variant de l’hémoglobine, nous rendons
préférentiellement le résultat des fructosamines ou le rapport fructosamines/albuminémie pour le suivi des sujets. La
corrélation entre les valeurs d’HbA1c et les fructosamines
est meilleure pour l’Afinion (r = 0,946 Afinion, r = 0,935
DCA, r = 0,923 HPLC) de même que la corrélation entre les
valeurs d’HbA1c et le rapport fructosamines/albuminémie
(r = 0,945 Afinion, r = 0,932 DCA, r = 0,920 HPLC). Tout en
préconisant une surveillance des sujets diabétiques porteurs
d’hémoglobinopathies, par un dosage de fructosamines, on
peut envisager le suivi de l’équilibre glycémique sur appareil délocalisé type Afinion puisque la corrélation avec la
mesure HPLC de l’HbA1c est correcte.
Retard de croissance intra-utérin et facteurs
pro-inflammatoires
Delvin E1,2 , Leduc L2,3 , Levy E2,4 , Bouity-Voubou M2 , Sané
A2 , Garofalo C2 , Fouron J-C2,5
1
Département de biochimie clinique, CHU Sainte-Justine,
U. de Montréal, Montréal, Canada ; 2 Centre de recherche,
CHU Sainte-Justine ; 3 Département d’obstétrique et gynécologie, CHU Sainte-Justine ; 4 Département de nutrition,
Université de Montréal ; 5 Service de cardiologie, division
de médecine maternelle fœtale, CHU Sainte-Justine
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Objectifs : De nombreuses études épidémiologiques ont
révélé une association entre le retard de croissance
intra-utérin (RCIU) et la susceptibilité aux maladies cardiovasculaires et le diabète de type 2 à l’âge adulte. Nous
avons vérifié l’expression génique et protéique des facteurs pro-inflammatoires [interleukines IL-1␤ et IL-6 et
TNF␣], ainsi que des marqueurs d’inflammation [protéine C-réactive (CRP) et molécule soluble d’adhésion
intercellulaires (sICAM-1)]. Nous avons aussi mesuré par
chromatographie liquide à haute performance les niveaux
des marqueurs du stress oxydatif [LDL-oxydées et le
malondialdéhyde (MDA)]. Matériel et méthodes : Cette
étude a été approuvée par le Comité d’éthique du CHU
Sainte-Justine et les patientes ont donné leur consentement.
Les biopsies placentaires (∼ 0,3 g), prélevées de 26 paires
de placenta de grossesses gémellaires ont été immédiatement congelées dans l’azote liquide. L’ARN total a été
isolé et l’ARNm quantifié par rtPCR. Les protéines ont été
mesurées par Western blot. Les données sont exprimées
en moyenne ± SEM. Les différences entre les groupes ont
été déterminées par le test-t pairé de Student ou le test de
Wicoxon avec une probabilité < 0,05 considérée comme
statistiquement significative. Résultats : Nous avons noté
une différence significative au niveau de l’expression
génique et protéique des facteurs pro-inflammatoires (IL1␤, IL-6, TNF␣) et des marqueurs de l’inflammation (CRP
et ICAM-1) dans les placentas avec RCIU comparativement aux normaux. De plus, nous avons pu démontrer
une augmentation significative des LDL-oxydées et du
MDA. Conclusion : Cette étude montre que le modèle
de grossesse gémellaire permet de mettre en évidence une
augmentation de l’expression de différents facteurs proinflammatoires, de marqueurs de l’inflammation et du stress
oxydatif dans le placenta avec RCIU comparé au placenta
normal. Par contre, excepté pour les LDL-oxydées, ce phénomène ne semblant pas s’exprimer pleinement au niveau
du sang de cordon (Leduc et al. Eur J Obstet Gynecol
Rep Biol 2011 ; 156 : 46-9), les résultats nous portent à
croire que le placenta atténue ce dérèglement au niveau
fœtal.
Contrôle de l’hyperhomocysteinémie
par un adénovirus surexprimant Dyrk1a
Tlili A1 , Jacobs F2 , Mohamed S1 , Paul JL3,4 , Delabar JM1 ,
De Geest B2 , Janel N1
1 Laboratory of Gene Dysregulation and Differentiation,
Univ Paris Diderot-CNRS EAC 4413, Unit of Functional
and Adaptive Biology (BFA), Case 7104, 75205 Paris cedex
13, France ; 2 Center for Molecular and Vascular Biology,
Campus Gasthuisberg, Leuven, Belgique ; 3 HP, Hôpital
35
Congrès
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Européen Georges Pompidou, Service de Biochimie, Paris,
France ; 4 Université Paris-Sud, UMR 1154-INRA, Faculté
de Pharmacie, Châtenay-Malabry, France.
L’hyperhomocystéinémie (Hhcy) constitue un facteur de
risque puissant des maladies cardiovasculaires. Chez les
patients atteints de trisomie 21, à l’inverse des patients
hyperhomocystéinémiques, l’incidence de risque de ces
maladies est très faible, malgré la présence de certains
facteurs de risques biochimiques. Il doit donc exister des
effets qui contrebalancent les conséquences de la dyslipidémie chez ces patients trisomiques. Une étude précédente
a mis en évidence une corrélation négative entre le taux
d’homocystéine (Hcy) plasmatique et l’expression hépatique de Dyrk1a, une sérine/thréonine kinase dont le gène
se trouve sur le chromosome 21. Une construction a été
établie afin de développer un transfert de gène par adénovirus à spécificité hépatique permettant de provoquer in vivo
une augmentation de l’expression de Dyrk1a dans le foie
de souris Hhcy où l’expression de la protéine Dyrk1a est
diminuée. Nous avons alors cherché à mettre en évidence
les effets d’une surexpression hépatique ciblée de Dyrk1a à
l’aide d’un vecteur adénoviral sur les altérations du métabolisme hépatique de l’Hcy chez la souris. Nous avons montré
que la surexpression ciblée de Dyrk1a au niveau hépatique
permet de normaliser le taux d’Hcy chez les souris Hhcy,
ce qui prouve l’effet bénéfique de l’expression hépatique
ciblée de Dyrk1a sur le taux d’Hcy plasmatique. Nos résultats montrent également une corrélation positive entre la
quantité protéique de Dyrk1a et l’activité des principales
enzymes du métabolisme de l’Hcy que nous avons étudié, à
savoir la S-adénosylhomocystéine hydrolase, la NAD(P)H
quinone oxydoréductase et la cystathionine ␤-synthase chez
les souris Hhcy traitées à l’adénovirus par rapport aux
souris non traitées. De plus nos résultats montrent une
hausse très significative de l’activité de la paraoxonase 1
(PON1) hépatique et sérique chez les souris traitées par
rapport à celle obtenue chez les souris non traitées. Ce
résultat révèle que l’effet de la surexpression de Dyrk1a
sur l’activité de la PON1 pourrait diminuer les maladies
affectant le système cardiovasculaire. D’un point de vue
thérapeutique, cette approche permettra de développer une
thérapie ciblant l’expression hépatique de Dyrk1a, afin de
contrecarrer l’effet athérogène associé à l’Hhcy.
36
Serum and urinary FLC quantification
compared by immunoassay
and electrophoresis
Claeyssens S1 , Le Roy F2 , Brunel V1 , Quillard M1 , Godin
M2 , Lavoinne A1
1 Medical Biochemistry, Rouen University Hospital, Rouen
76031 cedex, France ; 2 Nephrology, Rouen University
Hospital, Rouen 76031 Cedex, France
Introduction: In mutiple myeloma (MM), free light chains
(FLC) are involved in the pathogenesis of renal failure, a
major cause of morbi-mortality. Since reversibility of renal
failure often can be achieved at time of diagnosis, early
quantification of FLC contributes to appropriately prevent
renal failure. In this study, we have compared for the first
time the quantification of FLC by immunonephelometry
(Neph) and by electrophoresis (Elec) in serum (S) and in
urine (Ur) of patients with MM. Methods: Fresh paired
samples of S and 24h Ur were analyzed in 54 patients with
MM. FLC quantification by nephelometry (Freelite® , The
binding site) was performed on a BNI analyser (Siemens).
FLC were expressed as total (k plus l) concentration in S
and as total (k plus l) 24h Ur FLC excretion. Elec was realised using SDS gel electrophoresis (Hydragel proteinuria® ,
Sebia). Total S FLC (in patients with FLC MM, n = 20) and
total Ur FLC were quantified by densitometry and were
expressed as a fraction of total protidemia and as a fraction
of total 24h proteinuria, respectively. The intra-class correlation coefficient (icc), the Bland-Altman analysis and
the spearman’s rank correlation coefficient were performed. Results: The ICC obtained between Neph and Elec
indicated poor reproducibility for S FLC values (r = 0.11,
95% CI – 0.31_0.53) and for Ur FLC values (r = 0.06, 95%
CI – 0.20_0.33). The Bland-Altman analysis indicated no
significative agreement between these 2 methods for S FLC
values (bias: 5.1 g/24 h, 95% CI 15.1 g/24 h) and for Ur FLC
values (4.0 g/24 h, 95% CI 11.8 g/24 h). This was explained by an increasing bias between these 2 methods when
increasing S or Ur FLC values were measured (y = 1.40x
- 1704, r = 0.95 and y = 1.56x - 825, r = 0.99, respectively).
Thus, in S and in Ur, FLC values were up to 9- and 11fold higher, respectively, by Neph than by Elec; Ur FLC
values measured by Neph were up to 7-fold higher than
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Congrès
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
total proteinuria values. Conclusions: This study shows an
overestimation of FLC quantification by Neph as compared
to Elec, both in Ur and S of patients with MM. This overestimation increases linearily with increasing values. Given
that the International myeloma group recommends the use
of the immunoassay for quantification of S FLC and the
use of the 24-h Ur Elec for quantification of urinary FLC, it
must be emphasised that there is no harmonization of FLC
values between these 2 methods. Therefore, S and Ur FLC
values should be interpreted with caution.
Définition des limites d’acceptabilité
des contrôles internes de qualité
Saada S, Olichet B
Laboratoire de biochimie, Institut Curie, Paris
Introduction : La mise en œuvre des contrôles internes
de qualité au laboratoire permet de s’assurer que la qualité
attendue des résultats est obtenue. La stratégie déployée
doit tenir compte des exigences réglementaires et normatives (norme NF EN ISO 15189 et SH REF 02) et
permettre la détection des dysfonctionnements des systèmes ou des processus analytiques de manière efficace
et simple. Méthodes : Dans le cas d’un système analytique quantitatif, la performance du contrôle interne de
qualité repose notamment sur la définition des limites
d’acceptabilité de celui-ci. La comparaison des performances des spécimens de deux contrôles internes (3 taux
Synchron® Beckman et 3 taux non titrés Bio-rad) a été
réalisée pour certains paramètres de l’automate de chimie
DxC600® de Beckman en confrontant les performances des
limites d’acceptabilité établies par le fournisseur à celles
calculées par nos soins. Les écarts types ont été calculés à
partir des coefficients de variation acceptables définis par la
Société française de biologie clinique afin de tenir compte
de la variabilité pré-analytique, analytique et biologique des
résultats. Résultats : Les limites d’acceptabilité calculées
sont systématiquement plus restreintes que celles établies
par le fournisseur. Le pourcentage d’alarmes déclenchées
quotidiennement est équivalent et n’entraîne pas de blocage
inutile du processus analytique. Par contre, la diminution de
la fourchette d’acceptabilité entraîne une meilleure détection des dérives du système difficilement décelables par
la seule mise en œuvre des règles de Westgard. Conclusion : Le calcul de la plage de performance des contrôles
internes de qualité tel que nous l’avons défini permet une
surveillance fiable et adaptée du système analytique. Ce
calcul tient compte de la variabilité des résultats de façon
à détecter des erreurs de mesure ayant un retentissement
potentiel sur les résultats des patients. La définition des
plages de performances des contrôles internes de qualité
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
est un des éléments de la stratégie déployée au laboratoire. Celle-ci est adaptée après une phase préalable de
vérification des performances analytiques du système et
de surveillance accrue afin d’identifier ses points faibles
et repose sur le nombre, la fréquence, le type de contrôles
ainsi que les règles utilisées pour l’analyse quotidienne.
Produits de glycation avancée
et les atteintes vasculaires du diabète sucré
Kerkeni M1 , Saidi A1 , Chabaa R1 , Miled A2 , Trivin F3 ,
Hammami M1
1
Nutrition humaine et désordres métaboliques, Faculté
de médecine, Monastir-Tunisie ; 2 Laboratoire de biochimie, CHU Farhat Hached Sousse-Tunisie ; 3 Laboratoire de
biochimie clinique, Faculté des sciences pharmaceutiques,
Tours-France
Objectifs : Dans le diabète sucré, les atteintes vasculaires
sont corrélées avec l’hyperglycémie et/ou avec la formation,
de produits de glycation avancée (AGE : advanced glycation endproducts). Les résultats expérimentaux indiquent
que les AGE participent au développement des lésions
vasculaires. Dans notre travail, nous nous sommes intéressés à déterminer le taux des AGE chez les patients
diabétiques souffrant de complications micro- et macrovasculaires. Matériel et méthodes : Notre enquète est une
étude cas-témoin, constitué de 50 sujets témoins indemnes
de pathologie diabétiques, de 50 patients diabétiques
indemnes de complications vasculaires, de 100 patients
diabétiques avec complications microvasculaires (rétinopathie, néphropathie) et de 50 patients diabétiques avec
complications macrovasculaires (athérosclérose, atteinte
coronarienne). La détection du taux des AGE (UA) est
basée sur une détection spectrofluorimétrique (␭ émission : 440 nm, ␭ excitation : 330 nm). Les analyses
statistiques ont été mesurées par le test t-student (SPSS
10.0). Résultats : Les concentrations d’AGE sériques sont
significativement plus élevées chez les patients diabétiques
indemnes de complications vasculaires par rapport aux
témoins (6,77 ± 1,24 vs. 3,62 ± 1,50 UA, p < 0,001).
Ces produits (AGE) sont significativement plus élevés
chez les patients diabétiques ayant les complications
micro- et macrovasculaires que chez les patients diabétiques indemnes de complications vasculaires (9,30 ± 1,54 ;
8,64 ± 1,35 UA respectivement vs. 6,77 ± 1,24 UA, p
< 0,001). Les taux des AGE étaient augmentés chez
les diabétiques avec complications macrovasculaires et
de manière plus importante chez les patients atteints de
complications microvasculaires. Conclusion : Les patients
ayant un diabète sucré avec complications vasculaires ont
un taux des AGE variable à la différence de l’HbA1c , index
37
Congrès
de l’hyperglycémie. Le dosage des AGE pourra être un marqueur biologique des complications chroniques du diabète
sucré traduisant des corrélations notables avec le développement des lésions micro- et macrovasculaires. Selon les
traitements subis sur ces patients, le dosage des AGE nous
incitera une à exploration plus avancée.
Elevated lipoprotein(a) concentration
in cardiovascular diseases: interest
of apolipoprotein(a) phenotyping
Edjème-Aké A1,2 , Garnotel R3,4 , Hauhouot-Attoungbré
ML1,5 , Yayo SE1 , Adoh Adoh M5 , Monnet D1 , Gillery P3,4
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
1
Serum-ascite albumin gradient
and cholesterol in the differential
diagnosis of ascites
Koné F1 , Edjème-Aké A1,2 , Tré-Yavo M3 , Hauhouot
Attounbgré ML1 , Ndri-Yoman AT4 , Monnet D1
1
Laboratory of Biochemistry, Faculty of Pharmaceutical
and Biological Sciences, University of Cocody, Abidjan,
Côte d’Ivoire ; 2 Biochemistry Laboratory, Institut Pasteur,
Côte d’Ivoire ; 3 Laboratory of Cytology, Faculty of Medical Science, University of Cocody, Abidjan, Côte d’Ivoire ;
4 Department of Hepato-Gastroenterology, University Hospital of Yopougon, Abidjan, Côte d’Ivoire
Objectives: The aim of this cross-sectional study was to
compare serum- ascites albumin gradients (SAAG), serumascites protein gradient (SAPG) and cholesterol to Rivalta
test and concentration of total protein in the ascitic fluid
(TPA), in the classification of transudative and exudative
ascites in order to seek for consistency and diagnostic
value of different tests evaluated. Material and methods:
The study concerned examined 98 patients suffering from
ascites recruited at university teaching hospitals in Abidjan.
We determined the concentrations of total protein, cholesterol and albumin in ascitic fluid or serum by colorimetric
or enzymatic colorimetric methods. Rivalta test was performed. Diagnostic indices were determined. Results: The
diagnostic concordance between the SAAG and Rivalta on
one hand and the SAAG and the TPA on the other hand was
moderate, (kappa = 0.29) (69%) and (kappa = 0.34) (73%)
respectively while it was good between the Rivalta test and
TPA (kappa = 0.72) (88%). The results showed a higher
sensitivity (Se) of SAAG (86.79%) with specificity (sp) of
(40%) lower. Cholesterol concentration provided the best
diagnostic value with 64.2% of Se, a Sp of 86.7% (threshold value > 0.183 g/L). Conclusion: Cholesterol had the
best diagnostic value in the classification of ascitic fluid
into exudate and transudate. However, given the high sensitivity of SAAG, it should be associated with these tests
for a better differential diagnosis of ascites.
38
Laboratory of Biochemistry, UFR Pharmaceutical and
Biological Sciences, Abidjan Côte d’Ivoire ; 2 Laboratory
of Medical Biochemistry, Institut Pasteur, Abidjan, Côte
d’Ivoire ; 3 Laboratory of Pediatric Biology and Research,
CHU of Reims, France ; 4 Laboratory of Medical Biochemistry, Faculty of Medicine, UMR CNRS/URCA No
6237, Reims, France ; 5 Institute of Cardiology, CHU of
Treichville, Abidjan, Côte d’Ivoire
Introduction-Objectives: High Lipoprotein(a) [Lp(a)]
concentrations are generally associated with increased risk
of atherosclerotic and thrombotic disease. An inverse relationship has been described between apolipoprotein(a)
[apo(a)] size and plasma concentration as a consequence
of length polymorphism of apo(a) gene, and small apo(a)
isoforms found together with high Lp(a) concentration
are considered more athero-thrombogenic. The purpose of
this study was to assess the association between apo(a)
isoforms and Lp(a) concentration in Ivorian subjects suffering from arterial hypertension and myocardial infarction.
Material and methods: The investigation concerned 91
patients composed of 61 arterial hypertensive subjects and
30 suffering from myocardial infarction. Were enrolled 102
matched healthy subjects as controls. Plasma Lp(a) concentration was established by immunonephelometric (INP) and
electroimmunodiffusion (EID) methods. Apo(a) isoforms
were determined using a SDS-PAGE followed by immunoblotting. Results: Lp(a) concentration were increased in
patients with hypertension or myocardial infarction comparatively to those in the controls. Apo(a) phenotyping
distribution revealed an predominance of high molecular weight apo(a) isoforms ranged from 11 kringles to
more than 34 kringles. There is no significantly difference
between apo(a) size in control and patients. Patient and
control group having a «double band » apo(a) isoform
pattern showed higher Lp(a) concentration than subjects
with “single band” apo(a) isoform group. However, the
plasma Lp(a) concentration was markedly and significantly
increased in myocardial infarction and hypertensive subjects with “double band” isoforms. The inverse relationship
between apo(a) size and Lp(a) concentration was founded
in control and the population with cardiovascular disease.
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Congrès
Conclusion: Stepwise regression analysis showed that not
the apo(a) polymorphism size but apo(a) phenotype notably
“double band” isoform or Lp(a) concentration, may explain
clearly occurring of cardiovascular diseases.
Evaluation of erythropoietin assay
in serum on the Immulite 1000 analyser
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Coric J, Javoric R, Kucukalic E
Department of Clinical Biochemistry, Clinical Centre University of Sarajevo, Sarajevo, Bosnia and Herzegovina
Background: Erytropoietin (EPO) is a glycoprotein hormone. It is primary regulator of erytropoiesis, stimulating
the proliferation and differentiation of erythroid precursor
cells in bone marrow. Eritropoietin also plays an importing
role in promoting polycythaemia. Methods and methods:
Analytical validation of erytropoietin determination by
chemiluminescent immunassay on Immulite 1000 system included: within-run imprecision on the commercially
controls (N = 20); between-day imprecisionon commercially controls (N = 25); inaccuacy on commercialy controls
(N = 15) and comparation determination on the human
semples (N = 20) on 2 systems: Immulite 2000 and Immulite 1000 analysers. Results: Within-run imprecision on the
commercially controls for L1 is 4,0%, L2 is 3,6% and L3 is
3,6%; beetween-day imprecision on commercially controls
is 6,5%; 6,2%,5,9% for L1, L2, L3 respectively; inaccuracy
on commercially controls for L1 is -4,9%, L2 is 0,67% and
L3 is 2,23%. Method comparasion on human samples show
in the range of method linearity correlation coefficient from
0,97. Conclusion: The presented results of the anlytical
evaluation methods for the determination of erytropoietin on the Immulite 1000 analyser showed an acceptable
accuracy and precision.
a concerné 20 patients diabétiques sans complications
cardiovasculaires (9 femmes/11 hommes) d’âge moyen :
54,55 ± 13,73 ans et 37 témoins (25 femmes/12 hommes)
d’âge moyen : 41,21 ± 12,36 ans. Nous avons déterminé
l’activité enzymatique de la paraoxonase1 par une méthode
cinétique à 405 nm en utilisant le paraoxon comme substrat. Les triglycérides (TG), le cholestérol total (CT),
et les HDL-cholestérol (HDLc), ont été déterminés par
méthode enzymatique colorimétrique (Randox). Le LDL
cholestérol (LDLc) et les non HDL cholestérol (non HDLc)
ont été calculés. Résultats : Nos résultats montrent une
diminution statistiquement significative de l’activité de la
paraoxonase chez les diabétiques comparé aux témoins
(38,65 ± 16,20 UI/L vs 81,67 ± 54,46 UI/L, p < 10-3 ),
l’étude de profil lipidique montre une diminution statistiquement significative des HDLc (1,02 ± 0,23 mmol/L vs
1,30 ± 0,32 mmol/L, p < 10-3 ) et une augmentation statistiquement significative des TG, du CT, des non HDLc
et du LDLc chez les diabétiques par rapport aux témoins
(1,58 ± 0,60 mmol/L vs 1,02 ± 0,39 mmol/L, 5,13 ± 0,98
mmol/L vs 4,66 ± 0,79 mmol/L, 3,90 ± 0,97 vs 3,35 ± 0,39
mmol/L et 3,16 ± 0,98 mmol/L vs 2,87 ± 0,8 mmol/L ; p
< 10-3 ). Chez les patients diabétiques, nous avons trouvé
une corrélation positive entre l’activité de la paraxonase
et la concentration du HDLc. Discussion/Conclusion : La
diminution importante de l’activité de la paraoxonase et la
perturbation du bilan lipidique observées chez les diabétiques corrobore l’hypothèse d’un risque accru de maladie
cardiovasculaire. Par conséquent, une prise en charge diététique et thérapeutique serait indispensable.
Produits de glycation avancée et CRPus
chez des diabétiques coronariens
Chahed H1 , Soualhia A1 , Ferchichi S1 , Ben Limen H1 ,
Chaieb L2 , Jridi G3 , Miled A1
1
Paraoxonase et bilan lipidique
chez les diabétiques de type 2
Chahed H1 , Hafsa A1 , Chaabouni Y1 , Ferchichi S1 , Ben
LimenH1 , Chaieb L2 , Miled A1
1
Laboratoire de biochimie, CHU Farhat Hached Sousse,
Tunisie ; 2 Service d’endocrinologie, CHU Farhat Hached
Sousse, Tunisie
Objectif et introduction : Le but dans notre étude est
d’évaluer l’activité de la PON1 et le bilan lipidique
chez des diabétiques sans complications coronaires. La
paraoxonase (PON1) est une enzyme anti-inflammatoire
associée au HDL cholestérol et qui prévient l’oxydation
des lipoprotéines. Matériel et méthodes : Notre étude
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Laboratoire de biochimie, CHU Farhat Hached Sousse,
Tunisie ; 2 Service d’endocrinologie, CHU Farhat Hached
Sousse, Tunisie ; 3 Service de cardiologie, Hôpital F.
Hached Sousse
Objectif et introduction : Le but de cette étude est de déterminer les concentrations des produits de glycation avancée
(AGE) et la protéine C-réactive ultra-sensible (CRPus)
chez des diabétiques avec complications coronariennes.
L’accumulation des produits de glycation avancée (AGE)
induit un stress inflammatoire et oxydant. L’ensemble de
ces perturbations joue un rôle important dans la physiopathologie des complications micro et macroangiopathiques
du diabète. Matériel et méthodes : Notre étude a porté
sur 3 groupes : un groupe de 35 patients diabétiques
de type 2 coronariens (âge moyen 42 ± 12 ans), un
39
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
groupe de 35 diabétiques de type 2 (âge moyen : 53 ± 12
ans) sans complications coronariennes et un groupe de
45 sujets non diabétiques (âge moyen : 44 ± 10 ans). Les
taux des AGE ont été déterminés par une méthode spectrophotométrique selon Munch et Henle, la concentration
de la CRPus a été dosée par immunoturbidimétrie. L’étude
avait été approuvée par le comité d’éthique. Résultats :
Nos résultats ont montré une augmentation statistiquement significative des AGE chez les patients diabétiques en
comparaison avec les témoins (8,85 UA/g ± 2,05 vs 5,06
UA/g ± 1,4, p = 10-3 ) ainsi qu’une augmentation statistiquement significative des AGE chez les patients diabétiques
coronariens par rapport aux diabétiques sans complications
coronariennes (10,76 ± 2,45 vs 8,85 ± 2,05, p = 10-3). Pour
la CRPus, nous avons noté aussi une élévation statistiquement significative entre les patients diabétiques et les
témoins (4,97 ± 5,94 vs 1,47 ± 1,82, p < 10-3 ) et entre
les patients diabétiques coronariens et diabétiques sans
complications coronariennes (4,97 ± 5,94 vs 1,77 ± 3,36,
p < 10-3 ). Chez les diabétiques coronariens, les AGE ont
été corrélés positivement à la concentration de la CRPus.
Discussion/Conclusion : L’augmentation simultanée et
prononcée des AGE et de la CRPus chez les diabétiques
coronariens, permet de confirmer l’implication de ces deux
paramètres dans la genèse des complications cardiovasculaires chez le diabétique.
Évolution des dosages biologiques
chez l’homme : cholestérol,
triglycérides et glucose
Lamine Chaminade M1 , Dagawa D1 , Belloc S1 , de Mouzon J2 , Cartolano JL1 ,Cohen-Bacrie M1 , Cohen-Bacrie P1 ,
Leclerc T1
1
Laboratoire Unilabs-Eylau, 55 rue Saint Didier 75116
Paris, France ; 2 Inserm, Université Paris Descartes, Faculté
de Médecine, AP-HP GHU Ouest, CHU Cochin Port Royal,
Service de gynécologie obstétrique II et médecine de la
reproduction, Paris, France
Introduction et objectifs : Les normes des dosages biologiques sont établies depuis longtemps. Cependant, les
habitudes alimentaires changent au cours du temps, et il
était utile d’évaluer l’évolution des dosages sur une longue
période et une grande série réalisée dans un laboratoire
unique, en individualisant les hommes des femmes. Matériel et méthodes : Cette étude réalisée avec l’aval de notre
comité d’éthique a concerné tous les dosages réalisés chez
des hommes, du 1er janvier 2000 au 31 décembre 2010 dans
notre laboratoire, avec mesure du cholestérol total (cholT),
et des triglycérides (TG), (n = 54 622). Le rapport cholestérol/triglycérides (chol/TG) a été calculé, de 2000 à 2007
40
avec Ortho (Vitros® ) puis Abbott (Architect® ). Les techniques comparatives ont noté une superposition parfaite des
étalonnages. L’évolution sur 11 ans de ces marqueurs ainsi
que de la glycémie (glyc) a été analysée à l’aide de coefficients de corrélation de Pearson, en prenant en compte
l’âge avec variance et covariance ; p < 0,05 détermine
la significativité. Résultats : Sur l’ensemble des sujets, le
taux de cholestérol total a très significativement diminué
au cours du temps (r = -0,13, p < 0,001). Il existe aussi une
diminution générale, moindre, des triglycérides (r = -0,03,
p < 0,001) et du rapport chol/TG (r = -0,03, p < 0,001). Pendant cette période, la glycémie a aussi diminué (r = -0,05,
p < 0,001), alors que l’âge moyen augmentait (r = 0,04,
p < 0,001). On note aussi une corrélation positive assez
forte entre cholestérol et TG (r = 0,27, p < 0,001) et entre
TG et glyc (r = 0,20, p < 0,001), négative forte entre
chol/TG et glyc (r = -0,19, p < 0,001), et plus faible entre
cholT et Glyc (r = -0,03, p < 0,001). Enfin, on note, lorsque
l’âge augmente, une diminution du cholT (r = -0,05, p
< 0,001) et du rapport chol/TG (r = -0,09, p < 0,001), une
augmentation de Glyc (r = 0,15, p < 0,001), mais pas de
modification des TG (r = 0,001, NS). La prise en compte de
l’âge des sujets conserve la diminution du cholT (p < 0,001)
et du rapport chol/TG, mais pas celle des TG (p = 0,07).
Conclusion : On note, depuis 2000, une diminution très
significative de la cholestérolémie sans modification des triglycérides dans la population des patients qui persiste après
prise en compte de l’âge, et s’accompagne d’une diminution
de la glycémie. Ces évolutions ne sont pas dues à des modifications techniques. Leur origine est multiple : changements
de régime alimentaire, prise en charge thérapeutique plus
précoce, campagnes médiatiques. . .
Troponine hypersensible et infarctus
du myocarde : influence de l’âge
Mzabi A1 , Freund Y3 , Doumenc B4 , Claessens YE2 , Ray P3 ,
Chenevier-Gobeaux C1
1
Laboratoire inter-hospitalier de biochimie, Hôpital
Cochin–Broca–Hôtel-Dieu, Assistance Publique des Hôpitaux de Paris (AP-HP) ; 2 Service d’accueil des urgences,
Hôpital Cochin–Broca–Hôtel-Dieu, Assistance Publique
des Hôpitaux de Paris (AP-HP) ; 3 Service d’accueil des
urgences, Hôpital Pitié-Salpêtrière, Assistance Publique
des Hôpitaux de Paris (AP-HP) ; 4 Service d’accueil des
urgences, Hôpital Bicêtre, Assistance Publique des Hôpitaux de Paris (AP-HP)
Introduction : Les nouvelles méthodes de dosages des troponines cardiaques dites ultra ou hyper-sensible montrent
une excellente sensibilité pour le diagnostic d’infarctus
du myocarde (IDM). Objectifs : Etudier l’influence de
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
l’âge sur les concentrations plasmatiques de troponine
cardiaque T hypersensible (cTnThs) chez des patients
suspects d’IDM. Sujets : Patients consécutifs se présentant au service d’accueil des urgences des hôpitaux de la
Pitié-Salpêtrière, de Cochin ou de Bicêtre avec une douleur thoracique suspecte d’IDM évoluant depuis moins de
6 heures. Matériels et méthodes : Pour chaque patient,
les données cliniques et biologiques suivantes ont été
recueillies à l’admission : âge, sexe, constantes vitales, facteurs de risque cardiovasculaires associés, caractéristiques
de la douleur thoracique, modalités de la prise en charge
thérapeutique, concentration plasmatique de troponine i
cardiaque (ctni) et de créatinine. Le dosage de la ctnThs
plasmatique a été effectué rétrospectivement (analyseur
Elecsys® 2010, Roche Diagnostics). Le diagnostic final
d’IDM a été établi par l’urgentiste, en aveugle par rapport au
résultat de cTnThs. Résultats : 317 patients ont été inclus
(57 ± 17 ans), dont 54 (17 %) patients ≥ 75 ans. Par rapport
aux patients < 75 ans, les patients ≥ 75 ans étaient plus souvent des hommes, avaient une pression artérielle systolique
plus élevée, une saturation en 02 plus basse, et présentaient
plus souvent des antécédents personnels de coronaropathies, d’hypertension artérielle et d’insuffisance cardiaque.
Le diagnostic d’IDM a été établi chez 45 patients (14 %),
parmi lesquels 11 patients ≥ 75 ans. Les concentrations
plasmatiques de cTnThs étaient significativement augmentées chez les sujets ≥ 75 ans par rapport à celles observées
chez les sujets plus jeunes. Cependant, les concentrations
de cTnThs restaient significativement augmentées chez les
patients avec IDM par rapport à ceux sans IDM, quelle que
soit la classe d’âge. Chez les sujets ≥ 75 ans, un seuil optimal de cTnThs établi à 32,4 ng/L a montré une sensibilité à
100 % [IC95% : 68-100] et une valeur prédictive négative
(VPN) à 100 % [87-100] pour le diagnostic d’IDM, ce qui
était similaire aux résultats obtenus chez les patients < 75
ans (seuil optimal à 13,7 ng/L, sensibilité : 91 % [75-98],
VPN : 99 % [96-100]). Discussion/conclusion : Malgré
une influence de l’âge sur les concentrations plasmatiques
de cTnThs, ce biomarqueur reste un outil très performant
pour le diagnostic d’IDM aux urgences.
lation of 25D takes place in the kidney by the 1-alpha
hydroxylase enzyme, under the control of parathyroid hormone, to yield 1,25-dihydroxyvitamin D (1,25D). 1,25D is
the most potent vitamin D metabolite. It stimulates calcium
absorption in the intestine and its production is tightly regulated through concentrations of serum calcium, phosphorus,
and parathyroid hormone. The measurement of 1,25D
presents several analytical challenges. The compound circulates at picomolar concentrations and is highly lipophilic.
Furthermore, the structurally similar metabolic precursor
25D circulates at nanomolar concentrations, making assay
specificity a constant analytical concern. We assessed the
analytical performance of the IDS-iSYS 1,25-Dihydroxy
Vitamin D on the IDS-iSYS automated platform and compared it to the commericaily available IDS RIA method.
Method: 1,25D was extracted from delipidated samples by
the current IDS immunoextraction technology and reconstituted samples were measured by the IDS-iSYS automated
system. Sample 1,25D competed with 1,25D-Acridinium
(1,25D-ACR) for a limited amount of biotinylated polyclonal anti-1,25D antibody sites. Bound complexes were
captured by use of streptavidin-coated magnetic particles. Following washing and addition of Trigger reagents,
bound 1,25D-ACR was measured in a luminometer where
signal generated was inversely proportional to the 1,25D
concentration in the sample. Total time to first result (immunoextraction and immunoassay) was 4h30min. The 1,25D
assay had an assay range of 5 to 415 pg/mL. Results: Analytical sensitivity was 6.4 pg/mL. Intra-assay precision was
12%, 7% and 7% for samples at 22, 76 and 317 pg/mL
(n = 20). Inter-assay precision was 11 to 16% (samples 17
to 318 pg/mL, n = 8). A correlation (n = 55) with a slope of
1.29, intercept 0.9 pg/mL and an R2 of 0.86 was obtained
for the iSYS to the IDS RIA. Conclusion: The IDS-iSYS
1,25-Dihydroxy Vitamin D assay is the first semi-automated
1,25D assay. The combination of immunoextraction and
the IDS-iSYS system will allow laboratories to accurately analyse larger numbers of samples per day. With
excellent precision and good correlation to current methods
the IDS-iSYS 1,25D assay will be a valuable tool in clinical laboratories for the accurate measurement of 1,25D in
human sera or plasma.
Performance of the 1,25-dihydroxy vitamin D
assay on the IDS-ISYS automated system
Bergmann Sa , Gardner MJb , Roffe CMb , Fox CJb , Laurie
Db , Seres Zb , Ramsey Cb
L’électrophorèse des protéines sériques
sur V8 (Helena Biosciences)
Institute of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,
Dresden, Germanya , Immunodiagnostic Systems (IDS)
Ltd, Boldon, UKb
Gillain N, Verlaine JP, Neve C, Minon JP
Background: Vitamin D is rapidly metabolized in the liver
to form 25-hydroxyvitamin D (25D). Additional hydroxy-
Objectifs : Helena Biosciences propose un automate
pour électrophorèse capillaire, le V8, et 3 tampons pour
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Laboratoire de biologie clinique, CHR de la Citadelle,
Liège, Belgique
41
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
l’électrophorèse des protéines sériques : SP6, SPE et SP6
zoom. Nous avons évalué le V8 et son soft Platinum (version
2.19) avec comme référence le Capillarys2 (CAP) de Sebia.
Patients : Les sérums proviennent de patients hospitalisés
ou suivis par un spécialiste. Un tiers d’entre eux présentent
un syndrome inflammatoire et/ou une dysgammaglobulinémie. La prévalence des gammapathies monoclonales est de
l’ordre de 10 %. Matériels et méthodes : 540 échantillons
ont été traités avec le tampon de faible pouvoir de résolution des bandes, SP6, et 1 120 avec le tampon de moyenne
résolution, SPE. Les tracés ont été examinés par un technicien (A) récemment entraîné au dépistage des composés
monoclonaux (CM) sur CAP puis sur V8 et par un utilisateur occasionnel (B). Une immunofixation (IF) est réalisée
(Hydragel 9IF, Sebia) lorsqu’une anomalie est détectée sur
CAP par le personnel du laboratoire ou par A ou B sur V8
ou CAP. Certains échantillons ont été traités en raison d’un
antécédent de gammapathie monoclonale. Résultats : Le
tampon SP6 génère un tracé comparable à celui de l’agarose
avec une cadence équivalente à celle du CAP (80 échantillons/h). Le coefficient de corrélation (r) entre les deux
automates est de l’ordre de 0,9 pour les différentes fractions excepté pour les ␤-globulines (0,66). A ne détecte que
60 % des 57 CM identifiés dans cette série et B, 35 %, alors
qu’ils dépistent 75 et 77 % des CM sur CAP. Le tampon
SPE génère un tracé comportant deux zones bien individualisées au niveau des ␤-globulines avec une cadence de
48 échantillons/h. Le r est de l’ordre de 0,9 pour les différentes fractions excepté pour les ␤-globulines (0,53) et les
␥-globulines (0,75). A détecte 85 % des 110 CM identifiés et
B, 62 % alors que tous deux détectent 82 % des CM sur CAP.
Les difficultés rencontrées sur V8 proviennent de l’aspect
du tracé : contours mal définis, fractions difficiles à positionner, corrections fréquentes. L’interprétation du tracé du
CAP est beaucoup plus facile. Conclusion : Le tampon SP6
ne peut pas être utilisé dans des laboratoires où la recherche
des CM est basée essentiellement sur l’électrophorèse. Le
dépistage des CM sur V8 avec le tampon SPE peut être
aussi performant que sur CAP à condition que l’utilisateur
ait une grande pratique. Il serait souhaitable que le nouveau
soft en préparation fournisse une image plus conviviale des
tracés.
Measurement of TSH, FT4 and FT3
with Loci® technology
Verdickt L, Lepoutre T, Gruson D
Department of Laboratory Medicine, Cliniques Universitaires St-Luc, Brussels, Belgium
Background: Measurements of thyroid stimulating hormone (TSH), free tetraiodothyronin (FT4) and triiodothyro42
nin (FT3) are essential to achieve a complete assessment of
thyroid function. Luminescent oxygen channeling immunoassays (LOCI® ) have recently been developed for the
measurement of biomarkers of thyroid function. The objectives of our study were to compare LOCI® assays with
our routine assays and to determine the reference values
for LOCI® TSH, FT4 and FT3 assays. Method: Forty
routine samples were used for method comparison between the Dimension Vista® (Siemens) and the DxI® assays
(Beckman Coulter). Serum samples from 80 healthy individuals were used to determine reference intervals of the
LOCI® TSH, FT4 and FT3 assays on the Dimension Vista® .
Results: For the method comparison, the regression analysis showed intercepts of -0.041; -0.070 and -1.658 for
TSH, FT4 and FT3, respectively. The slopes were 1.028
for TSH, 1.653 for FT4 and 1.924 for FT3. No significant
deviation from linearity for any of these three parameters
was observed. Bland and Altman plots revealed mean differences of 0.01 for TSH, 0.43 for FT4 and 0.76 for FT3. The
reference intervals of LOCI® were 0.028-2.877 ␮U/mL for
TSH, 0.767-1.259 ng/dL for FT4 and 2.5-3.953 pg/mL for
FT3. Conclusion: We have demonstrated a good agreement
between LOCI® TSH assays and the comparative method.
However, significant differences were observed for FT4 and
FT3 between LOCI® and the conventional methods. Such
differences can be related to immunoassays format. It is
therefore mandatory to establish specific reference values
of LOCI® assays.
CTX-II urinaire chez les gonarthrosiques :
expérience d’un laboratoire de biologie
clinique tunisien
Kalai E1 , Bahlous A1 , Kahena B1 , Laadhar L1 , Chelly M1 ,
Nouira K1 , Rajhi H1 , Sahli H1 , Charni N2 , Garnero P2 ,
Makni S1 , Sellami S1 , Abdelmoula J1
1
Laboratoire de recherche « Arthrose – Ostéoporose »,
Hôpital La Rabta – Tunis ; 2 Unité marqueurs moléculaires,
Synarc Lyon, France
L’arthrose, pathologie la plus fréquente des maladies
articulaires chez la femme en Tunisie, constitue un problème majeur de santé publique. C’est la résultante des
phénomènes mécaniques et biologiques qui déstabilisent
l’équilibre entre la synthèse et la dégradation du cartilage.
De nombreux marqueurs biologiques reflétant la synthèse
et la dégradation du tissu cartilagineux ont été identifiés ces dernières années. Le télopeptide C-terminal du
collagène de type II (CTX-II) est le marqueur le plus
étudié dans l’arthrose. Des études récentes ont rapporté
que CTX-II pourrait constituer un facteur prédictif de
l’évolution de l’arthrose et orienter l’attitude thérapeutique.
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
Objectifs : Définir une valeur seuil du CTX-II permettant de distinguer les femmes gonarthrosiques avec un haut
niveau de remodelage cartilagineux des femmes indemnes
d’arthrose du genou. Matériel et méthodes : Il s’agit d’une
étude prospective qui a porté sur un groupe de 125 femmes
tunisiennes âgées de 54 ± 8 ans, ayant une gonarthrose
dont le diagnostic a été établi selon les critères de l’ACR
(American college of rheumatology). Ces patientes ont été
comparées à un groupe témoin de 57 femmes indemnes
de pathologie rhumatismale et appariées selon l’âge. Le
dosage de CTX-II urinaire (2e urine du matin) a été réalisé
dans les deux groupes, par une technique Elisa sandwich et
corrigé par la concentration de la créatinine. La détermination de la valeur seuil de CTX-II a été obtenue à partir de la
courbe ROC. Résultats : La courbe ROC a permis d’établir
la valeur de CTX-II de 210 ␮g/mol créatinine comme étant
le seuil le plus discriminatif, puisqu’il associe la meilleure
sensibilité (64,0 %) et spécificité (59,6 %). L’étude statistique a montré que 77,7 % des femmes gonarthrosiques ont
présenté un haut niveau de remodelage cartilagineux (CTXII > 210 ␮g/mol créatinine) contre seulement 22,3 % des
femmes non gonarthrosiques. La différence était statistiquement significative (p = 0,003) entre les deux groupes.
Conclusion : Le dosage de CTX-II en combinaison avec
l’examen radiologique permet d’améliorer le diagnostic de
la gonarthrose ; des études longitudinales pourraient contribuer à l’évaluation de l’intérêt pronostique de ce marqueur.
Les nouveaux marqueurs de dégradation
de l’aggrécane :
quel intérêt dans la gonarthrose ?
Kalai E1 , Bahlous A1 , Kahena B1 , Laadhar L1 , Chelly M1 ,
Nouira K1 , Rajhi H1 , Sahli H1 , Charni N2 , Garnero P2 ,
Makni S1 , Sellami S1 , Abdelmoula J1
1
Laboratoire de recherche « Arthrose – Ostéoporose »,
Hôpital La Rabta – Tunis ; 2 Unité marqueurs moléculaires,
Synarc Lyon, France
Le cartilage contient un composant crucial appelé aggrécane aidant le tissu à supporter les charges et à résister à la
pression. Au cours de l’arthrose, l’aggrécane est détruit par
deux familles d’enzymes (les aggrécanases et les métalloprotéases) et dès lors le cartilage perd sa capacité à absorber les chocs. Ces dernières années, plusieurs travaux ont
permis le développement de nouveaux marqueurs biochimiques d’exploration du remodelage de ou des tissus
articulaires au cours de l’arthrose. Objectifs : Rechercher
l’apport, au cours de l’arthrose du genou, des marqueurs
de dégradation de l’aggrécane (ARGSV, NITEGE et VDIPEN) nouvellement mis au point. Matériel et méthodes : Il
s’agit d’une étude prospective qui a porté sur un groupe
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
de 125 femmes tunisiennes âgées de 54 ± 7,68 ans, ayant
une gonarthrose récente d’une durée de 3,6 ± 3,8 ans.
La mesure du pincement de l’espace articulaire (Joint
Space Width : JSW) a été réalisée indépendamment par
deux radiologues expérimentés. La sévérité de la gonarthrose a été établie selon le grade de Kellgren/Lawrence.
Le dosage des peptides ARGSVI, NITEGE et VDIPEN
immunopurifiés issus de la dégradation de l’aggrécane a
été mis au point par une technique Elisa de compétition
dans les échantillons de sérums. Les différents dosages
ont été réalisés chez les gonarthrosiques et comparés à un
groupe témoin de 57 femmes âgées de 53,51 ± 8,54 ans
indemnes de pathologie rhumatismale. Résultats : Les trois
marqueurs de dégradation de l’aggrécane ont été significativement plus élevés chez les témoins par rapport aux
arthrosiques, cette élévation est de : 21,8 % (p = 0,002)
pour ARGS 72,79 % pour NITEGE (< 0,001) et 47,24 %
pour VDIPEN (p = 0,001). Ainsi une discrimination de
manière significative, entre la population contrôle et les
gonarthrosiques, a été rapportée. Conclusion : Les résultats préliminaires de cette première étude tunisienne qui
a visé à évaluer ces nouveaux marqueurs de l’aggrécane,
ont montré que la détermination de ces peptides permettrait de faire le diagnostic précoce de l’arthrose à un stade
préradiologique. L’intérêt de ces marqueurs dans la prédiction de la progression de cette pathologie pourrait être
établi par un suivi de ces patientes pendant une durée plus
longue.
Thyroid testing in healthy elderly – results
from the senior labor study
Medina P1 , Nydegger U1 , Lenggenhager E1 , Risch L1,3 ,
Risch M2
1
Labormedizinisches zentrum Dr. Risch, CH-Liebefeld
Bern ; 2 Labormedizinisches zentrum Dr. Risch, LISchaan ; 3 Private University Liechtenstein, LI-Triesen
Background: Hypothyroidism is common, affecting over
1% of the general population and about 5% of individuals
over age 60 years. A study (www.seniorlabor.ch) initiated
in 2008 (KEK-Berne-Study Nr 166/08) has so far recruited over 1600 apparently healthy senior Caucasian citizens.
The material lends itself to use laboratory evidence for
subclinical hypothyreosis with (thyroid-stimulating hormone) TSH-elevation for further investigation using free
triiodothyronine (FT3 ) and tetraiodothyronine (FT4 ) values.
Probands and methods: Of 1345 probands, serum samples
from morning fasting state were analyzed using ultrasensitive assays for TSH, FT3 and FT4 . A detailed medical
history was taken. Overt thyroid disease, diabetes mellitus, hypertension, kidney disease, carcinoma, reduced
43
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
cognitive function, smoking and alcohol abuse were considered as exclusion criteria. The Architect Abbott (Baar,
Switzerland) TSH, FT3 and FT4 assays involving light
generation using C16 H15 NO3 S upon reaction of the analyte with antibody-coated paramagnetic particles was used.
Results: The current normal ranges valid at our institution
are the following: TSH: 0.35 – 4.94 mU/L, FT3 : 2.6-6.4
pmol/L and FT4 : 9.1-23.8 pmol/L. Elevated levels of TSH
were found in 45 elderly, 3.35% (95% CI 2.51-4.45) ; (24
m/596: 4.03% (95%CI 2.73-5.92) and 21 f/749:2.80% (95%
CI 1.85-4.25). Of these 45 individuals none had a reduced FT3 and one of them had FT4 concentration below
9.1 pmol/L. In the individuals with deviating results from
the normal range comparison to the clinical records on file
could not uncover signs nor symptoms of hypothyroidism.
Conclusion: A suspicion of subclinical hypothyroidism on
some of our probands must be weighed against the possibility, that slightly elevated TSH with normal or slightly
depressed FT- levels could be judged within normal range
for elderly. On the other hand it cannot be excluded, that
our cohort of 45 probands might present subclinical hypothyreosis to be selected for hormonal substitution.
Hypofolatémie et hypovitaminose B12 chez
des patients bipolaires
Ezzaher A1,2 , Haj Mouhamed D1,2 , Mechri A2 , Neffati F1 ,
Douki W1,2 , Gaha L2 , Najjar MF1
1
Laboratoire de biochimie–toxicologie, Hôpital universitaire de Monastir, Tunisie ; 2 Laboratoire « vulnérabilité aux
psychoses LR 05 ES 10 », Service de psychiatrie, Hôpital
universitaire de Monastir, Tunisie
Objectifs : Ce travail a pour objectifs d’étudier la fréquence et les répercussions des déficits en folates et en
vitamine B12 au cours de la maladie bipolaire. Patients et
méthodes: Notre étude comportait 130 patients bipolaires
et 191 témoins sains. Ce travail a été approuvé par le comité
d’éthique. Les sujets supplémentés en folates et en vitamine
B12 ont été exclus de notre étude. La vitamine B12 et les
folates ont été dosés par une méthode immunoenzymatique
microparticulaire et l’homocystéine (Hcys) par polarisation de fluorescence. Résultats: En comparaison avec le
groupe témoin, l’hypofolatémie et l’hypovitaminose B12
étaient significativement plus fréquentes chez les patients
(66,2 % Vs 26,2 %, p < 0,001 ; 21,2 % Vs 10,8 %,
p = 0,01 ; respectivement). Sur le plan concentration, les
valeurs moyennes de la folatémie étaient significativement
plus basses chez les patients (3,3 ± 0,9 Vs 6,3 ± 3,3 ␮g/L,
p < 0,001). Cependant, nous n’avons pas noté de différence
44
significative pour la vitamine B12 entre ces deux groupes.
Nous avons retrouvé une association significative entre les
troubles bipolaires et l’hypofolatémie et l’hypovitaminose
B12 avant et après ajustement aux facteurs de confusion
potentiels (OR = 5,40 ; IC 95% : 3,30-8,80 ; p < 0,001
et OR = 1,65 ; IC95% : 1,04-2,62 ; p = 0,01 respectivement). Nous avons également noté que la fréquence de
l’hyperHcys ainsi que les concentrations moyennes de
l’Hcys étaient significativement plus élevées (39,2 % Vs
11,2 %, p < 0,001 ; 15,8 ± 8,9 Vs 9,7 ± 4,5 ␮mol/L, p
< 0,001 ; respectivement) chez les patients par rapport aux
témoins. Par ailleurs, l’hyperHcys était significativement
plus fréquente chez les patients présentant une hypofolatémie ou hypovitaminose B12 par rapport à ceux dont les
valeurs des folates et de la vitamine B12 sont respectivement supérieures à 3,7 ␮g/L et 187 ng/L (53,5 % Vs 11,4 %,
p < 10-3 ; 78,6 % Vs 34,5, p = 0,001 ; respectivement).
L’étude des caractéristiques cliniques et thérapeutiques de
la maladie a montré une association significative seulement
entre le traitement et la folatémie. En effet, tous les patients
sous lithium avaient une hypofolatémie. Conclusion : Les
patients bipolaires présentent des fréquences significativement élevées d’hypofolatémie et d’hypovitaminose B12,
suggérant l’implication de ces deux paramètres dans la physiopathologie des troubles. Une supplémentation en folates
et/ou en vitamine B12 chez les patients bipolaires semble
parfaitement justifiée.
Lipoprotein-associated phospholipase A2
levels implication
in severe calcific aortic stenosis
Charniot JC1,2 , Khani-Bittar R2,3 , Albertini JP4 , Giral
P3,5 , Cherfils C2 , Cosson C6,7 , Guillerm E2 , Leprince P8 ,
Gandjbakhch I8 , Bonnefont-Rousselot D2,7
1
AP-HP, Avicenne Hospital, Department of cardiology,
Université Paris 13, UFR SMBH Bobigny, France ;
2 Department of Metabolic Biochemistry, La PitiéSalpêtrière Hospital (AP-HP), Paris, France ; 3 UPMC
University Paris 06 UMR S 939 F-75013 Paris France ;
4 AP-HP Biochemistry Laboratory, Avicenne Hospital (APHP), Université Paris 13, UFR SMBH Bobigny, France ;
5 AP-HP Unité de prévention cardiovasculaire, Service
d’Endocrinologie-Métabolisme Pitié-Salpêtrière Hospital,
Paris, France ; 6 AP-HP Biochemistry Laboratory, KremlinBicêtre Hospital, Paris, France ; 7 Département de Biologie
Expérimentale, Métabolique et Clinique, EA 4466, Faculté
de Pharmacie, Université Paris Descartes, France ; 8 Cardiac
Surgery Department La Pitié-Salpêtrière Hospital (AP-HP),
Paris, France
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
Purpose: Aortic stenosis (AS) is a disease process akin
to atherosclerosis and has been linked to several risk
factors for coronary artery disease (CAD). Lipoproteinassociated phospholipase A2 (Lp-PLA2) [EC 3.1.1.4.] is an
inflammatory biomarker secreted in the atherosclerotic
plaque. We hypothesized that there could be a relationship
between serum Lp-PLA2, plasma oxidized LDL (oxLDL)
and AS, in contrast with CAD without AS. Methods:
We selected 234 patients included into 2 groups: Group
“CAD”: patients with only coronary artery disease and
Group “AS”: patients with AS and normal coronary arteries.
Lp-PLA2 mass was assessed in serum with a Plac® test turbidimetric immunoassay. Control Lp-PLA2 values
were specifically obtained in 61 healthy volunteers (age:
44.5±17.6 years; men 52%). Results: In controls, Lp-PLA2
level was 163±43 ␮g/L. Lp-PLA2 levels were significantly higher in patients than in controls (219.2±49.1
vs 163.0±43.0; p=0.01). Lp-PLA2 levels increased in
patients with AS, and were not significantly different
than patients with CAD (217.3±44.5 vs. 220.4±51.9, respectively; NS). Lp-PLA2 levels were similar in patients
with single-vessel atherosclerosis but significantly lower
than three-vessel atherosclerosis (single-vessel: 2,2±52.0;
three-vessel: 251.9±5,7 ␮g/L; p=0.03). OxLDL levels were
42±13U/L in the whole population. OxLDL values were
46±12 and 38±12 U/L for patients with AS and CAD,
respectively, with a significant difference between both
groups (p<0.0001). Circulating oxLDL were significantly
correlated with apoB (r=0.73; p<0.001), LDL-cholesterol
(r=0.67; p<0.001), triglycerides (r=0.43; p<0.001) and
ApoA-I (r=0.42; p=0.003). We did not find any correlation between Lp-PLA2 and oxLDL (p=0.39). Patients with
statin had significantly lower plasma oxLDL levels than
patients without any hypolipidemic treatment (29.7±9.1
versus 37.7±10.1; respectively). Conclusion: The present
study reports that high serum Lp-PLA2 levels were
associated with severe AS. This could have practical implications because statins and renin-angiotensin-aldosteron
system inhibitors seemed to be a promising treatments
of AS. The study was approved by our institutional
board and an informed consent was obtained from all the
subjects.
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Lipoprotein-associated phospholipase A2
levels: prognostic value
in cardiogenic shock
Daubord M1 , Charniot JC1,2 , Khani-Bittar R1,3 , Albertini
JP4 , Giral P3,5 , Cherfils C1 , Cosson C6,7 , Guillerm E1 ,
Bonnefont-Rousselot D1,7
1
Department of Metabolic Biochemistry, La PitiéSalpêtrière Hospital (AP-HP), Paris, France ; 2 AP-HP,
Avicenne Hospital, Department of cardiology, Université
Paris 13, UFR SMBH Bobigny, France ; 3 UPMC University Paris 06 UMR S 939 F-75013 Paris France ;
4 AP-HP Biochemistry Laboratory, Avicenne Hospital (APHP), Université Paris 13, UFR SMBH Bobigny, France ;
5 AP-HP Unité de prévention cardiovasculaire, Service
d’Endocrinologie-Métabolisme Pitié-Salpêtrière Hospital,
Paris, France ; 6 AP-HP Biochemistry Laboratory, Bicêtre
Hospital, Le Kremlin-Bicêtre, France ; 7 Département
de Biologie Expérimentale, Métabolique et Clinique, EA
4466, Faculté de Pharmacie, Université Paris Descartes,
France
Background: Circulating lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2) [EC 3.1.1.4.] is a marker of
inflammation that plays a critical role in atherogenesis, endothelial dysfunction and heart failure. Objectives:
We evaluated Lp-PLA2 levels and determined: (1) predictive value in de novo cardiogenic shock (CS), (2)
comparison in ischemic (ICM) or dilated cardiomyopathy
(DCM) (3) evolution when cardiac function improved upon treatment during a 30 ± 3 month-follow-up.
Methods: Inclusion criteria: CS defined by systolic BP<90
mmHg without acute coronary syndrome. Exclusion criteria: pacemakers, dialysis, liver disease, malignancy or
other shock etiologies. Patients had cardiac (echocardiography, coronarography) and biological evaluations
(troponin-I; NT-proBNP; Lp-PLA2). Control Lp-PLA2
values were specifically measured in 61 healthy volunteers
(age: 46 ± 18 years, men: 52%). Results: 22 consecutive
patients (men = 95%, 57.5 ± 10.7 y, LVEF = 25.1 ± 7.5%,
NT-proBNP = 8540 ± 1703 ng/L) were recruited: 7 ICM
and 15 DCM. At 30-months, mortality was 23% and
45
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
morbidity 48%. Heart failure symptoms decreased in 6
patients and 3 normalized their LVEF. Upon admission,
Lp-PLA2 was elevated in population with CS when referred to our controls (226.8 ± 77.3 ␮g/L vs. 163.4 ± 43.0
␮g/L, p=0.0001) and higher in ICM than in DCM group
(266.3 ± 74.1 vs. 203.8 ± 72.1 ␮g/L, p=0.08, respectively). In ICM group, Lp-PLA2 significantly decreased
when inotrope treatments were withdrawn (266.3 ± 74.1 vs.
208.1 ± 63.4 ␮g/L, p<0.03). Using multivariate regression,
Lp-PLA2 appeared to be an independent prognostic factor
for the major cardiac events (total r=0.76, p=0.005) with
a predictive rule-out of 254 ␮g/L. Conclusion: Lp-PLA2
1) was elevated in population with CS, when referred to
our controls and was higher in ICM than in DCM group;
2) might be a good predictive factor for major cardiac
events; 3) early decreased in ICM, under improvement of
cholesterol-lowering medication. The study was approved
by our institutional board and an informed consent was
obtained from all the subjects.
Cardiac disease, comorbidities and
treatments influenced lipoproteinassociated phospholipase A2 levels
Guillerm E1 , Charniot JC1,2 , Khani-Bittar R1,3 , Albertini
JP4 , Giral P3,5 , Cherfils C1 , Cosson C6,7 , Leprince P8 ,
Gandjbakhch I8 , Bonnefont-Rousselot D1,7
1
Department of Metabolic Biochemistry, La PitiéSalpêtrière Hospital (AP-HP), Paris, France ; 2 AP-HP,
Avicenne Hospital, Department of cardiology, Université
Paris 13, UFR SMBH Bobigny, France ; 3 UPMC University Paris 06 UMR S 939 F-75013 Paris France ;
4 AP-HP Biochemistry Laboratory, Avicenne Hospital (APHP), Université Paris 13, UFR SMBH Bobigny, France ;
5 AP-HP Unité de prévention cardiovasculaire, Service
d’Endocrinologie-Métabolisme Pitié-Salpêtrière Hospital,
Paris, France ; 6 AP-HP Biochemistry Laboratory, Bicêtre
Hospital, Le Kremlin-Bicêtre, France ; 7 Département
de Biologie Expérimentale, Métabolique et Clinique, EA
4466, Faculté de Pharmacie, Université Paris Descartes,
France ; 8 Cardiac Surgery Department La Pitié-Salpêtrière
Hospital (AP-HP), Paris, France
Purpose: Lipoprotein-associated phospholipase A2 (LpPLA2) [EC 3.1.1.4.] predicts future cardiovascular events
in patients with coronary artery disease (CAD) and heart
failure independently of traditional cardiovascular risk factors. The aims of our study were (1) to assess relationships
between Lp-PLA2 levels, cardiac disease and treatments;
(2) to evaluate the association of Lp-PLA2 level with the
severity of CAD and the extracoronary atherosclerosis.
Methods: 494 subjects (69.8% men, 64.2 ± 16.7 y)
46
were recruited from a population scheduled for diagnostic coronary angiography. Lp-PLA2 mass concentration
was assessed in serum with a Plac® -test turbidimetric
immunoassay. Control Lp-PLA2 values were specifically
obtained in 61 healthy volunteers (age: 46±18 years, men:
52%). Results: In healthy subjects, mean Lp-PLA2 was
163 ± 43 ␮g/L (men: 166 ± 45 ␮g/L; women: 159 ± 39
␮g/L, difference non significant). Principal etiologies of
cardiac disease were ischemic (40%), valvular (22%), cardiac failure with left ventricular (LV) dysfunction (14%),
aortic aneurysm (7%) and infection (5%). Lp-PLA2 correlated with age, body mass index, current smoking, history
of hypertension, total cholesterol, LDL-cholesterol and
apoB but not with diabetes, gender, serum creatinine,
NYHA status or Lp(a). Lp-PLA2 levels were significantly
higher in patients with CAD than in patients without CAD
(223 ± 54 vs. 208 ± 52 ␮g/L, respectively; p<0.007) and
higher in patients with the most extensive angiographic
CAD (single=215.2 ± 52 ␮g/L; two=222 ± 53 ␮g/L and
three vessels=251.9 ± 53.7 ␮g/L, respectively; p<0.0001)
or carotid artery disease (no stenosis= 218.8 ± 51 ␮g/L,
mild= 224 ± 51 ␮g/L and severe=231 ± 46 ␮g/L; p=0.004).
Patients with comorbidities like heart failure, sepsis or aortic aneurysm had increased Lp-PLA2 levels: 256.2 ± 46.8
␮g/L; 226.7 ± 47.3 ␮g/L; 218.1 ± 8.9 ␮g/L, respectively,
as compared to controls (p<0.0001). Lp-PLA2 was significantly associated with treatments such as statins and
ACEi/ARA2 but not with ␤-blockers, antiaggregant drugs
or diuretics. Conclusion: This study shows that interpretation of Lp-PLA2 levels needs a good assessment of
cardiac parameters and treatments, especially statins and
ACEi/ARA2. Lp-PLA2 levels are significantly associated
with coronary heart disease and with the extension of extra
coronary disease after adjustment for age and gender. The
study was approved by our institutional board and an informed consent was obtained from all the subjects.
Measurement of Nt-proBNP with a new
point-of-care assay
Lepoutre T1 , Rousseau M2 , Ahn S2 , Gruson D1
1
Department of Laboratory Medicine, Cliniques Universitaires Saint-Luc, Brussels, Belgium ; 2 Division of
Cardiology, Cliniques Universitaires Saint-Luc, Brussels,
Belgium
Background and objectives: Brain type natriuretic peptide
(BNP) and amino terminal pro-brain natriuretic peptide (NtproBNP), both derived from the same precursor proBNP,
are valuable markers for the diagnosis and prognosis of
heart failure (HF). Point of care testing (POCT) allows a
rapid measurement of biomarkers which may reduce the
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
time to establish the clinical diagnosis. The aim of our
study was to determine Nt-proBNP concentrations in HF
patients with the new POCT assay and to evaluate the
relationship with other recognized assays for natriuretic
peptides. Design and methods: Nt-proBNP levels were
measured in thirty seven healthy volunteers and in seventy
seven HF patients (AQT90® FLEX analyzer, Radiometer
Medical Aps, Denmark). The results were compared with
a central laboratory reference assay (Elecsys® 2010 analyser, Roche Diagnostics). Circulating levels of BNP, proBNP
and N-terminal-pro Atrial natriuretic peptide (Nt-proANP)
were also measured. Results: The Nt-proBNP upper limit
of reference was estimated as 118 pg/mL (95% reference
interval). In HF patients, mean Nt-proBNP concentrations
were significantly higher (5809 pg/mL vs. 35 pg/mL in the
healthy controls group; p<0.001). Further, AQT90® NtproBNP levels were significantly related to the New York
Heart Association (NYHA) classification. Correlation with
the Roche assay was very good (r=0.99, p<0.0001), with
a slope of 0.9 (95% CI: 0.88 to 0.92), an intercept of -18.8
(95% CI: -42.6 to 19.4) and no significant deviation from
linearity (p>0.1). Levels of AQT90® Nt-proBNP were
significantly correlated with BNP, Nt-proANP and proBNP
(correlation coefficient: 0.943, 0.797, 0.923 p<0.001).
Conclusions: Clinical performances of Nt-proBNP testing with AQT 90® FLEX analyzer are comparable to
central lab assay and may offer the advantages of POCT
testing.
Circulating levels of PTH 1-84 in renal
transplant recipients
Lepoutre T1 , Nguyen P2 , Jadoul M2 , Gruson D1
1
Department of Laboratory Medicine, Cliniques Universitaires Saint-Luc, Brussels, Belgium ; 2 Division of
Nephrology, Cliniques Universitaires Saint-Luc, Brussels,
Belgium
Background and objectives: Parathyroid hormone (PTH)
is a major systemic calcium-regulating hormone. Primary
and secondary hyperparathyroidism are related to cardiac
abnormalities such as left ventricular hypertrophy, cardiac
calcification and increased risk of death from circulatory
diseases. The aim of our study was to measure bioactive PTH 1-84 in renal transplant recipient (RTR) patients
with a third generation assay and to evaluate its relation
with vascular calcifications and biomarkers of cardiovascular risk. Methods: PTH 1-84 levels were determined
with the Liaison® (Diasorin) third generation assay in 49
healthy volunteers and 54 RTR patients. Circulating levels
of serum calcium, phosphorus, 25-(OH) Vitamin D, 1,25(OH) Vitamin D, PTH intact (iPTH), B-type natriuretic
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
peptide (BNP), N-terminal-pro Atrial natriuretic peptide
(Nt-proANP) and Big-endothelin 1 (Big ET-1) were also
measured. Results: Upper limit of PTH 1-84 in the healthy volunteers was 35.3 pg/mL (95% reference interval:
5 – 35.3 pg/mL). PTH 1-84 levels in RTR patients were
significantly higher (geometric mean: 54 pg/mL; range:
4 – 418 pg/mL) in comparison to the healthy volunteers
(20.1 pg/mL; range: 6.5 – 42 pg/mL, p<0.001). PTH 1-84
were significantly correlated with iPTH in RTR patients,
MDRD, 25-(OH) Vitamin D and phosphorus (Spearman
correlation coefficient: 0.927, -0.371, -0.414 and -0.277
respectively, p<0.05). In multiple linear regression analysis, levels of PTH 1-84 or iPTH were not independent
predictor of vascular calcifications. Concentrations of PTH
1-84 were significantly correlated with BNP, Nt-proANP,
Big ET-1, some established biomarkers of cardiovascular risk (correlation coefficient: 0.506, 0.381 and 0.327
respectively, p<0.05). Conclusions: Our study demonstrates for the first time that PTH 1-84 levels are increased
in RTR. PTH 1-84 and iPTH were not predictor of
vascular calcifications in this population. However, our
results reveal a significant association between bioactive
PTH 1-84 and biomarkers of cardiovascular risk in RTR
patients.
Apport du dosage de la calcitonine
ganglionnaire dans le diagnostic
du carcinome médullaire de la thyroïde
(CMT) : à propos d’un cas
Meghelli SM, Khelil H, Loudjedi L, Tahraoui Z, Berber N
Laboratoire d’explorations biologiques, Service de médecine nucléaire, Faculté de médecine et CHU de Tlemcen,
Algérie
Objectif : Le but de ce travail était d’évaluer l’utilité du
dosage de la calcitonine (CT) dans le liquide de rinçage
d’une ponction à l’aiguille fine (LRPEF) d’une adénopathie
(ADP) cervicale dont la cytologie a mis en évidence l’aspect
de métastase d’un processus carcinomateux d’origine thyroïdienne de souche indéterminée. Sujets et méthodes :
Nous rapportons le cas d’un patient, âgé de 37 ans, suivi au
service de médecine nucléaire du CHU Tlemcen pour un
carcinome papillaire de la thyroïde (CPT) avec métastases
ganglionnaires (MGG). Il a bénéficié d’une thyroïdectomie totale avec curage ganglionnaire droit, récurentiel et
jugulocarotidien suite à la découverte d’une ADP cervicale
droite métastatique ; l’examen histologique a conclu à un
CPT avec infiltration de l’ensemble des ganglions prélevés.
L’IRAthérapie a été réalisée avec une activité de 187,5mCi
d’131 iode. Au cours du suivi, un scanner cervicothoracique a objectivé une masse tissulaire paratrachéale droite
47
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
dont la cytoponction est revenue en faveur d’une métastase
d’un carcinome thyroïdien de souche inconnue, motivant
ainsi le dosage de la CT sérique et la CT dans le LRPEF
par méthode immunoradiométrique sur trousse Cisbio CT
humaine. Étant donné le caractère métastatique et invasif de
la masse, une résection partielle a été réalisée. Résultats :
Le taux de CT dans LRPEF était de 36,62 pg/mL, la CT
sérique à 20,70 pg/mL (N < 10). L’examen histologique
et immuno-histochimique de la masse réséquée a conclu
à un CMT. Discussion/Conclusion : La concordance des
résultats de CT ganglionnaire avec ceux de l’histologie et
l’immuno-histochimie ont permis de redresser le diagnostic
en confirmant le CMT malgré la discrète élévation la CT
sérique, ce qui indique que le dosage de CT ganglionnaire
est une méthode prometteuse pouvant être d’un apport non
négligeable en complément de l’histologie quant aux diagnostics des MGG de CMT et ce au même titre que la Tg
ganglionnaire pour le diagnostic de MGG de CPT. Ce résultat bien que très limité par le nombre de cas, nous paraît
intéressant et nous incite à étudier un plus grand nombre
de patients afin d’évaluer la sensibilité et la spécificité du
dosage de la CT dans le LRPEF.
HF patients had increased levels of hsTNT (median: 28.8,
range: 3.0 to 2597.0). The concentrations of hsTNT were
significantly different in patients with an ischemic origin
of the disease than without (geometric means: 37.8 vs 16.7
pg/mL; p=0.02). In multiple regression analysis (stepwise
analysis), the increase of hsTNT was significantly related to
BNP and Nt-proBNP but not with age, left ventricular ejection fraction and creatinin levels. Levels of hsTNT were
significantly correlated with BNP (r=0.492, p<0.0001),
Nt-proBNP (r=0.532, p<0.0001). Among the 74 patients
enrolled, 46 died during follow-up. Forty-one cardiovascular deaths were reported and 5 patients underwent heart
transplant during follow-up period. The mean hsTNT circulating levels were not significantly higher in dead patients
when compared to those who were alive (33.6 vs 26.3
pg/mL, p=0,447). In the Cox proportional hazard model,
Nt-proBNP was the best predictor of death whereas hsTNT
levels were not predictive of death. Conclusions: Our study
has demonstrated that the frequency of Troponin positive
results is increased with ultrasensitive assays. We have also
demonstrated a significant relation between hsTNT and
natriuretic peptides. However, the value of measurement
of hsTNT for the risk stratification of HF patients seems to
be limited.
Ultrasensitive troponin T in chronic heart
failure patients
Classen JF1 , Lepoutre T1 , Ahn S2 , Rousseau M2 , Gruson D1
1
Department of Laboratory Medicine, Cliniques Universitaires St-Luc, Bruxelles, Belgium ; 2 Division of
Cardiology, Cliniques Universitaires St-Luc, Bruxelles,
Belgium
Background: Troponin concentrations are increased in
heart failure patients (HF). Recently, high sensitive Troponin assays have been developed. The aim of our study
was therefore to evaluate levels of high sensitive Troponin T (hsTNT) in HF patients as well as their relation with
mortality and biomarkers of HF severity. Methods: hsTNT
concentrations were measured at baseline in 74 patients
with severe HF (females n=16; males n=58; NYHA II-IV;
mean age: 68 ± 13 years; mean ejection fraction: 22 ± 6%;
etiology: ischemic n=55, non ischemic n=19) using the
Elecsys High Sensitive Troponin T assay (Roche Diagnostics) by electrochemiluminescent immunoassay method on
the Cobas® e411. The upper limit of the reference range for
this assay was 14 pg/mL. Circulating levels of Troponin I
(TPNI), B-type natriuretic peptide (BNP) and N-terminal
proBNP (Nt-proBNP) were also determined using specific
immunoassays. Patients were followed from April 2004 till
November 2010. Results: In 45% of the HF patients, the
TPNI levels were above the reference value of 0.06 ng/mL
(median: 0.05, range: 0.01 to 17.02). In contrast, 72% of
48
Nt-proBNP predict postoperative atrial
fibrillation in cardiac surgery
Turki M, Mnif E, Naifar M, Chaabouni Kh, Jamoussi K,
Trigui W, Ayedi F
Department of Biochemistry, Sfax University Hospital,
Sfax, Tunisia
Background: One of the feared complications with the
waning of cardiac surgery is atrial fibrillation (AF). The
value of Nt-pro BNP in predicting that complication is
not well studied. Our objective is to determine its predictive role in the occurrence of postoperative AF after
heart surgery with cardiopulmonary bypass (CPB). Materials and methods: This is a prospective study. It involved
patients proposed for programmed or semi-urgent cardiac
surgery with normo-thermal CPB. We performed seven
blood samples for each patient: the first one immediately
after the induction of anesthesia and before CPB. The following samples were made at the end of the CBP (H0), 4
hours later (H4) and every day during the first four days
(H24, H48, H72 and H96). NT-proBNP were measured in
each sample with an immunoenzymatic method. Results: A
total of 42 patients were selected. Two patients were excluded because they died on the first postoperative day. The
average age and the sex ratio were respectively 56,1 ± 14,9
years and 1,3. Our population was divided into 23 coronary
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
artery bypass graft and 17 valve replacements. The most
common cardiovascular complication was the AF (17,5%).
Rates of Nt-proBNP were significantly increased in patients
who developed postoperative AF. The ROC analysis of NTproBNP at different times studied for the prediction of AF
showed that assays at the end of the CPB and those of the 4th
postoperative hour (H4) had the best area under the curve
(AUC). A threshold value of 353,5 pg/mL of Nt-proBNP at
the end of the CPB has a sensitivity of 71% and a specificity
of 84% for the prediction of AF and an AUC of 0,711. The
threshold value of 307.5 mg/mL of Nt-proBNP measured
at H4 has the same sensitivity but with a lower specificity
(74%) and AUC = 709. Conclusion: Our study showed that
early assays made at the end of the CPB or four hours later
could predict the occurrence of the AF. In this case, primary
prevention would be considered.
plus élevés, de manière significative, chez les malades par
rapport aux témoins (12,57 ± 7,4 ␮U/mL contre 9,33 ± 4,3
␮U/mL, p = 0,006) (3,28 ± 2,38 vs 1,6 ± 1,24, p < 0,001)
respectivement. L’insulinorésistance a été retrouvée chez
50 % des patients contre 18,7 % chez les témoins
(p = 0,003). L’hyperglycémie modérée à jeun était significativement plus fréquente chez les malades par rapport
aux témoins (27,5 % contre 6,25 %, p = 0,001). Le diabète type 2 était uniquement observé chez les malades
(13,5 %, p = 0,001). Une corrélation significative négative a
été observée par le test de Pearson entre la testostéronémie
et la glycémie à jeun (p = 0,003) d’une part, l’insulinémie (p
< 0,001) et le HOMA IR (p < 0,001) d’autre part. Conclusion : L’hypogonadisme masculin est fortement associé à
l’hyperglycémie modérée à jeun et à l’insulino-résistance.
La testostérone, à des taux physiologiques, paraît intervenir dans le maintien de l’équilibre glucidique et améliorer
l’insulinosensibilité.
Hypogonadisme masculin et la sensibilité
à l’insuline
Naifar M1 , Chaabouni Kh1 , Rekik N2 , Messedi M1 , Lahyani
A1 , Mnif E1 , Koubaa M1 , Trigui W1 , Abid M2 , Ayedi F1
1
Laboratoire de biochimie Habib Bourghiba, Sfax, Tunisie ; 2 Service d’endocrinologie Hédi Chaker, Sfax, Tunisie
La conservation de l’HBA1C : comparaison
de deux méthodes
Naifar M, Turki M, Mtibaa H, Houidi I, Mnif E, Chaabouni
Kh, Aydi S, Gaddour Z, Jamoussi K, Ayedi F
Laboratoire de biochimie Habib Bourguiba, Sfax, Tunisie
Objectifs : L’hypogonadisme chez l’homme est une pathologie sérieuse qui reste très souvent méconnue en dépit
d’une prévalence de 6 à 9 % chez les hommes de 40 à
70 ans. Les troubles qui peuvent en résulter ont été longtemps considérés comme uniquement liés à la qualité de
vie et notamment à la sexualité. Des travaux récents ont
montré l’impact général du déficit en testostérone, favorisant des modifications potentiellement nuisibles sur la
composition corporelle, le diabète de type 2 et les maladies cardiovasculaires. L’objectif de l’étude était d’étudier
la relation entre l’hypogonadisme masculin et la sensibilité
à l’insuline. Patients et méthodes : Il s’agit d’une étude
transversale portant sur 40 hommes hypogonadiques et 80
témoins non hypogonadiques appariés selon l’âge et le sexe
(consentements accordés). Les prélèvements ont été faits
le matin à jeun. Le dosage de la glycémie a été réalisé par
une méthode colorimétrique (Beckman CX9) et les dosages
hormonaux ont été réalisés par chimiluminescence (Roche
Diagnostics Elecsys 2010). L’insulinorésistance a été évaluée par l’homeostasis index modal assessment (Homa IR).
L’étude statistique a été réalisée avec le logiciel SPSS (version 18). Résultats : Les malades étaient âgés de 35 ans en
moyenne, le délai moyen d’évolution de la maladie était
12,8 ± 9 ans. La glycémie moyenne à jeun était significativement plus élevée chez les malades par rapport aux
témoins (5,56 ± 1,55 mmol/L contre 4,6 ± 0,67 mmol/L, p
< 0,001). L’insulinémie et le Homa IR étaient également
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Objectifs : Depuis les dernières recommandations de
l’American diabetes association 2010, le dosage de
l’hémoglobine glyquée est devenu un critère diagnostique
pour le diabète aussi spécifique que la glycémie à jeun
ou l’hyperglycémie provoquée par voie orale. La précision du dosage dépend en grande partie de la phase pré
analytique notamment la conservation de l’échantillon. Le
but de ce travail était d’étudier les effets de la conservation sur le dosage de l’hémoglobine glyquée par deux
méthodes : chromatographie liquide haute performance
(HPLC) et méthode immunoturbidimétrique. Matériels et
méthodes : L’étude a porté sur 14 échantillons de sang total
prélevés sur des tubes EDTA, aliquotés puis conservés à
+ 4 ◦ C et à - 20◦ C. Le dosage de l’HbA1C a été réalisé simultanément par méthode immunoturbidimétrique automatisée
sur Cobas Integra 400 de Roche et par HPLC sur automate
G7 TOSOH. Ce dosage a été d’abord réalisé à l’état frais
puis après une conservation à + 4 ◦ C et à - 20 ◦ C au 6e , 12e ,
21e et 30e jours (J0, J6, J12, J21 et J30 respectivement).
L’étude statistique a été faite par le logiciel SPSS (version
18). Nous avons utilisé le test non paramétrique de Wilcoxon pour la comparaison des échantillons appariés et le
test de Spearman pour l’étude de corrélation. L’absence de
différence significative (p > 0,05, intervalle de confiance à
95 %) signifie une bonne stabilité analytique. Résultats : La
moyenne des HbA1C sur TOSOH G7 était de 6,57 ± 1,57 %
49
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
et celle sur Cobas était de 6,77 ± 1,62 %. La comparaison des moyennes entre les deux techniques a montré une
différence statistiquement significative (p = 0,04). Toutefois, une corrélation significative positive a été observée
entre ces deux méthodes (r = 0,90). Pour la méthode HPLC
(TOSOH G7), il existe une mauvaise stabilité des échantillons conservés à + 4 ◦ C et à – 20 ◦ C et ceci pour les
différents temps testés (p < 0,05 à J6, J12, J21 et J30).
Par contre, pour la méthode immunoturbidimétrique (Cobas
Integra 400), les échantillons conservés à + 4 ◦ C et à
– 20 ◦ C ont montré une bonne stabilité et ceci jusqu’à
douze jours (p > 0,05). Conclusion : Le dosage de HbA1C
par méthode immunoturbidimétrique sur des échantillons
conservés jusqu’à 12 jours à +4 ◦ C et à -20 ◦ C a montré une
meilleure stabilité par rapport à chromatographie liquide
haute performance. L’hémolyse secondaire à la conservation affecte moins la méthode immunoturbidimétrique et
semble être détectée par la chromatographie liquide haute
performance.
Approche multimarqueurs :
prédiction du séjour en réanimation
après chirurgie cardiaque
Turki M, Mnif E, Naifar M, Houidi I, Elleuch A, Jamoussi
K, Ayedi F
Laboratoire de biochimie, CHU Habib Bourguiba, Sfax,
Tunisie
Objectifs : La durée de séjour en réanimation après
chirurgie cardiaque reflète la gravité des complications
postopératoires immédiates. Sa prédiction permet une
meilleure planification et prise en charge des patients. Notre
objectif a été d’étudier l’intérêt d’une approche biologique
multimarqueurs dans la prédiction de la durée de séjour
en réanimation après chirurgie cardiaque avec circulation
extracorporelle (CEC) et la comparer à l’approche monomarqueur classique. Patients et méthodes : Il s’agit d’une
étude prospective ayant porté sur les patients opérés de
chirurgie cardiaque avec CEC. Nous n’avons pas inclus
dans cette étude les patients opérés en urgence ou d’âge
< 18 ans ou ayant une insuffisance rénale ou hépatique
sévère préopératoire. Tous les patients ont bénéficié d’un
dosage du Nt-proBNP, de la procalcitonine (PCT), de la
troponine I cardiaque (TnIc) et de la protéine C-réactive
(CRP) avant et après la CEC, 4 heures après (H4) puis le
premier jour postopératoire. Dans le but d’évaluer l’apport
des différents marqueurs biologiques dans la prédiction
du séjour en réanimation, nous avons utilisé la régression linéaire pour calculer le séjour prédit par chaque
marqueur seul puis associé à d’autres marqueurs et nous
avons comparé les séjours prédits avec le séjour observé.
50
Résultats : Au total, 40 patients ont été retenus, d’âge
moyen de 56 ± 15 ans et de sex ratio de 1,3. La répartition selon le type de chirurgie a été comme suit : 23
pontages aorto-coronariens, 17 remplacements valvulaires.
D’après l’étude des courbes ROC aux différents temps
étudiés, les meilleurs sensibilités et spécificités pour la prédiction d’un séjour de plus de 3 jours sont retrouvés à J1. Les
séjours prédits par la PCT (mesurée à J1) seule (4,7 ± 0,84
jours) et le Nt-proBNP seul (5,4 ± 1,2 jours) ont été corrélés au séjour observé (5,4 ± 4,60 jours) avec r = 0,360 ;
p = 0,02 et r = 0,343 ; p = 0,03 respectivement. L’association
du Nt-proBNP à la procalcitonine (p = 0,009) prédit mieux
le séjour en réanimation que la PCT seule (p = 0,02) ou
le Nt-proBNP seul (p = 0,03). La meilleure association
est PCT + Nt-proBNP + CRP (p = 0,007). L’association de
la TnIc à cette combinaison ne modifie rien (p = 0,007).
Conclusion : L’approche de trimarqueurs associant PCT,
Nt-proBNP et CRP permet de prédire la durée de séjour
en réanimation et s’avère plus performante que l’approche
traditionnelle monomarqueur.
Dosage du cortisol libre urinaire :
étude de la corrélation
entre une technique immunoenzymatique
(avec et sans extraction)
et une technique radio-immunologique
Bouzidi H, Zebidi M, Ben Haj Khalifa A, Braham H
Laboratoire de biochimie, Hôpital Universitaire Tahar Sfar,
Mahdia, Tunisie
Introduction : Le dosage du cortisol libre urinaire (CLU)
est reconnu comme un dosage performant pour mettre
en évidence un hypercorticisme. Les techniques immunoenzymatiques (EIA) de dosage du CLU nécessitent une
étape d’extraction préalable. Le but de notre travail était
d’étudier la corrélation entre le dosage du CLU effectué sur
l’automate Access2 Beckman avec et sans extraction et la
technique radio-immunologique (RIA) directe. Matériels
et méthodes : Notre étude a porté sur 21 échantillons adressés par le service d’endocrinologie pour une suspicion d’un
syndrome de Cushing. Nous avons réalisé le dosage du CLU
sur l’automate Access2 Beckman basé sur une technique
immunoenzymatique avec et sans extraction, ainsi que par
une technique radio-immunologique. L’extraction du CLU
a été réalisée par le dichlorométhane. Résultats : Nos résultats ont montré une bonne corrélation entre la technique RIA
et celle immunoenzymatique avec et sans extraction (r respectivement égal à 0,95 et à 0,96). Cependant, le dosage du
CLU après une étape d’extraction au dichlorométhane est
mieux corrélé à celle du dosage radio-immunologique avec
une droite qui se rapproche de la forme y = ax. La corrélation
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Congrès
entre les résultats obtenus par le dosage EIA avec et sans
extraction est bonne (r = 0,919) et l’équation de la droite
de régression est : EIA avec extraction = 0,319*(EIA sans
extraction) – 8,889. Discussion/Conclusion : La technique
immunoenzymatique directe, plus rapide, s’apprête à la routine, est bien corrélée avec celle avec extraction et avec
la technique radio-immunologique. L’étape d’extraction
semble améliorer la spécificité du dosage.
nine est liée d’une part aux habitudes vestimentaires et
d’autre part à la carence alimentaire. Des mesures préventives devraient être mises en place par rapport à cette
population à risque.
Obésité et syndrome métabolique
dans une population de femmes marocaines
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
El Boukhrissi F, Balouch L, Bamou Y
L’hypovitaminose D chez l’adulte tunisien
Talbi E, Bahlous A, Bouzid K, Zrelli L, Abdelmoula J
Laboratoire de biochimie clinique, Hôpital Charles Nicolle,
Tunis, Tunisie
Introduction : L’implication de la vitamine D, tant dans
le métabolisme phosphocalcique que dans les maladies
auto-immunes, cancéreuses et cardiovasculaires est bien
documentée. Objectif : L’objectif de notre étude était de
déterminer la prévalence de l’hypovitaminose D en hiver
chez les adultes tunisiens et de chercher les facteurs de
risques de cette carence. Matériels et méthodes : Nous
avons recruté 64 adultes tunisiens pendant la période allant
de janvier à mai 2011. La population étudiée incluait 32
femmes et 32 hommes, d’âge moyen de 37 ± 10 ans. Cette
population ne présentait aucun antécédent pathologique
particulier et ne prenait au moment du prélèvement aucun
traitement médical. Les prélèvements ont été effectués sur
héparinate de lithium et la 25 OH D3 a été dosée par une
technique immunologique microparticulaire par chimiluminescence sur Architect ci8200 (Abbott). Résultats et
Discussion : Selon Souberbielle, l’insuffisance en vitamine
D est définie par un taux sérique de 25 OH D3 compris entre
20 et 30 ng/mL. Le déficit est modéré si les valeurs sont
comprises entre 10 et 20 ng/mL et la carence est confirmée par un taux inférieur à 10 ng/mL. La valeur moyenne
du 25 OH D3 était de 20 ± 7 ng/mL pour les hommes et
13 ± 5 ng/mL pour les femmes. En tenant compte des seuils
précédemment décrits, la carence en vit D était plus importante chez les femmes, 35 % vs 1 % chez les hommes,
avec une différence significative (p = 0,003). Un taux normal de 25 OH D3 a été retrouvé chez 5 patients (7 %).
Une insuffisance était observée chez 13 patients (21 %),
39 patients (61 %) avaient un déficit modéré et 7 patients
(11 %) avaient une carence en 25 OH D3 . La carence en
vit D était associée au port de voile (p = 0,0027) et à une
exposition solaire de moins de 30 min par jour (p = 0,009).
L’apport alimentaire était faible pour toutes les femmes
carencées. Nos données rejoignent celles décrites dans le
moyen orient (Arabie Saoudite et Liban). Conclusion : En
Tunisie, malgré l’ensoleillement, la fréquence importante
de l’hypovitaminose D décrite dans la population fémiAnn Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Laboratoire de biochimie et de toxicologie, Hôpital
militaire Moulay Ismail, Meknès, Maroc
Objectifs : Évaluer le taux d’obésité et du surpoids dans
une population de femmes marocaines et établir le degré
de corrélation entre l’indice de masse corporelle (IMC)
et les composantes du syndrome métabolique tel qu’ils
ont été définis par l’IDF en 2005 (International diabetes
federation). Matériels et méthodes : Etude prospective
intéressant 200 femmes volontaires consultantes à l’hôpital
militaire Moulay Ismail de Meknès, âgées de 18 à 58
ans, en surpoids (IMC entre 24,9 et 29,9 kg/m2 ) ou
obèses (IMC ≥ 30 kg/m2 ). Les caractéristiques anthropométriques (poids, taille, tour de taille), socioéconomiques
et les antécédents médicaux de la population étudiée ont
été recueillis sur une fiche préétablie. Ensuite, les patientes
ont bénéficié d’un bilan biochimique comprenant le dosage
à jeun de la glycémie, des triglycérides, du cholestérol
HDL et de l’insulinémie. L’analyse statistique a été réalisée sur le logiciel SPSS10.0. Résultats : L’âge médian
de la population étudiée est de 36 ± 7 ans, le tour de
taille médian est de 98 ± 8 cm, l’indice de masse corporelle médian est de 27,91 ± 4,52 kg/m2 et l’insulinémie
médiane est de 6,39 ± 6,012 mUI/L. 40 % des femmes
étaient obèses et 34,54 % étaient en surpoids. Environ
93 % des patientes avaient une obésité centrale (tour de
taille ≥ 80 cm) ; 38,46 % une hyperglycémie (glycémie à
jeun > 1 g/L ; 20,51 % une hyper-triglycéridémie (triglycérides > 1,50 g/L) et 66,67 % une hypo-HDLcholestérolémie
(HDL < 0,50 g/L). Le syndrome métabolique associant
trois critères était présent chez 28,20 % des patientes. Discussion : L’obésité et le syndrome métabolique touchent
respectivement 40 % et 28,2 % de la population étudiée.
93 % des femmes avaient une obésité centrale. Ces taux
alarmants sont dus aux changements des habitudes alimentaires et du mode de vie de la population marocaine qui
tend de plus en plus vers la sédentarité. La triade (obésité abdominale + hyperglycémie + hypoHDLémie) est la
forme la plus fréquente du syndrome métabolique et elle
touche 40,1 % des femmes obèses étudiées. La corrélation
entre obésité et syndrome métabolique est significativement
positive (r2 = 0,667). Conclusion : L’obésité représente un
problème émergent de santé publique. Chez les femmes
51
Congrès
méditerranéennes, l’obésité abdominale est la forme
prédominante. Cette dernière augmente considérablement
le risque de survenue du syndrome métabolique avec ces
conséquences cardiovasculaires fâcheuses.
Adaptation du dosage sérique
du méthotrexate sur Unicel DXC600®
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Saada S, Olichet B, Bronzini T, Berrafato S
Laboratoire de biochimie, Institut Curie, Paris
Introduction : Le traitement par méthotrexate haute dose
nécessite un suivi pharmacologique pour adapter la posologie d’acide folinique et l’hyperhydratation alcaline afin de
limiter les effets secondaires. L’étude réalisée a été menée
dans le but de valider l’adaptation du réactif méthotrexate
EMIT® de Siemens sur l’Unicel DxC 600® (Beckman).
Méthodes : La validation de méthode a été effectuée
selon les recommandations du Guide de validation des
méthodes du Cofrac et des documents établis par le groupe
de travail « Validation de techniques » de la Société
française de biologie clinique. Nous avons défini le domaine
d’analyse (linéarité), les limites de détection et de quantification, étudié la fidélité et la justesse, et réalisé la
corrélation avec une méthode de référence. Nous avons
également évalué l’incertitude de mesure pour la concentration 1 ␮mol/L correspondant au seuil pour l’adaptation
du traitement de sauvegarde 48 heures après le début du
traitement dans certains protocoles. Résultats : La mise
en place de deux méthodes de dosages a été nécessaire afin
d’obtenir une limite de quantification la plus faible possible
(0,05 ␮mol/L). La linéarité des méthodes adaptées s’étend
de 0,05 à 0,25 ␮mol/L d’une part, et de 0,25 à 1 ␮mol/L
d’autre part. Pour chaque méthode, les études de fidélité et
de justesse sont satisfaisantes avec des coefficients de variation de répétabilité et reproductibilité inférieurs à 6 %. La
corrélation avec la méthode par polarisation de fluorescence
(TDX® Abbott) est correcte. Conclusion : Les résultats de
l’ensemble des tests sont satisfaisants. Cependant la gestion quotidienne des dosages est lourde puisque 66 % des
échantillons reçus au laboratoire nécessitent une dilution
manuelle.
Introduction: Copeptin and urocortin are two peptides
related to stress and “fight or flight” response. Their use
for the diagnosis and prognosis of cardiovascular disorders
has recently been proposed. Troponin remains the reference
biomarker for the diagnosis of acute myocardial infarction (AMI) in emergency department (ED). High-sensitive
troponin-T (hsTnT) assays have recently been developed.
The objective of our study was to determine the circulating concentrations of copeptine, urocortine and hs-cTnT
levels in ED patients with symptoms suggestive of cardiac diseases. Methods: Seventy-five patients from ED
were included in the study. Biomarkers levels were evaluated at admission. Copeptine levels were determined with
the Kryptor® assay (Thermofisher). Urocortin levels were
measured with a specific ELISA (Uscn). Concentrations of
hs-cTnT were determined with the COBAS® electrochemiluminescent assay (Roche).Final diagnosis was established
by ED physicians and medical records. Results: Final diagnosis was AMI in 15 patients, cardiac arrhythmia (CA)
in 9 patients, heart failure (HF) in 18 patients, infectious
diseases (ID) in 9 patients and non-cardiopulmonary disorders (NCP) in 24 patients. The copeptin levels were not
statistically different for the different groups (geometric
means: 27.9 pmol/L, 23.9, 32.0, 14.5 and 13.3 in AMI,
CA, HF, ID and NCP, respectively). Urocortin levels were
also not statistically different for the different groups (20.3
pg/mL, 20.5, 15.4, 27.6 and 14.5 in AMI, CA, HF, ID and
NCP, respectively). In contrast, hsTnT levels were significantly in patients with cardiac disorders (24.7 pg/mL,
20.1, 25.6, 7.1 and 3.9 in AMI, CA, HF, ID and NCP,
respectively). Copeptin, urocortin and hsTnT levels were
increased in 7, 5 and 8 AMI patients, respectively. In this
group, 2 patients were hsTnT negative and copeptin positive. Conclusions: Our study in the first to investigate
simultaneously the levels of copeptin, urocortin and hsTnT
in ED patients at admission. In regards to our preliminary
results, the value of copeptin and urocortin testing appears
limited in comparison to measurement hsTnT for the exclusion diagnosis of cardiac disorders.
Une cytolyse hépatique chronique :
découverte fortuite d’une macro-ASAT
Marrakchi O1 , Talbi E1 , Mekki H2 , Hammami S1 , Zerelli
L1 , Najjar T2 , Abdelmoula J1
Copeptin, urocortin and troponin:
measurement
in emergency department patients
Laboratoire de biochimie clinique, Hôpital Charles Nicolle,
Tunis, Tunisie ; Service de gastroentérologie, Hôpital
Charles Nicolle, Tunis
Vandervinne S, Lepoutre T, Verschuren F, Gruson D, Thys F
Introduction : Les macroenzymes sont responsables
d’augmentations apparentes de l’activité sérique de
l’enzyme correspondante. Ils sont parfois sources de
Department of Laboratory Medicine, Cliniques Universitaires ST-Luc, Bruxelles, Belgium
52
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
bilans inutiles et parfois invasifs pouvant résulter de
leur méconnaissance. Nous rapportons une observation de
macro-ASAT de découverte fortuite. Cas clinique : Il s’agit
d’une femme de 39 ans aux antécédents d’astrocytome,
suivie au service de gastroentérologie depuis 2007 pour
lymphome gastrique type MALT de bas grade de malignité en rémission complète et chez qui on a découvert
à cette date une cytolyse hépatique chronique portant sur
l’aspartate aminotransférase (ASAT) avec des valeurs allant
jusqu’à 15 fois la normale (477 UI/L). Le reste du bilan
hépatique est normal. Le bilan étiologique, comprenant les
sérologies des hépatites B et C, un bilan immunologique, un
bilan hématologique, l’échographie abdominale et la biopsie hépatique, est revenu négatif. Devant la négativité de
ce bilan et la persistance de l’élévation isolée de l’ASAT,
nous avons suspecté la présence d’une macro-ASAT. La
recherche de macro-ASAT a été réalisée par technique
életrophorétique qui a mis en évidence la présence d’une
macro-ASAT, confirmée par chromatographie de filtration
sur gel. L’identification, par immunoélectrophorèse, des
immunoglobulines impliquées dans le macrocomplexe a
mis en évidence la présence majoritaire d’IgG et un peu
d’IgA. Discussion : Les macroenzymes sont des complexes
de haut poids moléculaire formés le plus souvent par la
liaison entre des enzymes et des immunoglobulines. Elles
sont le plus souvent sans caractère pathologique bien que
dans certains cas associés à des affections auto-immunes ou
néoplasiques. Le diagnostic de macro-ASAT doit être évoqué devant l’augmentation isolée et persistante de l’activité
sérique de l’ASAT, en l’absence de toute pathologie hépatobiliaire ou musculaire. Conclusion : Le diagnostic de
macro-ASAT devrait être envisagé devant toute élévation
isolée et inexpliquée de l’activité enzymatique et dont la
mise en évidence permet d’éviter des investigations aussi
invasives que coûteuses.
gie cardiaque avec CEC entre novembre 2008 et juin 2009.
Nous n’avons pas inclus dans cette étude les patients opérés
en urgence et ceux présentant des endocardites infectieuses
ou d’âge < 18 ans. Les dosages de la PCT ont été réalisés avant et après la CEC, 4 heures après, puis tous les
jours les 4 premiers jours. Les dosages de PCT ont été réalisés par méthode immunoenzymatique automatisée (Elecsys
2010). Pour l’étude statistique, nous avons utilisé le logiciel SPSS.11 et une probabilité (p) < 0,05 a été considérée
comme significative. Pour déterminer les différentes valeurs
seuils, nous avons utilisé les courbes ROC (receiver operating characteristic). La meilleure valeur seuil est la valeur
ayant le meilleur rapport sensibilité/1-spécificité. Résultats : Au total, 40 patients ont été retenus dans l’étude.
L’âge moyen de nos patients a été de 56,1 ± 15 ans, le
sex ratio de 1,3. En postopératoire, 8 (20 %) patients ont
présenté une infection postopératoire avec un délai moyen
d’apparition de 6,3 ± 1,5 jours. Les patients qui ont développé une infection postopératoire ont présenté des chiffres
de PCT significativement plus augmentés à partir de la
4e heure postopératoire (p < 0,05). L’analyse des courbes
ROC de la PCT aux différents temps étudiés pour la prédiction d’infection a montré que pour une valeur seuil de
1,2 ng/mL mesurée à J1 postopératoire, la PCT a une sensibilité de 100 % et une spécificité de 96 % avec une aire
sous la courbe de 0,995. Conclusion : La PCT paraît être
un marqueur prédictif d’infection postopératoire après chirurgie cardiaque avec CEC. Son dosage précoce permet
d’identifier une population à haut risque.
Variation des fractions de l’hémoglobine
à l’électrophorèse après congélation
Mtibaa H, Mnif E, Turki M, Naifar M, Lahyani A, Ayedi F
Laboratoire de biochimie, CHU H. Bourguiba, Sfax,
Tunisie
Procalcitonine : marqueur de prédiction
d’infection après chirurgie cardiaque
Turki M, Mnif E, Naifar M, Chaabouni K, Jamoussi K,
Ayedi F
Laboratoire de biochimie, CHU Habib Bourguiba - Sfax –
Tunisie
Introduction : La chirurgie cardiaque avec circulation
extracorporelle (CEC) est souvent associée à une réaction
inflammatoire généralisée rendant le diagnostic d’infection
postopératoire difficile dans ce contexte. Notre objectif était
d’étudier le rôle de la procalcitonine (PCT) comme marqueur prédictif d’infection postopératoire après chirurgie
cardiaque. Patients et méthodes : Il s’agit d’une étude
prospective ayant porté sur les patients opérés de chirurAnn Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Introduction : Les hémoglobinopathies sont des affections génétiques graves. Leur diagnostic précoce et leur
surveillance se basent sur des explorations biologiques, particulièrement les techniques séparatives de l’hémoglobine
(Hb). L’électrophorèse capillaire de l’Hb est une méthode
analytique qui permet l’étude semi quantitative des fractions de l’Hb et dépend des conditions de conservation
des échantillons de sang. L’objectif de notre travail est
d’étudier l’effet de la congélation sur les profils éléctrophorétiques de l’Hb par méthode capillaire. Matériel et
méthodes : Notre étude a porté sur 32 échantillons de sang
total. Trois protocoles de conservation ont été étudiés :
sang total conservé 7 jours à + 4 ◦ C, culot globulaire lavé
et congelé 7 jours et 14 jours à -20 ◦ C. L’électrophorèse
capillaire de l’hémoglobine a été réalisée sur l’automate
53
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
Capillarys (Sebia). Pour l’analyse statistique, nous avons
utilisé le logiciel SPSS 13.0. Une probabilité p < 0,05 a été
significative. Résultats : L’analyse des profils électrophorétiques des échantillons a permis de différencier 6 profils
fœtaux (18,75 %), 20 profils adultes normaux (62,5 %), 3
profils ␤thalassémiques (9,37 %) et 3 profils drépanocytaires (9,37 %). Après congélation à - 20 ◦ C, les variants
HbA et HbS ont été constamment présents, le variant HbF a
disparu de 4 échantillons et un nouveau variant a apparu au
niveau de la zone de migration Z11 pour 25 échantillons.
La comparaison des moyennes des variants de l’Hb suite
à la congélation a montré une diminution non significative
de HbA et de HbS, alors que l’augmentation de l’HbF et
la diminution de l’HbA2 ont été significatives. La comparaison des moyennes des variants de l’Hb en fonction de
la durée de congélation a montré une différence significative pour l’HbA2 et l’HbS. Conclusion : Notre étude
a noté que la congélation des échantillons destinés à une
électrophorèse de l’Hb provoque la diminution de certaines
fractions par mécanisme de dénaturation de la structure de
l’Hb. Ces variations n’ont pas affecté le diagnostic d’une
hémoglobinopathie (␤-thalassémie ou drépanocytose) pour
une durée de congélation de 7 jours. Une congélation des
globules rouges lavés à - 20 ◦ C pendant 7 jours pourrait être
autorisée.
with a commercially available biochip based immunoassay
was assessed. The sensitivity of the assay was 3.49 ng/mL
with linearity up to 132 ng/mL on the ADVIA 1650 analyser. The intra-assay precision, expressed as %CV, was
<8% for different levels. Correlation of the immunoturbidimetric assay with a commercially available biochip based
immunoassay generated the following linear regression
equations: y = 1.35x + 0.284, R2 = 0.943 (n = 355) using an
Advia 1650 and y = 1.9x –1.370, R2 = 0.954 (n=53) using an
RX Daytona. The data indicates that this immunoturbidimetric assay kit for the measurement of H-FABP is applicable
to automated analyzers and facilitates the rapid assessment
of early myocardial ischemia in clinical settings.
GÉNÉTIQUE
Plexiform neurofibromas genesis in NF1
is modulated by modifier ANRIL
Pasmant E1,2 , Sabbagh A1,2 , Masliah-Planchon J1,2 ,
Ortonne N3 , Laurendeau I1 , Melin L1,2 , Ferkal S4 , Hernandez L5 , Leroy K6 , Valeyrie-Allanore L7 , Parfait B1,2 , Vidaud
D1,2 , Bièche I1,2 , Lantieri L8 , Wolkenstein P7 , Vidaud M1,2
1
Rapid measurement of h-FABP in serum
with an immunoturbidimetric assay kit
Piper K, Lowry P, Gilmore K, Szabo M, Rachidi P,
McConnell RI, Campbell J, Fitzgerald SP
Randox Laboratories Ltd., Crumlin, United Kingdom
Heart-type fatty acid-binding protein (H-FABP) is a small
cytoplasmic protein, involved in lipid homeostasis. It is
abundant in heart muscle and is an early, highly sensitive
marker of myocardial injury. H-FABP has been shown to
aid in the diagnosis of acute myocardial infarction complementing cardiac Troponin I as it is elevated at a much earlier
timepoint. As such, H-FABP measurement provides early
diagnostic information, which is relevant for patient management. Analytical methods enabling the rapid detection
of H-FABP in biological fluids are advantageous in clinical
settings where a short time span for assessment is critical.
This study reports an immunoturbidimetric assay kit applicable to automated analysers for the rapid measurement of
H-FABP in serum. The principle of the assay is immunoturbidimetric: a latex agglutination complex is formed
between H-FABP and antibody coated latex particles. Analytical parameters were evaluated in automated analysers.
Intra-assay precision was assessed by testing serum samples
at defined medical levels (20 replicates) and the correlation
54
UMR745 Inserm, Université Paris Descartes, Faculté
des sciences pharmaceutiques et biologiques, 4 av. de
l’Observatoire, 75006, Paris ; 2 Service de biochimie et
de génétique moléculaire, Hôpital Beaujon, AP-HP, 100
Boulevard du Général Leclerc, 92110, Clichy ; 3 Département d’anatomo-cytopathologie AP-HP and Université
Paris Est Créteil (UPEC), Hôpital Henri-Mondor, 94000,
Créteil ; 4 Inserm, Centre d’Investigation Clinique 006, APHP, Groupe hospitalier Henri Mondor-Albert Chenevier,
94000, Créteil ; 5 Plateforme génomique IUH-Saint-Louis,
Université Paris Diderot et APHP, Hôpital Saint-Louis,
Paris ; 6 Platform of Biological Ressources, AP-HP
and Université Paris Est Créteil (UPEC), Hôpital HenriMondor, 94000, Créteil ; 7 Département de dermatologie,
Hôpital Henri-Mondor, AP-HP and EA 4393 LIC, Université Paris Est Créteil (UPEC), 94000, Créteil ; 8 Service
de chirurgie plastique et reconstructive, AP-HP and Université Paris Est Créteil (UPEC), Hôpital Henri-Mondor,
94000, Créteil
Subject: Neurofibromatosis type 1 (NF1) is characterized by highly variable expressivity with marked interand intra-familial variation not linked to NF1 mutation.
One of NF1 complications is the occurrence of plexiform
neurofibromas (PNFs) that have most often devastating
consequences, despite being benign tumors in nature.
Objectives: Genetic factors unrelated to the NF1 locus are
known to influence the number of PNFs in patients with
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
NF1, but none have yet been identified. Materials and
methods/Results: Here, we used high-resolution arrayCGH in order to identify candidate modifier genes involved
in PNFs development. For the first time, 9p21.3 deletions were found as the only recurrent somatic alterations
in NF1-associated PNFs. The smallest common deletion
encompassed the p15/CDKN2B-p16/CDKN2A-p14/ARFANRIL gene cluster, which has repeatedly been identified as
a major cancer-susceptibility locus in independent genomewide association studies. We carried out a family-based
association study using five previous identified cancersusceptibility tag SNPs located in chromosome region
9p21.3 in 1,105 subjects (740 NF1 patients and 365 nonaffected relatives) from 306 families. A robust significant
association (P = 0.0004) between SNP rs2151280 and the
number of PNFs was observed. Rs2151280 is located in
intron 3 of ANRIL, a large non coding RNA with a key
role in p15/CDKN2B-p16/CDKN2A-p14/ARF locus regulation. The functional role of rs2151280 was confirmed at
ARN level, as allele T (associated with a higher number
of PNFs) was significantly associated with reduced ANRIL
transcript levels (p = 1.4 × 10-7 ), suggesting that modulation of ANRIL expression mediates PNFs susceptibility.
Discussion/Conclusion: While our study identifies the first
“modifier” gene in NF1, it may offer clues to the molecular pathogenesis of PNFs and emphasizes the unanticipated
role of large noncoding RNAs in activation of critical regulators of development of NF1-associated tumors.
ABCB4 deletions in familial low
phospholipid-associated, and oral
contraceptives-induced cholestasis
Pasmant E1,2 , Goussard P1 , Baranes L1 , Laurendeau I2 ,
Quentin S3 , Ponsot P4 , Consigny Y5 , Farges O6 , Condat
B7 , Vidaud D1,2 , Vidaud M1,2 , Chen JM8 , Parfait B1,2
1
Service de biochimie et de génétique moléculaire, Hôpital Beaujon, AP-HP, 100 Boulevard du Général Leclerc,
92110, Clichy ; 2 UMR745 Inserm, Université Paris
Descartes, Faculté des sciences pharmaceutiques et biologiques, 4 av. de l’Observatoire, 75006, Paris ; 3 Plateforme
génomique, Institut universitaire d’hématologie (IUH),
Université Paris Diderot ; et Laboratoire d’hématologie
APHP, Hôpital Saint-Louis, 75010 Paris ; 4 Service de
gastroentérologie, Hôpital Beaujon, AP-HP, 100 Boulevard
du Général Leclerc, 92110, Clichy ; 5 Cabinet Médical,
43 rue Guersant, 75017, Paris ; 6 Service de chirurgie digestive, Hôpital Beaujon, AP-HP, 100 Boulevard
du Général Leclerc, 92110, Clichy ; 7 Service d’hépatogastroentérologie, Hôpital Saint-Camille, 2 rue des Pères
Camilliens, 94360, Bry-sur-Marne ; 8 Inserm U613 et EFSBretagne, Brest
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Subject: The wide clinical spectrum of the ABCB4
gene (ATP-binding cassette subfamily B member 4) deficiency syndromes in humans includes low phospholipidassociated cholestasis (LPAC), intrahepatic cholestasis of
pregnancy (ICP), oral contraceptives-induced cholestasis
(CIC) and progressive familial intrahepatic cholestasis type
3 (PFIC3). No ABCB4 mutations are found in a significant
proportion of patients with these syndromes. Materials and
methods: In the present study, 102 unrelated adult patients
with LPAC or CIC/ICP were screened using recent high
resolution gene dosage methodologies. Results: Here, we
describe for the first time ABCB4 partial or complete heterozygous deletions in 7% (3/43) of LPAC patients, and in
2% (1/59) of ICP/CIC patients. Discussion/Conclusion:
Our observations urge to systematically test patients with
LPAC, ICP/CIC, and also children with PFIC3 for the presence of ABCB4 deletions using molecular tools allowing
detection of gross rearrangements. In clinical practice, a
comprehensive ABCB4 alteration screening algorithm will
permit the use of ABCB4 genotyping to confirm the diagnosis of LPAC or ICP/CIC, and allow familial testing. An
early diagnosis of these biliary diseases may be beneficial
because of the preventive effect of ursodeoxycholic acid
on biliary complications. Further comparative studies of
patients with well-characterized genotypes (including deletions) and phenotypes will help determine whether ABCB4
mutation types influence clinical outcomes.
Expression des miRNA dans les tumeurs
des gaines nerveuses associées
à la neurofibromatose de type 1
Masliah-Planchon J1,2 , Pasmant E1,2 , Laurendeau I1 ,
Ortonne N3 , Parfait B1,2 , Valeyrie-Allanore L4 , Leroy K3 ,
Wolkenstein P4 , Vidaud M1,2 , Vidaud D1,2 , Bièche I1,2
1
UMR745 Inserm, Université Paris Descartes, Faculté des
sciences pharmaceutiques et biologiques ; 2 Service de
biochimie et de génétique moléculaire, Hôpital Beaujon,
AP-HP ; 3 Département de pathologie, Hôpital Henri Mondor, AP-HP ; 4 Service de dermatologie, Hôpital Henri
Mondor, AP-HP
Introduction : La neurofibromatose de type 1 (NF1)
compte parmi les maladies héréditaires à transmission autosomique dominante les plus fréquentes. Le gène NF1,
impliqué dans la maladie, code une protéine GAP (GTPaseactivating protein) qui agit comme un suppresseur de
tumeur en régulant de façon négative les voies de signalisation médiées par les protéines Ras et impliquées dans
la prolifération cellulaire. La perte de fonction du gène
NF1 est ainsi associée à une prédisposition à développer des tumeurs des gaines nerveuses aussi bien bénignes
55
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
(neurofibromes cutanés et neurofibromes plexiformes) que
malignes (neurofibrosarcomes ou MPNST). Les miRNA
sont de petits ARN simple brin non codants qui régulent
l’expression génique en inhibant la traduction en protéine.
Ils sont impliqués dans de nombreux processus biologiques
et apparaissent fréquemment dérégulés dans divers types de
tumeurs. Objectif : Analyser l’expression des miRNA dans
les différents types de tumeurs des gaines nerveuses associées à la NF1. Matériels et méthodes : L’expression de
377 miRNA a été analysée à partir de 9 neurofibromes cutanés, 41 neurofibromes plexiformes et 15 MPNST. Après
reverse transcription à partir de l’ARN total extrait des différentes tumeurs, chaque miRNA a été quantifié en combinant
une technologie microfluidique à une PCR quantitative
en temps réel avec des sondes TaqMan (Applied Biosystems). L’expression des 377 miRNA a ensuite été comparée
dans les différents types de tumeurs par un test de MannWhitney. Résultats : Onze miRNA sont significativement
dérégulés dans les neurofibromes plexiformes comparativement aux neurofibromes cutanés. Deux de ces miRNA
ciblent les anti-oncogènes ATM et PTEN. 106 miRNA sont
significativement dérégulés dans les MPNST par rapport
aux neurofibromes plexiformes. Parmi ces miRNA, plusieurs interviennent dans l’EMT (epithelial-mesenchymal
transition), la régulation de l’expression des gènes HOX,
du cycle cellulaire ou de la voie de signalisation PI3KAKT. Conclusion : L’étude du microRNAome constitue
l’un des éléments d’une approche de génomique intégrée
actuellement développée pour mieux comprendre la physiopathologie des tumeurs des gaines nerveuses. Les gènes
cibles identifiés par l’analyse du microRNAome seront validés in vitro dans un modèle de culture primaire de cellules de
Schwann issues de neurofibromes plexiformes de patients
atteints de NF1.
phenotypes of MS among Algerian Arab subjects. Patients
and methods: Eighty nine individuals (28 male and 61
female, mean age 37. 56 ± 10.04 years) with sporadic MS
and 250 healthy controls (100 male, 150 female, mean
age 38.45 ± 9.32 years) were included in our study. The
diagnosis of MS was made according to Mc Donald et al.
2001. APOE genotypes were determined in all the subjects
(patients and controls) by validated PCR methods. Results:
The most common presenting symptoms were unilateral
visual loss or blurring (18%), numbness and paraesthesiae
of legs, arms, face, and/or multiple sites (24.71%), diplopia
(2.2%), and unsteadiness of gait and/or ataxia (10.11%).
The disease course was classified as relapsing–remitting
(78.8%) and relapsing–progressive (12.5%). Homozygous
E3 was the most frequent genotype (75.3%). One patient
(1.1%) and 2 control subjects were homozygous for E4.
There were no significant differences in allele frequencies between patients and controls, although there was a
trend towards lower E2 frequency in the patients (p=0.08),
additionally, there was no difference in frequencies in E4
between patients and controls. Discussion: Recently, APO
E polymorphism has been investigated in MS patients and
an association emerged between the APO E 4 allele and a
more rapid progression of disability in MS. In the present
study the APO E genotype frequency distribution in multiple sclerosis population analysed was not significantly
different from controls population. Conclusion: The relationship between APOE polymorphism and susceptibility
to MS and its clinical phenotype is controversial.
ApoE genotypes in Algerian multiple
sclerosis patients
1
Sifi Y1,2 , Sifi K2,3 , Boulefkhad A1,2 , Abadi N2,3 , Benlatreche
C2,3 , Hamri A1,2
Service de neurologie, CHU de Constantine ; 2 Laboratoire de biologie et de génétique moléculaire, CHU de
Constantine ; 3 Laboratoire de biochimie, CHU de Constantine
1
Introduction: Apolipoprotein E (APO E) is an ubiquitous
apolipoprotein involved in the metabolism of cholesterol,
Recently, APO E allele distribution has been investigated
in multiple sclerosis (MS), and an association between the
course of MS and the APOE ␧4 allele was found. The
aim of our study was to explore the relationship between
APOE polymorphism, susceptibility to MS and clinical
56
Syndrome de Fraser : diagnostic
moléculaire et interprétation des résultats
Nachury C1 , Bozon D2 , Francannet C3 , Dechelotte P4 ,
Creveaux I1,5
Laboratoire de biochimie et biologie moléculaire, Faculté
de médecine, CHU de Clermont-Ferrand ; 2 Laboratoire de
cardiogénétique, Centre de biologie Est, CHU de Lyon ;
3 Service de génétique médicale, Hôpital Estaing, CHU
de Clermont-Ferrand ; 4 Service d’anatomie-pathologique,
Hôpital Estaing, CHU de Clermont-Ferrand ; 5 CNRS,
UMR 6247 ; Clermont Université ; Inserm, U931, Faculté
de médecine, GReD, Clermont-Ferrand
Le syndrome de Fraser est une maladie rare, à transmission
récessive autosomique. C’est un syndrome polymalformatif, dont les signes cardinaux sont la cryptophtalmie et la
syndactylie. Ils sont associés à d’autres anomalies crâniofaciales ainsi qu’à des malformations génitales, urinaires
et/ou pulmonaires. L’expression est variable en fonction
des familles. Des critères cliniques de diagnostic ont été
définis par Van Haelst et al. en 2007. Actuellement, le
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
diagnostic anténatal est échographique au cours du
2e trimestre et reste difficile à affirmer en l’absence
d’antécédents familiaux. Chez l’homme deux gènes,
FRAS1 et FREM2, ont été identifiés comme responsables
du syndrome de Fraser. A ce jour, seules 2 mutations différentes ont été décrites dans FREM2 et 19 dans FRAS1.
Dans le cadre de ce travail, notre objectif initial a été
d’identifier, par PCR-Séquençage, des mutations pouvant
être à l’origine du syndrome de Fraser chez des patients
issus de 8 familles et diagnostiqués sur des critères cliniques. Nous avons analysé en priorité le gène FRAS1
(42,5 % des cas documentés). Nous avons pu mettre en
évidence au terme de ce travail 3 mutations non sens, 2
mutations introniques affectant l’épissage, une duplication
et enfin 4 variations de séquences non décrites à ce jour
dont nous avons précisé la valeur à l’aide d’algorithmes
bio-informatiques (Polyphen. v2, SIFT, Alamut - Interactive Biosoftware ; Human Splicing Finder - Desmet et al.,
2009 ; HBond - Freund et al., 2003) et de tests fonctionnels
basés sur la transfection de constructions minigène dans des
cellules HeLa (Baralle D et Baralle M, 2005). L’analyse du
gène FRAS1 permet ainsi d’apporter au clinicien une confirmation moléculaire du diagnostic de syndrome de Fraser
dans environ 40 % des cas et d’avoir la possibilité de proposer un diagnostic moléculaire anténatal précoce lors d’une
future grossesse. Nous envisageons maintenant la mise au
point de l’analyse des exons codants du gène FREM2 pour
augmenter le taux de couverture à 52,5 %.
RPGRIP1, CEP290, RPE65, LCA5, CRB1, CRX, LRAT,
SPATA7, RDH12, TULP1, AIPL1 et RD3. Nous rapportons dans ce travail, l’observation d’une fillette âgée de 3
ans, non consanguine et qui présente depuis la naissance un
nystagmus pendulaire, une malvoyance sans photophobie
ou signe digito-oculaire. Le fond d’œil a mis en évidence
un aspect en poivre et sel au niveau de la macula. De
même l’électrorétinogramme était plat. Par ailleurs l’IRM
cérébrale s’est révélée normale. Devant cet aspect clinique, électrophysiologique et radiologique le diagnostic
d’amaurose congénitale de Leber type I a été retenu. Par
la suite le séquençage direct des différents gènes impliqués dans l’ACL type I a permis de mettre en évidence la
mutation récurrente c.112C>T du gène RD3. En conclusion
l’identification de cette mutation nous a permis de confirmer le diagnostic d’amaurose congénitale de Leber chez
notre patiente et de formuler un conseil génétique adéquat
pour les grossesses ultérieures.
HÉMATOLOGIE
Influence du délai de centrifugation
en hémostase
Carrière N1 , Fay A1 , Chabbert E2 , Boulier A1
1 Département d’hémostase - 2 Département qualité ; Labo-
ratoire Biomed34, Site laboratoire clinique Ste Thérèse,
34200 Sète
Amaurose congénitale de Leber secondaire
à la mutation c.112C>T du gène RD3
Aboussair N1,2 , Perrault I3 , Rozet JM3 , Kaplan J3
1
Service de génétique, CHU Mohammed VI, Marrakech,
Maroc ; 2 Faculté de médecine et de pharmacie de Marrakech, Université Cadi Ayyad, Maroc ; 3 Unité de génétique et épigénétique des maladies métaboliques neurosensorielles et du développement, Hôpital Necker Enfants
Malades, Paris, France
L’amaurose congénitale de Leber (ACL, MIM 204000)
est la plus précoce et la plus sévère des dystrophies rétiniennes héréditaires puisqu’elle est responsable de cécité
ou de malvoyance profonde néonatale ou périnatale. Cette
affection est caractérisée par un fond d’œil normal à la
naissance contrastant avec un électrorétinogramme (ERG)
éteint témoignant d’une perte totale de la fonction des
cônes et des bâtonnets. L’ACL est une maladie héréditaire
à transmission autosomique récessive. Cette maladie est
caractérisée par une grande hétérogénéité génétique et physiopathologique. En effet à ce jour quatorze gènes identifiés
ont démontré leur implication dans la maladie : GUCY2D,
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Introduction : La phase préanalytique est primordiale pour
toutes les analyses et principalement en hémostase. Le
GEHT a actualisé le protocole pour les tests courants en
2007. Toutefois, si les conditions de centrifugation sont
décrites, aucune recommandation sur le délai entre le prélèvement, la centrifugation et l’analyse n’a été formulée.
Au moment où les plateaux techniques s’éloignent des
laboratoires préleveurs, il nous est apparu fondamental de
disposer de ces données. Objectif : Le but de cette étude
est d’évaluer l’influence du délai entre le moment du prélèvement et celui de la centrifugation sur quatre paramètres
d’hémostase : INR, TCA, fibrinogène et D-dimères. Matériel et méthodes : Nous avons prélevé 3 tubes citratés
(Citrate de sodium tamponnée 0,109 M (3,2 %) 9NC)
pour chacun des 30 patients de l’étude. Les analyses ont
été effectuées sur l’automate STA-Compact® (Diagnostica
Stago) avec les réactifs STA- Néoplastine CI Plus (TPINR), STA-Cephascreen (TCA), STA-Fib (fibrinogène) et
STA-Liatest-DDi (D-dimères). Les tubes no 1 sont prélevés
à T0, centrifugés et analysés à T < 2 h selon les recommandations. Les tubes no 2 sont prélevés à T0, centrifugés à T
< 2 h et analysés à T 8 h. Les tubes no 3 sont prélevés à
57
Congrès
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
T0, centrifugés et analysés à T8 h. Les tubes ont été centrifugés selon les recommandations : 15 minutes à 2 000 g
à 20 ◦ C (+/- 2 ◦ C). Entre le prélèvement, la centrifugation et l’analyse, les tubes ont été conservés à température
ambiante (18-22 ◦ C) en position verticale. Résultats : Les
28 INR analysés se situent entre 1 et 3,65 ; les ratios des 30
TCA entre 0,92 et 1,47 ; les 30 fibrinogènes entre 2,09 et
7,29 et les 29 D-dimères entre 0,22 et > 4. Les coefficients
de corrélation sont :
INR
TCA
Fibrinogène
D-dimères
1er tube vs
2e tube
0,9950
0,9885
0,9923
0,9855
1er tube vs
3e tube
0,9988
0,9867
0,9921
0,9872
2e tube vs
3e tube
0,9980
0,9919
0,9882
0,9952
Conclusion. Les excellentes corrélations entre les analyses
effectuées 8 heures après le prélèvement avec différents
délais de centrifugation permettent de conclure à une noninfluence du délai de centrifugation. Les analyses à 8 heures
sont corrélées avec les analyses effectuées dans les 2 heures.
Il serait utile que le GEHT puisse réévaluer pour chaque
paramètre les conditions analytiques acceptables.
Évaluation des performances d’un nouvel
automate d’immunohématologie :
Erythra® Grifols
Pellegrina L, Challand M
Laboratoire d’hématologie, Biomnis Gerland, 17-19 avenue Tony Garnier, 69357 Lyon cedex 07
Objectifs : L’automate Erythra® est un automate complet
d’immunohématologie, récemment commercialisé par la
société Grifols (support carte gel-filtration). Le but de
nos essais était d’évaluer la praticabilité et la performance analytique de cet automate pour les analyses
de routine (groupe sanguin ABO-RH1, phénotype RHKEL1, dépistage d’anticorps anti-érythrocytaires, test
direct à l’antiglobuline) et pour des analyses spécialisées
(identification d’anticorps anti-érythrocytaires et phénotypes étendus). Matériel et méthodes : Groupe sanguin
ABO-RH1 et RH-KEL1 : 105 échantillons sur automate Autovue Innova® Ortho versus automate Erythra®
Grifols ; Recherche d’agglutinines irrégulières (RAI) :
437 échantillons en dépistage et identification par test
indirect à l’antiglobuline (TIA) et test papaïné (P) en
méthode manuelle cartes gel-filtration-panels d’hématies
Diamed versus méthode automatisée Erythra cartes-panels
d’hématies Grifols ; Test direct à l’antiglobuline (TDA) :
71 échantillons en technique manuelle carte-gel IgG+C3d
58
Diamed versus technique automatisée Grifols carte-gel
IgG+C3d+polyvalent ; Phénotypes KEL2 ; JK1,2 ; FY1,2 ;
MNS3,4 (30 échantillons) : technique manuelle tube Diamed versus technique automatisée Grifols. Résultats :
Groupe sanguin ABO-RH1 et RH-KEL1 : 100 % de concordance. Cadence : 45 prélèvements/heure ; RAI-dépistage :
99 % de concordance. Cadence : 100 dépistages/heure ;
RAI-identification : 98 % de concordance (mêmes spécificités identifiées) ; Anticorps supplémentaires identifiés par
Erythra : 3 anti-RH1, 1 anti-RH3, 1 anti-KEL1, 1 antiMNS1 ; Sensibilité (étalon national CNRGS) : 2 ng/mL
(en test indirect à l’antiglobuline) ; Cadence : 68 identifications (TIA) en 2 heures ; 68 (TIA+P) en 4 heures ; TDA et
phénotypes non RH-KEL1 : 100 % de concordance. Discussion : Les avantages-inconvénients et particularités des
techniques testées automatisées sur Erythra® seront discutés ici. Conclusion : L’automate Erythra® présente une
cadence élevée et une capacité importante de chargement en
réactifs, consommables et échantillons. Les essais de corrélations par rapport à nos techniques actuelles de routine
sont très satisfaisants sans discordance majeure constatée
avec 6 anticorps d’intérêt supplémentaires identifiés. La
sensibilité de détection de l’anti-RH1 est bien inférieure
au seuil réglementaire fixé dans l’arrêté du 26 avril 2002
relatif à l’immunohématologie (20 ng/mL) et du nouveau
projet d’arrêté (10 ng/mL).
Prevalence of haemoglobin variants
in Greek patients
Stamouli M, Skliris A, Totos G, Kokoulas D, Karagianni E
Department of Microbiology and Immunology, Naval and
Veterans Hospital, Athens, Greece
Objectives: Haemoglobinopathies are inherited disorders
of haemoglobin synthesis or of its structure, which cause
significant morbidity and mortality worldwide. The prevalence of carriers of abnormal hemoglobin is within the range
of 5%-7% globally, while the number of new cases of affected infants is estimated at 3000000 per year. The aim of this
study was the estimation of the prevalence of heamoglobin
variants in Greek patients. Materials and methods: The
present study was conducted on 875 blood samples derived
from patients aged between 3 and 86 years, born in different
regions of Greece. 510 (58%) samples were males and 376
(42%) were females. Participants were hospital inpatients
and outpatients, as well as candidates for diving certification. Venous blood samples were collected by venipuncture
into K+ EDTA anticoagulated tubes. Sample evaluation
included measurement of total Hb, Hct, RBC, MCH, MCV,
RDW, sickle tests, as well as iron and ferritin status. Identification and quantification of haemoglobins was carried
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
out by High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
on the Menarini HA-8160 automated analyser. HPLC is
suitable for the simultaneous detection and quantification
of haemoglobin fractions. Abnormal cases were confirmed by haemoglobin electrophoresis at pH 8.6 on the
Sebia Hydrasys fully automated electrophoresis system.
Results: Out of the 875 patients 660 (86.86%) had normal HbA, HbA2 and HbF levels and 115 (13.14%) had
at least one abnormal such level. 98 (11.2%) patients had
␤-thalassaemia trait with elevated HbA2 levels, 8 patients
(0.91%) had sickle cell trait, 7 patients (0.8%) had both ␤thalassaemia and sickle cell traits and 2 patients (0.22%)
had hereditary persistence of fetal hemoglobin presenting
HbF levels of 15% and 30% respectively. Discussion: The
haemoglobinopathies constitute a major public health problem because of their high frequency and clinical severity.
Greece is a country with considerable frequency of both
␤-thalassaemia and sickle cell traits. Our finding of a prevalence of 11.2% for the ␤-thalassaemia trait and 0.91% for
sickle cell trait is consistent with previous reports. In national scale studies the prevalence range of ␤-thalassaemia
trait was found 5% to 15% and the prevalence range of
sickle cell trait was found 1%, although considerable regional differences have been observed. Hemoglobinopathies
are now encountered in most countries of the world as
a result of global population movements and their distribution changes continuously over the years. In the future,
there will be a strong need for collaboration on information
strategies, screening and genetic counseling among countries, in order to deal effectively with this serious health
problem.
Improving and automating the haematology
routine worhorse with hematoflow concept
Kassengera Z, Penninck D, Pradier O
Laboratory of Haematology, CUB ULB Hospital Erasme,
Brussels, Belgium
Objectives: Automated differential white blood cell count
can not certain cell populations passing through the blood
which must be analyzed secondarily by optical or digitized microscopy. In hospitals, these reviews represent
10-25% of cases according to established criteria. In this
context, Beckman Coulter proposed the new HematoFlowTM concept using flow cytometry of 20000 cells
stained by the CytoDiffTM monoclonal antibodies combination prior to microscopy in a fully automatic process
controlled by the middelware Remisol Advance. In the new
concept, the alarms generated by the haematology analyzers and decision rules written in Remisol induce the
review by flow cytometry before any check by microscopy.
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Methods: Observational study of 5 months routine work in
the academic hospital. Flagged samples and sample with
less than 2000 WBC/␮L, >1000 monocytes/␮L and more
than 4000 lymphocytes/␮L passed first through CytoDiff
staining and flow cytometry analysis using the HematoFlow
workflow and then, detected abnormal cell populations are
controlled by microscopy according to a local algorithm
and after microscopic confirmation the diff provided by
CytoDiff or microscopy is validated. Results: HematoFlow
includes two UniCel® DXHTM 800 Coulter Cellular Analysis Systems, FP1000 Cell Preparation System and FC500
Flow Cytometer from Beckman Coulter controlled by the
middleware Remisol. The 12.56% review rate in stand alone
is reduced to 6.27% after application of the rules of patient
location and anteriority in Remisol. During the 5 months
routine we performed 53300 WBC differentials leading to
3425 CytoDiff, an average of 30.17 CytoDiff/day. Abnormal cell population (variant lymphocyte, blasts, CD16 low
neutrophils) are visually controlled by microscopy (30.52%
of the CytoDiff sample, 9.45 slides/day). The microscope
count is only used when the abnormal cells are not addressed by Hematoflow (variant lymphocytes) or in case of
discrepancies between the CD16 low expression cells and
the Myelemia count by microscope (5.15% of the CytoDiff; about two slides a day). Conclusion: HematoFlow
and CytoDiff effectively automate the routine haematology.
The additional cost reagents, being offset by the increased precision (20000 cells instead of cells counted 100),
the new information (T and B cells count) and the drastic
reduction of the use of microscopy allowing the transfer of
technologists to new postings. Using the new CytoDiffCXP
Software with the autogating, reduce TAT.
Polymorphisme BCL11A associé
à l’expression de l’hémoglobine F
chez le drépanocytaire tunisien
Chaouch L1 , Moumni I1 , Kalai M1 , Darragi I1 , Chaouachi
D1 , Ben Chaabene A2 , Hafsia R3 , Ghanem A4 , Abbes S1
1
Laboratoire d’hématologie moléculaire et cellulaire, Institut Pasteur de Tunis. Université Tunis El Manar, Tunisie ;
2 Service de Biologie Clinique à l’Institut Salah Azaiz de
Tunis ; 3 Service d’hématologie biologique, Hôpital Aziza
Othmena, Tunis ; 4 Service de biochimie - Hôpital Ben
Arous de traumatologie et des grands brulés
La physiopathologie des hémoglobinopathies est complexe
et non univoque. En ce qui concerne la maladie drépanocytaire, un facteur paraît essentiel : le taux résiduel
d’hémoglobine fœtale qui empêche la polymérisation de
l’hémoglobine S et la falciformation des globules rouges.
La variation interindividuelle du taux de l’hémoglobine F
59
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
semble être sous le contrôle de certains loci touchant le
gène globine et d’autres situés dans des gènes non globines.
Parmi les gènes candidats, BCL11A semble jouer un rôle
de répresseur de l’HbF. Certains polymorphismes touchant
ce gène ont été étudiés dans le cadre de la variation du taux
de l’HbF dont le plus important est le rs 11886868. Dans ce
travail nous nous sommes intéressés à l’étude d’une éventuelle corrélation entre le rs 11886868 de BCL11A et le
taux de l’hémoglobine F dans une population drépanocytaire SS. L’étude a concerné 60 drépanocytaires partagés
en deux groupes, ceux qui ont un taux de l’HbF < 15 % et
ceux qui ont un taux de l’HbF > 15 %. L’étude moléculaire
a été réalisée par PCR/séquençage suivi d’une analyse statistique effectuée par le logiciel compare 2 (version 1.02)
en se basant sur le principe de table de contingence pour
le calcul de l’indice de significativité P et le calcul du
risque relatif RR pour chaque valeur de p < 0,05 considérée
comme significative. Notre résultat a révélé la présence des
trois génotypes : CC, CT et TT dans notre population. Le
génotype normal CC est toujours associé à un taux d’HbF
> 15 % et le génotype CT est associé à un taux faible
de l’HbF < 15 %. Nos résultats ont montré que le génotype CT et le variant T sont significativement associés à la
variation du taux de l’hémoglobine F dans la drépanocytose avec p = 0,029 et p = 0,016, respectivement. Le calcul
du risque relatif a montré que le génotype CT et le variant
T semblent être associés à une diminution du taux de l’HbF
avec RR = 0,08 ; CI 95%(0,002-0,885) et RR = 0,039 ; CI
95% (0,178-0,853) respectivement.
Hétérogénéité du maniement
des anti-vitamine K (AVK)
dans le département de l’Aveyron
J1 ,
JP2 ,
O3 ,
W4 ,
Watine
Couaillac
Delrous
Mokaddem
Carriere P4 , Kristoffersen AH5 , Thue G6 , Sandberg S5,6
Laboratoires de biologie des hôpitaux de (1) Villefranchede-Rouergue, (2) Cahors et (3) Decazeville ; (4) Unité
d’angiologie et d’explorations fonctionnelles vasculaires,
Hôpital de Rodez, France (5) Laboratory of Clinical Biochemistry and NOKLUS, Haukeland University Hospital,
Bergen, and (6) Noklus (http://www.noklus.no/), Norway
Introduction : Nous avons évalué le maniement des AVK
par les médecins exerçant en Aveyron. Observation :
Il s’agit d’une enquête internationale d’assurance qualité post-analytique en biologie médicale effectuée sous
l’égide de Noklus (la synthèse des résultats de tous les
autres centres participants est en cours de publication). Le
60
questionnaire, comprenant deux observations, a été adapté
à nos pratiques : notamment nous avons remplacé la warfarine par la fluindione. Sur 282 médecins que nous avions
sollicités, 109 ont répondu, dont 62 % de généralistes. Parmi
les généralistes 81 % voient entre 1 et 10 patients sous
AVK par semaine, versus 41 % dans les autres spécialités.
Le Centre de référence et d’éducation aux antithrombotiques d’Ile-de-France (Creatif, Hôpital Lariboisière, 2 rue
A. Paré, 75010 Paris) a également reçu et complété le questionnaire. Discussion : Pour une cible d’INR à 2,5, les seuils
utilisés pour décider d’un changement de posologie d’AVK
varient entre 1,3 et 2,3 pour les valeurs basses et entre 2,8
et 4 pour les valeurs hautes. Les risques hémorragiques ou
ischémiques sous AVK, versus sans traitement AVK, sont
largement surestimés en situation d’équilibre comme en
situation de surdosage. Les fréquences des mesures d’INR
en cas de traitement équilibré, et surtout en cas de surdosage, tendent à être trop élevées. En cas de surdosage
asymptomatique avec INR à 4,8 seulement 59 % des participants appliquent la recommandation de la HAS consistant
à sauter une prise d’AVK et les attitudes divergent aussi
quant à l’importance de la réduction de la dose d’AVK et
au nombre de jours sous posologie réduite avant le prochain
INR, l’attitude du Creatif étant à peine dominante parmi les
participants et différente de celle préconisée par la HAS et
par le GEHT. Conclusion : Notre évaluation met en évidence une hétérogénéité des pratiques et des connaissances
concernant surtout la prise en charge des surdosages asymptomatiques et l’appréciation des risques hémorragiques ou
ischémiques, malgré l’existence de recommandations supposées être simples.
Test de génération de thrombine
et thromboélastométrie sur sang total :
tests globaux de la mise en évidence
de la variabilité inter-individuelle
de la réponse au traitement par HBPM
Benziane O, Chaari M, Sassi M, Elalamy I, Gerotziafas G
Laboratoire d’hématologie biologique, Hôpital Tenon –
AP-HP, Paris
Le dosage de l’activité anti-Xa des patients traités par
HBPM est recommandé pour la surveillance biologique
du traitement chez certains patients. Cependant, cet index
est en corrélation très faible avec la survenue d’épisodes
hémorragiques ou thrombotiques au cours du traitement.
Des études récentes montrent que les tests globaux de
la coagulation : test de génération de thrombine (TGT)
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
et la thromboélastométrie sur sang total (TF-TEM), sont
sensibles à l’effet anticoagulant des HBPM. Objectifs :
Étudier l’effet du traitement par HBPM sur le TGT et la
TF-TEM et analyser la variabilité inter-individuelle de la
réponse au traitement. Matériels et méthodes : Au total, 40
patients sous traitement par énoxaparine à titre préventif ou
curatif ont été inclus. La génération de thrombine (GT) a été
évaluée par la méthode CAT en utilisant le réactif
PPPreagent. La TF-TEM a été étudiée avec l’instrument
ROTEM en utilisant de l’Innovin diluée. Résultats : La
dose injectée de l’énoxaparine a été corrélée avec l’activité
anti-Xa dans le plasma, la prolongation des paramètres
chronométriques de la GT, du thromboélastogramme et
avec l’inhibition de la phase de propagation de la GT.
Cependant une variabilité inter-individuelle de 20 % de
l’effet inhibiteur du traitement par énoxaparine sur la GT
et la thromboformation a été observée. Conclusion : Le
TGT et la TF-TEM sont deux tests sensibles à l’effet antithrombotique global du traitement par énoxaparine. Leur
utilisation a mis en évidence la présence d’une variabilité inter-individuelle de la réponse anticoagulante du
traitement qui n’est pas prévu par le dosage de l’activité
anti-Xa.
Clé diagnostique des lymphopathies
chroniques par cytométrie en 10 couleurs
Brauner J, Beukinga I, Amraoui Z, Kassengera Z, Pradier O
Laboratoire d’hématologie, Hôpital Erasme, Belgique
Objectifs : Détermination d’une combinaison d’anticorps
décrivant les populations lymphocytaires normales et les
clonalites B et T en un seul tube par cytométrie 10
couleurs. Ce premier tube détermine les combinaisons
ultérieures caractérisant complètement la lymphopathie
chronique. Matériels et méthodes : Échantillons sanguins
et médullaires de patients (N = 50) présentant différentes
lymphopathies chroniques connues, suivis au laboratoire
d’hématologie d’un hôpital universitaire possédant un service clinique d’hématologie spécialisée. Après 3 lavages, un
marquage par les anticorps et une lyse des globules rouges,
les échantillons sont analysés sur un Navios (Beckman
Coulter). La combinaison comporte 14 anticorps (CD45,
CD8, CD4, CD5, CD3, CD19, CD38, ␭, ␬, CD23, CD5,
CD10, CD14, CD27) liés à 10 fluorochromes différents.
Résultats : Les monocytes sont éliminés sur base du
CD14. Les lymphocytes B sont définis par le CD19 et la
monoclonalité par la répartition des chaînes légères kappa
et lambda. CD5 et CD10 orientent vers les 3 familles
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
de lymphome (5+/10- ; LLC MCL et quelques MZL,
5-10- ; lymphome de la zone marginale et apparente, 510 + vers les folliculaires et les DLBCL) et CD27, CD20
et CD23 affinent l’orientation et renforcent la différentiation LLC/MCL. CD27 et CD38 isolent les plasmocytes et
la combinaison permet aussi d’individualiser les hématogones et les lymphocytes B mémoires. Les lymphocytes T
sont définis par le CD3 et le CD5 et la clonalité est évoquée par la balance CD4/CD8 et l’étude du CD27. Il n’y
a pas de marquage direct des lymphocytes NK qui sont
évoqués comme lymphocytes non T non B. Les lymphopathies chroniques de notre série (essentiellement des
LLC-B) ont toutes été correctement orientés. Discussion/Conclusion : Cette combinaison d’anticorps permet
en un tube de décrire les populations normales lymphocytaires T, d’évoquer les NK et de caractériser les B, dont les
hématogones et les plasmocytes et, d’autre part, de détecter les clonalités lymphocytaires et de réaliser une première
caractérisation de celles-ci. Cette combinaison de 14 anticorps sur 10 couleurs s’inscrit dans la même logique que
le tube LST d’Euroflow, mais sur une base 10 couleurs et
en technologie Beckman Coulter. L’apport du CD10, du
CD20, du CD23 et du C27 permet une pré-caracterisation
précise des lymphomes et un second tube avec moins de
6 anticorps suffit à établir le diagnostic rendant l’approche
peu onéreuse et rapide.
Aplasie médullaire toxique chez un
nourrisson : complication de la Dépakine
Lakhdari N, Mebarki M, Bioud B.
Service de pédiatrie, CHU Sétif, Algérie
L’observation : Le nourrisson S. A. né le 12/08/2010,
demeurant à BBA, issu d’un mariage non consanguin est
admis à notre service pour la prise en charge d’une bicytopénie évoluant depuis 2 mois. Il est né à terme d’une
grossesse normale mais l’accouchement s’est compliqué
d’une asphyxie (APGAR = 3/10) avec convulsions ayant
nécessité un traitement à base de valproate de sodium
(Dépakine). Première hospitalisation le 2/10/2010 à l’âge
de 2 mois pour une anémie à 60 g/L d’hémoglobine, normochrome, macrocytaire (VGM : 100 fL) associée à une
thrombopénie à 36 G/L confirmée au frottis. Le malade a
été transfusé. Il a présenté par la suite une infection urinaire
puis une méningite. Le 5/12/2010 : le nourrisson est hospitalisé à Sétif pour une anémie sans ictère ni syndrome tumoral.
Sur le plan neurologique, on note une hypotonie généralisée
sans tenue de la tête ; la poursuite oculaire est mauvaise et
61
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
il n’y a pas de sourire réponse. L’hémogramme révèle une
bicytopénie : Hb : 76 g/L ; VGM : 98 fL ; TGMH : 30,8 ;
Plaquettes : 21 G/L ; GB : 5,5 G/L ; PN : 2 000/mm ; Lymphocytes : 3 500/mm3 ; Réticulocytes : 3 % (74 100/mm3 ) ;
Frottis sanguin : pas de cellule suspecte ; Myélogramme
et l’apposition sont hypoplasiques. En attendant le résultat
de la biopsie médullaire, un test thérapeutique à la vit B12
est fait mais négatif au 7 e jour. Le bilan étiologique revient
négatif (hépatique normal, sérologie normale). Anatomopathologie : mœlle hypoplasique. L’interrogatoire précis
retrouve une dose de Dépakine donnée depuis la naissance
10 fois supérieure à celle indiquée, suite à une erreur de
prescription. Arrêt progressif de la Dépakine et une corticothérapie (Célestène). Évolution à 3 semaines ; bonne
coloration cutanéo-muqueuse ; l’examen neurologique note
un tonus normal ; sensibilité conservée ; pas de déficit
moteur et un bon développement psychomoteur. Normalisation de l’hémogramme Hb : 100 g/L GB : 9 800/mm3
Plaquettes : 256 G/L. A 6 mois : état clinique stable et hémogramme normal. Conclusion : bien que la Dépakine soit
un traitement fréquent en pédiatrie, des accidents hématologiques à type d’agranulocytose et de thrombopénies sont
fréquents même à doses usuelles.
un volume globulaire moyen à 66 fl, un chiffre de plaquettes à 463 000/mm3 et un nombre de globules blancs
à 14 200/mm3 . Le bilan d’hémostase a montré les résultats
suivants : TQ = 75 %, TCA = 55 sec (témoin = 32 sec), fibrinogène = 3,29 g/L, temps d’occlusion plaquettaire = 262 sec
(VN : < 150 sec), l’activité cofacteur à la ristocétine du facteur von Willebrand (FWRCo) = 56 %. Un frottis au bout
du doigt a montré des agrégats plaquettaires diminués en
nombre et en intensité. L’étude des fonctions plaquettaires
par agrégométrie a montré une absence d’agrégation induite
par l’acide arachidonique, le collagène et l’ADP et ce même
aux fortes concentrations. L’agglutination induite par la
ristocétine à 1,25 mg/mL est normale mais n’est pas suivie d’agrégation. L’étude par cytométrie en flux a montré
une diminution significative du nombre des GP IIb-IIIa (20
% par rapport au sujet normal). Discussion/Conclusion :
Le diagnostic retenu pour ce patient est la thrombasthénie
de Glanzmann type II. Une enquête familiale a été demandée. Le traitement du patient a consisté en la transfusion de
3 culots plaquettaires et l’administration du LasilixR .Une
carte comportant la mention de la pathologie a été délivrée
à la mère en lui expliquant qu’elle doit la présenter en cas
de récidive ou de chirurgie.
La thrombasthénie de Glanzmann :
à propos d’un cas
Maladie hémolytique néonatale à deux
allo-anticorps
Aidi Z1 , Abderrazek F1 , Hammemi S2 , Makhloufi I1 , Saadaoui M1 , Ajleni N1 , Gueddiche N2 , Hassine M1
Zakaria I1 , Abderrazek F1 , Hammemi S2 , Aidi Z1 , Ajleni
N1 , Makhlouf I1 , Saadaoui M1 , Gueddiche N2 , Hassine M1
Laboratoire d’hématologie, CHU de Monastir, Tunisie ;
Service de pédiatrie, CHU de Monastir, Tunisie
Laboratoire d’hématologie, CHU de Monastir, Tunisie ;
Service de pédiatrie, CHU de Monastir, Tunisie
La thrombasthénie de Glanzmann, un trouble plaquettaire
exceptionnel et héréditaire, est caractérisée par une absence
totale d’agrégation plaquettaire due à un déficit en complexe
␣IIb ␤ 3 ou à une anomalie qualitative de ce complexe.
Objectif : L’objectif de ce poster est d’établir le diagnostic d’une pathologie hémorragique chez un enfant. Patient
et méthodes : Il s’agit d’un enfant de deux ans et demi
admis au service de pédiatrie du CHU de Monastir pour
gingivorragie et taches ecchymotiques. L’interrogatoire des
parents a révélé une consanguinité de troisième degré
ainsi que la notion de thrombasthénie de Glanzmann chez
la cousine de l’enfant. Le bilan d’entrée a compris une
numération formule sanguine (NFS) réalisée sur l’automate
Gen-S (Beckman Coulter), la détermination du temps de
Quick (TQ), du temps de céphaline activateur (TCA) et du
fibrinogène par méthode coagulométrique sur l’automate
STA Compact (Stago), ainsi que la réalisation du temps
d’occlusion plaquettaire en utilisant les cartouches collagène/épinéphrine (PFA-100). Résultats : la NFS a montré
une hémoglobine à 9,1 g/dL, un hématocrite à 26,4 %,
Objectif : Étude d’un cas d’une maladie hémolytique néonatale. Patient et méthodes : Il s’agit d’un nouveau-né âgé
de 36 heures de groupe sanguin (GS) ABO :-1,-2 Rh : 1
admis au service de pédiatrie pour pâleur et ictère intense.
Le bébé est issu d’un mariage non consanguin, sa mère est
âgée de 42 ans de GS ABO : -1,-2 Rh : 1. Ses antécédents
obstétricaux sont 6 grossesses à terme et un avortement à 20
semaines. Le bilan à l’admission a comporté une numération formule sanguine (NFS) réalisée sur l’automate Gen-S
(Beckman Coulter), un groupage sanguin ABO-Rh, un test
de Coombs direct, un bilan hépatique, un bilan rénal, CK,
LDH, une glycémie et un test de compatibilité avec le sérum
de la mère. Résultats : GS ABO :-1,-2 Rh : 1, 2, 3, 4, 5 et
KEL :-1. La NFS a montré une hémoglobine à 5 g/dL, un
nombre de globules blancs à 20 500 /mm3 , un chiffre de plaquettes à 190 G/L, un nombre de réticulocytes à 350 G/L,
une CK à 3 369 U/L, une LDH à 1 067 U/L, une bilirubine totale à 260 ␮mol/L et une glycémie à 3 mmol/L ;
le test de Combs est positif type IgG. Le test de compatibilité a été réalisé sur un concentré de globules rouges de
62
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
GS : ABO :-1,-2 Rh : 1,2, 3, 4, 5 KEL:-1, déleucocyté,
et de moins de 5 jours. Le cross match est revenu incompatible. Pour cela, une recherche d’agglutinine irrégulière
(RAI) sur le sérum de la mère et le test d’élution sur les
globules rouges du bébé ont été réalisés. Ils ont donné le
même résultat : présence d’un anti c associé à un anti E.
Le nouveau-né a été transfusé par du sang compatible de
GS : ABO :-1,-2 Rh : 1,2,- 3, -4, 5 KEL:-1. Des séances de
photothérapie intense ont été réalisées sur 3 jours. Le bébé
a eu des crises tonico-cloniques et devenu peu réactif, il est
mis sous GardenalR et a eu une entérocolite infectieuse
rapidement compliquée par coagulation intravasculaire
disséminée, qui a nécessité un traitement antibiotique et
la transfusion de 2 poches de PFC ABO :-1,-2 Rh :1 et une
poche de CGR compatible phénotypée RH : 1,2,-3, -4, 5
KEL : -1 et 6 CPS. Conclusion : Il est décrit que les alloimmunisations aux antigènes immunogènes autres que D
augmentent, et contrairement à cette dernière, il n’existe
pas de prévention. Ce cas souligne la gravité de la maladie
hémolytique néonatale à deux anticorps dirigés contre deux
antigènes autres que D, maladie qui reste un problème de
santé publique ainsi que la lourdeur de sa prise en charge
thérapeutique.
MICROBIOLOGIE
Molecular inversion probes for sensitive
detection of Mycobacterium tuberculosis
order to detect a short conserved 18 bp sequence included
in DR locus in 25 isolates of M. tuberculosis. Additional
sensitivity was obtained by introducing modifications in
pyrosequencing methodology, by these means we achieved
to detect 500 fg of M. tuberculosis DNA.
Dissemination of CTX-M-15 ␤-lactamase
among clinical isolates
of Enterobacteriacae in Tunisia
Lahlaoui H1 , Ben Haj Kehlifa A2 , Khedher M2 , Ben
Moussa M1
1
Laboratoire de microbiologie, Hôpital militaire de Tunis,
Monfleury, Tunisie ; 2 Laboratoire de microbiologie, Hôpital Tahar Sfar de Mahdia, Tunisie
Among 67 extended-spectrum ␤-lactamase (ESBL)producing Enterobacteriaceae isolates collected from
hospitalized patients at the University Hospital of Mahdia
in Tunisia from 2009 to 2010, 53 isolates were CTXM producers. PCR analysis, and sequencing demonstrated
that harbored CTX-M-15 ␤-lactamase that were transferred
by conjugation. Insertion sequence ISEcp1was found upstream of blaCTX-M-15 genes. The gene was detected in both
clonal and non clonal isolates, as defined by PFGE. MLST
analyses showed that ST323 was dominant in K. pneumoniae and ST131 in E. coli. Mahdia is another Tunisian city
that is affected by the spread of clinical isolates producing
CTX-M-15.
Novais RC1 , Borsuk S2 , Dellagostin OA2 , Thorstenson YR3
1
Department of Science, University of State of Rio de
Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil ; 2 Biotechnology Center,
Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, Brazil ; 3 Life
Technologies, Foster City, USA
Recherche de carbapénèmases
chez Klebsiella pneumoniae
Essayagh T1,2 , Elhamzaoui S1
1
Nucleic acid-based detection of Mycobacterium tuberculosis infections has the potential to improve the analysis of the
tuberculosis epidemiology and patient care by increasing
the specificity and sensitivity of diagnosis. One potential
diagnostic sequence, the DR locus, is present in all isolates of M. tuberculosis complex bacteria. It encodes no
known gene product but is useful for molecular typing of
M. tuberculosis because of its fortuitous absence in nontuberculosis strains of mycobacteria. The DR locus contains
a variable number of short direct repeats interspersed with
non-repetitive spacers and is commonly used as a target
for the spoligotyping method, a technique based on the
detection of the presence or absence of distinct spacers between the repeats. In this study, we attempted to combine the
specificity of molecular inversion probe (MIP) technology
with the sensitivity of modified pyrosequencing readout in
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Laboratoire de bactériologie, Hôpital militaire
d’instruction Mohamed V, Rabat, Maroc ; 2 Université Mohamed V Souissi, Faculté de médecine et de
pharmacie, Rabat, Maroc
Étude prospective de six mois réalisée au laboratoire de
microbiologie de l’hôpital militaire de Rabat, qui objective
à rechercher par des méthodes phénotypiques la production de carbapénèmases chez Klebsiella pneumoniae. 211
souches de K. pneumoniae ont été analysées. Elles provenaient pour la plupart des services de longue durée de
séjour et d’hospitalisation de malades à risque élevé de
morbidité : les services de médecine (40,9 %) suivis des
services de chirurgie (24,4 %) et de réanimation (11,8 %).
Les prélèvements les plus fréquents étaient représentés
par les urines (63,8 %) suivie des pus (16,5 %) et des
hémocultures (11,8 %). 27 % des souches ont exprimé un
63
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
phénotype de bêta-lactamase à spectre étendu (BLSE) ;
3 souches étaient résistantes à l’ertapénème. Ces mêmes
souches étaient résistantes à l’issue de l’E-test (ETP) et
positives au test de Hodge. Ceci correspond à un taux
de 1,42 % de Klebsiella pneumoniae productrices de carbapénèmases de type KPC. À l’issue de notre étude,
trois souches de type Klebsiella pneumoniae carbapénèmase (KPC) ont été mises en évidence, ce qui confirme
l’existence de ce phénotype au sein de l’hôpital. Cependant
le gène codant pour ce type de résistance ne pourra être
déterminé que par des méthodes moléculaires.
Mécanismes de résistance
des Pseudomonas aeruginosa
et Acinetobacter baumanii à l’imipénème
Essayagh T1,2 , Moket D1 , Elhamzaoui S1
1
Laboratoire de bactériologie, Hôpital militaire
d’instruction Mohamed V, Rabat, Maroc ; 2 Université Mohamed V Souissi, Faculté de médecine et de
pharmacie, Rabat, Maroc
Etude prospective de 9 mois qui objective à déterminer
le mécanisme de résistance à l’imipenème par métallo-␤lactamase (MBL) ou par imperméabilité des souches de P.
aeruginosa et d’A. baumanii et d’en évaluer leur prévalence parmi toutes celles isolées au service de bactériologie
de l’hôpital militaire de Rabat. 105 souches bactériennes
sont isolées, dont 42,9 % sont résistantes et/ou de sensibilité réduite. 11,8 % des souches productrices de MBL
sont des A. baumanii et de 54,6 % sont des P. aeruginosa ; les souches non productrices de MBL (dont 88,2 %
pour A. baumanii et 45,4 % de P. aeruginosa) sont résistantes à l’imipenème par la régulation du système d’efflux
et/ou la mutation des porines. La présence de ces souches
montre le degré élevé de contamination dans les services
où les méthodes invasives sont courantes. Des stratégies
thérapeutiques doivent être mises en place afin de mieux
contenir la propagation de ces souches. C’est pourquoi, la
collaboration entre les médecins spécialistes et les microbiologistes doit être étroite avant toute antibiothérapie à
large spectre. Enfin, des mesures d’hygiène et des règles
sanitaires doivent être de rigueur dans tous les services de
soins intensifs tels la réanimation, la pneumologie et la neurologie et cela sous la surveillance du Comité de lutte contre
les infections nosocomiales.
64
Impact médico-économique du dépistage
intrapartum du streptocoque du groupe B
(SB) par PCR en temps réel sur Genexpert
El Helali N5 , Giovangrandi Y3 , Kitzis MD5 , Bobin M2 ,
Berthelier C6 , Fresson J1
1
Département d’information médicale, maternité régionale universitaire, Nancy ; 2 Département d’information
médicale, 3 Gynécologie-Obstétrique, 4 Microbiologie,
5 Microbiologie, 6 Service de comptabilité analytique,
Hôpital Paris-Saint-Joseph, Paris, France
Objectif : Depuis janvier 2010, la prévention de l’infection
néonatale précoce à SB (INPSB) repose dans notre établissement, sur le dépistage intrapartum par PCR en temps
réel pour les accouchements à terme. L’objectif de cette
étude préliminaire est d’évaluer le coût de cette stratégie
du point de vue de l’Assurance-maladie (AM) ainsi que les
conséquences en termes d’INPSB, en comparaison avec la
prévention basée sur le dépistage anténatal utilisé en 2009.
Matériel et méthodes : Un recueil exhaustif des INPSB
a été réalisé. Les tarifs 2009 (tarif des GHS et des suppléments) ont été appliqués pour les données réelles constatées
en 2009 et pour les données des 9 premiers mois de 2010.
Le coût du dépistage intrapartum par PCR pour l’AM,
non codifié, a été évalué sur la base de la nomenclature
Montpellier. Résultats : Les taux d’attaque de l’INPSB,
pour les accouchements à terme, étaient de 9,06 ‰ en 2009
(prévention basée sur le dépistage anténatal par culture)
et de 4,23 ‰ en 2010 (prévention basée sur le dépistage
intrapartum par PCR) (p = 0,04). En 2010 sur la base de
l’activité 2009, si la prévention avait toujours été basée sur
le dépistage anténatal, on pouvait attendre 19 INPSB avec
90 journées d’hospitalisation en néonatologie et 33 en USI.
En appliquant les tarifs 2009, le coût de la prise en charge
de l’AM aurait été de 90 311 D pour la néonatologie et de
29 662 D pour le dépistage anténatal par culture : coût total
de 119 973 D (= A). En réalité seulement 9 INPSB ont été
recensées avec 68 journées d’hospitalisation en néonatologie et 4 journées en USI. Le coût réel de prise en charge
pour l’AM a été seulement de 35 805 D pour la néonatologie
et aurait été de 113 705 D pour le dépistage intrapartum par
PCR : coût total de 149 510 D (= B). Au total pour les 2 070
accouchements à terme et 2 130 nouveau-nés vivants à
terme sur la période, on observe une diminution du nombre
de journées d’hospitalisation de 24,44 % en médecine néonatale et de 87,9 % en USI, avec un surcoût global estimé
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
de 29 537 D (= B-A) si l’ensemble des tarifs avaient pu être
appliqués. Conclusion : Cette étude préliminaire montre
que le dépistage intrapartum du SB par PCR en temps réel
a permis une diminution significative du taux des INPSB
et une diminution du nombre de journées d’hospitalisation
pour INPSB. Le surcoût théorique serait alors de seulement
14,27 D par accouchement pour 10 INPSB évitées, sous
réserve que le surcoût de ce dépistage puisse être intégré au
tarif du séjour d’obstétrique. Des études complémentaires
multicentriques sont nécessaires pour valider ces premiers
résultats.
G/P genotypes of rotavirus circulating
in Tunisia (2008-2009)
Ben Hadj Fredj M, Fodha I, Kacem S, Chouikha A,
Trabelsi A
UR06SP20, Laboratory of Microbiology, Sahloul University Hospital, 4054 Sousse, Tunisia
Background: Rotaviruses are the most common aetiological agents of gastroenteritis in children worldwide. The
distribution of rotavirus genotypes varies between geographical areas and from one season to the next. The aim of
this study was to characterize the different genotypes G and
P circulating in Tunisia between 2008 and 2009. Material
and methods: A total of 380 faecal specimens collected
from children less than 5 years old were screened by ELISA
for the presence of group A rotavirus antigen. Rotaviruspositive samples were used for G and P typing by multiplex
semi-nested RT-PCR. Results: Rotavirus detection rate
was 23% (N = 87). Globally, G genotypes found were G3
(44.6%), G1 (35.7%), G4 (17.9%) and G2 (1.8%). Two
specimens (3.4%) had mixed G profiles. Concerning VP4
genotyping, P genotypes detected were P [8] (87%) and P[4]
(13%). Mixed P profiles were detected in 7 cases (13.2%).
Discussion-Conclusion: Interestingly, it was unexpected to
detect a predominance of G3 genotypes particularly marked
during the year 2009, as the major VP7 genotype usually
found in Tunisia from 1995 to 2007 was G1. The detection of multiple rotavirus strains in single faecal specimen
demonstrates the potential for gene reassortment to occur
at high rates in natural rotavirus infections. These results
underline the need for regular surveillance of circulating
Tunisian strains.
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Une méningite de Mollaret
Vièles-Marais D1 , Kabiri K1 , Raby FX2 , Larrieu JL3 ,
Mangelle C4 , Jandot F5 , Delsol M1 , Serre G1 , Nogueira L1
1
Laboratoire de biologie cellulaire et cytologie, CHU
de Toulouse ; 2 Service d’accueil des urgences, CH de
Lourdes ; 3 Service de neurologie, CH de Tarbes ; 4 Laboratoire de virologie, CHU de Toulouse ; 5 Laboratoire de
biologie polyvalente, CH de Lourdes
Un homme de 76 ans s’est présenté aux urgences pour des
céphalées frontales évoluant depuis 3 jours, initialement
fébriles, traitées par antibiotiques. A l’admission, l’examen
clinique était strictement normal. Parmi les antécédents, on
relevait néanmoins des méningites récurrentes non étiquetées vers l’âge de 30 ans et une méningite lymphocytaire
en 2008. Sur le plan biologique, la protéine C- réactive
était égale à 46 mg/L, la numération sanguine ne montrait
pas d’hyperleucocytose. L’examen cytologique du liquide
céphalo-rachidien (LCR) objectivait un liquide hématique
et inflammatoire, lymphocytaire. Le LCR comme les urines
étaient stériles à la culture. L’analyse fine des éléments
cellulaires du LCR coloré par MGG, a permis de noter
la présence de rares monocytes de morphologie atypique,
présentant un contour nucléaire irrégulier avec de larges
expansions « en doigts de pieds » et un cytoplasme souvent
basophile avec un renforcement périphérique. Cet aspect
évoquant celui des cellules de « Mollaret » a conduit à
rechercher dans le LCR, par Real Time PCR, la présence
du Virus Herpes Simplex de type 2 (VHS-2) souvent associé aux méningites de « Mollaret ». Cette recherche s’est
avérée positive. La sérologie herpétique, réalisée ultérieurement, était aussi positive. Le diagnostic retenu est celui de
méningite de Mollaret. Il s’agit d’une forme relativement
rare de méningite aseptique récurrente, dont la première
description date de 1944 (Dr P. Mollaret). Fréquemment
sous-estimée, elle se caractérise par une pauvreté des signes
cliniques. La guérison est spontanée sans séquelle. Les
récurrences, espacées de quelques semaines à quelques
mois, se succèdent sur une période de trois à cinq ans en
général, mais il a pu être observé des résurgences après
de nombreuses années. Classiquement, on observe dans le
LCR riche en lymphocytes et monocytes, de grandes cellules monocytaires caractérisées par l’aspect du noyau « en
doigts de pieds » et une coloration bleutée du cytoplasme
péri membranaire. Restées longtemps de cause inconnue,
65
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
les méningites de Mollaret sont maintenant retrouvées associées à une infection par l’HSV-2 dans 60 % des cas. La
présence d’autre virus a aussi été documentée. Un traitement anti-herpétique peut permettre de réduire la durée et
de la fréquence des poussées. Une meilleure connaissance
de cette pathologie, tant pour les cliniciens que pour les biologistes, permettrait la prise en charge optimale du patient
affecté.
microscopes à fluorescence basés sur les LED impliquent
que la formation des techniciens de laboratoire soit renforcée pour un meilleur contrôle de la TB.
Détection des mycobactéries tuberculeuses
par la microscopie à fluorescence
grâce à un nouvel outil : le cyscope® TB
1
Lehman LG1,2 , Ngapmen Yamadji AL3 , Ngo Sack F2 , Bilong
Bilong CF3
Faculté des sciences, Université de Douala ; 2 Faculté de
médecine et des sciences pharmaceutiques, Université de
Douala, 3 Département de biologie et physiologie animales,
Faculté des sciences, Université de Yaoundé I, Cameroun
1
Objectifs : Le but de cette étude était d’analyser la sensibilité de la technique de coloration à l’auramine-rhodamine
pour le diagnostic de la tuberculose sur un nouveau type de
microscope: le CyScope® TB (Partec, Görlitz, Germany),
de tester une méthode modifiée de coloration à l’auraminerhodamine (AR) et d’analyser la durée de conservation
des frottis d’expectorations colorés à l’AR. Matériel et
méthodes : 300 échantillons de crachats ont été recueillis
chez des patients suspects d’une infection à Mycobacterium tuberculosis ou sous traitement antituberculeux d’août
à novembre 2009. Des frottis ont été réalisés à partir
de chaque échantillon, colorés par chacune des méthodes
et enfin analysés au CyScope®TB, microscope à diodes
photoluminescents (LED). Les lames colorées à l’AR ont
ensuite été conservées afin d’analyser la durée de conservation des frottis. Ensuite 4 autres protocoles de fluorescence
ont été élaborés et testés afin de réduire le temps de manipulation. Résultats : La positivité des frottis pour les BAAR
en MO était de 27,7 % contre 33,3 % en MF (p = 0,06). Le
temps de coloration à l’AR a pu être réduit de 21 minutes
à 10 minutes soit une réduction de temps de 50 % environ.
Les frottis colorés à l’AR se conservent moins longtemps
que ceux colorés par la technique de ZN et commencent à
perdre leur intégrité à partir du 14e jour au point de changer
de degré de positivité à partir du 21e jour. Conclusion :
Cette étude montre que la microscopie à fluorescence (MF)
est relativement plus sensible que la microscopie ordinaire
(MO) classique. Les récents progrès effectués en faveur des
66
Encéphalite rubéolique de l’adulte :
à propos de deux cas
Ayed S1 , Ben haj khalifa A2 , Ayed S1 , Bouzgarrou R1 ,
Gharbi R1 , Kheder M2 , Fekih hassen M1 , Atrouss S1
Service de réanimation médicale, CHU Tahar Sfar, Mahdia, 5100, Tunisie ; 2 Service de microbiologie, CHU Tahar
Sfar, Mahdia, 5100, Tunisie
Introduction : La rubéole est caractérisée par une éruption
maculopapuleuse généralisée avec fièvre et lymphadénopathies. Cette infection peut s’accompagner de complications
neurologiques (survenant dans 1 cas sur 6 000), à type
de myélite, méningite ou méningo-encéphalite. Lorsqu’elle
touche la femme enceinte, le risque de malformations
congénitales sévères est important. Dans ce cadre, nous
décrivons deux cas de méningo-encéphalite rubéolique.
Cas clinique No 1 : Mr B.S âgé de 19 ans, était admis
en réanimation pour méningo-encéphalite lymphocytaire,
survenant quatre jours après une éruption maculeuse généralisée associée à des arthralgies. La ponction lombaire
montrait la présence de 2 éléments blancs, Une méningoencéphalite virale était suspectée devant le contexte
épidémique de rubéole, la notion de rash cutané et l’absence
de vaccination préalable ont été rapportés, une sérologie de la rubéole était en faveur d’une primo-infection,
le taux des IgM dans le LCR était de 1,7 avec un seuil
d’absorbance de 0,4. L’évolution était favorable. Cas clinique No 2 : Mme H.M âgée de 17 ans, primigeste à 27
semaines d’aménorrhée, était admise en réanimation pour
coma fébrile en rapport avec une méningo-encéphalite à
liquide clair, quatre jours avant, un syndrome grippal avec
éruption maculeuse généralisée. La ponction lombaire avait
montré la présence de 170 éléments blancs, dont 90 %
des lymphocytes. Le profil sérologique de la rubéole était
en faveur d’une primo-infection et le taux des IgM dans
le LCR était de 2,1. La patiente était intubée et ventilée
mécaniquement pendant 10 jours. La patiente a accouché
à J11 d’hospitalisation. L’évolution ultérieure était favorable pour la mère et le bébé. Discussion/Conclusion :
La rubéole touche généralement les enfants de bas age,
mais en l’absence de vaccination, cette infection peut
s’observer à tout âge. Chez la femme enceinte non immunisée, le risque d’anomalies fœtales varie en fonction de
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Congrès
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
l’âge gestationnel au moment de l’infection maternelle.
Lorsque l’infection maternelle a lieu avant 11 semaines
d’aménorrhée, le risque d’anomalies fœtales est majeur, de
l’ordre de 90 %. L’encéphalite post rubéolique est rare. Elle
survient le plus fréquemment un à huit jours après le début
de l’éruption. Le diagnostic est confirmé par la mise en évidence d’anticorps IgM antirubéolique dans le LCR par la
méthode Elisa immunocapture. L’encéphalite post rubéolique guérit sans séquelles dans 80 % des cas. La mortalité
varie de 7,8 à 20 %.
Nord-Pas-de-Calais : évaluation du
diagnostic de la vaginose bactérienne
Canis F1 , Fruchart A2 , Bissinger MC2 , Laboratoires
de Biologie Médicale du Nord-Pas-de-Calais3 , Dugimont
JC3 , Leignel C4 , Deghilage S4 , Courcol R2 , Brabant G4 ,
Subtil D5
1
Laboratoire de microbiologie – hygiène, CH Valenciennes, 2 Laboratoire de bactériologie - hygiène, CHRU
Lille, 3 Association des biologistes de la Région Nord
- Picardie, 4 Service de gynécologie obstétrique, Hôpital
Saint Vincent, Lille, 5 Service de gynécologie obstétrique,
Hôpital Jeanne de Flandre, CHRU Lille
Premeva est une étude régionale randomisée qui consiste à
dépister et à traiter les femmes ayant une vaginose bactérienne (VB) au 1er trimestre de leur grossesse. L’objectif
de l’étude est de diminuer la fréquence des avortements tardifs et la grande prématurité. 203 LBM (hôpitaux et privés)
de la région Nord - Pas-de-Calais (NPDC) ont ainsi reçu
une formation théorique et pratique au dépistage de la VB
par calcul du score de Nugent-Krohn-Hillier (NKH). La
qualité de la formation dispensée et la standardisation de
la lecture ont été évaluées par un contrôle de qualité (CQ).
Méthode : Chaque LBM propose aux femmes enceintes
consultant avant 13 semaines d’aménorrhée de réaliser un
auto-prélèvement vaginal (PV). L’examen microscopique
du PV après coloration de Gram permet d’établir le score de
NKH : un score compris entre 1 et 3 correspond à une flore
vaginale normale, entre 4 et 6 à une flore intermédiaire et
un score compris entre 7 et 10 à une vaginose bactérienne.
Un contrôle de qualité a été mis en place : 4 frottis par LBM
ont été sélectionnés en fonction du score NKH et relus en
double aveugle par 2 microbiologistes référents. Résultats :
91 % des LBM de la région NPDC participent à l’étude Premeva. 596 prélèvements vaginaux provenant de 185 LBM
ont été relus par les 2 référents. La corrélation de l’ensemble
des résultats entre les LBM et les référents est de 77 %.
Elle est de 80 % pour diagnostic de VB (score NKH ≥ 7)
et de 76 % pour une flore normale (score NKH ≤ 3). 2,8 %
des lames contrôlées par les référents ont été classées à
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
tort en VB par les LBM et à l’inverse 5,3 % des prélèvements n’ont pas été interprétés comme des flores de VB par
les LBM. Les difficultés rencontrées sont essentiellement
retrouvées pour les scores compris entre 4 et 6 (corrélation LBM- référent de 73,5 %). Elles sont essentiellement
liées à des problèmes de coloration de Gram ou à des critères d’acceptabilité du score. Conclusion : Après un temps
de formation indispensable à la lecture du score NKH, les
résultats du CQ montrent que le dépistage de la VB est aisé
pour l’ensemble des LBM. Les flores intermédiaires sont
plus délicates à interpréter. Grâce à l’étude Premeva, les
LBM ont intégré dans leur activité quotidienne le dépistage
de la vaginose bactérienne. Sur plus de 76 000 PV réalisés
entre avril 2006 et juin 2011, la prévalence de la vaginose
chez les femmes enceintes au 1er trimestre de la grossesse
est de 7,1 % dans la région Nord-Pas-de-Calais.
Étude de la séroprévalence des anticorps
anti-rougeole chez le personnel de Santé
dans la région Rhône-Alpes (2005 – 2011)
Tagajdid MR1 , Casalegno J-S2 , Billaud G2 , Frobert E2 ,
Lina B2 , Mekki Y2
1
Laboratoire de virologie, Hôpital militaire d’instruction
Mohamed V, Université Mohamed V – Souissi, Rabat,
Maroc ; 2 Laboratoire de virologie, Groupement hospitalier
Est, Hospices civils de Lyon, France
Depuis le début de l’année 2008, la France a connu une
recrudescence du nombre de cas de rougeole, notamment
due à une couverture vaccinale insuffisante. Une nouvelle
vague épidémique a été observée à partir du début de l’hiver
2010. La région Rhône-Alpes est l’une des régions ayant
connu le plus fort taux d’incidence. Le pic épidémique a été
observé en mars 2011, et le nombre d’infections a ensuite
progressivement diminué. S’agissant d’une maladie hautement contagieuse et à risque accru de complications chez
les adultes, elle constitue un danger particulier pour les soignants et leurs patients, notamment lors de la phase de
contagiosité pré-clinique. L’objectif de notre étude a été
d’explorer le statut immunitaire des professionnels de santé
de la région Rhône-Alpes. Il s’agit d’une enquête rétrospective réalisée entre septembre 2005 et mai 2011 et qui
a portée sur un échantillon de 1 380 personnes pour lesquelles les marqueurs sérologiques de la rougeole (IgG et
IgM) ont été recherchés par une technique Elisa. Les données épidémiologiques et biologiques ont été extraites de
la base de données du Laboratoire de Virologie Est (Lyon).
L’âge moyen de la population étudiée a été de 35,5 ans. Au
cours des six années de l’étude, 63 % des demandes ont été
prescrites au cours du premier semestre de l’année 2011.
La séroprévalence des IgG anti-rougeole a été de 97 %.
67
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
Elle était plus faible dans les tranches d’âge 19 – 30 ans et
51 – 60 ans. Le personnel de moins de 30 ans présente un
taux d’anticorps statistiquement plus bas que le personnel
de plus de 30 ans. Huit personnes ont eu des IgM positifs
entre le 01/01/2010 et le 08/07/2011. Les patients exposés à des contaminations par le personnel infecté par le
virus de la rougeole ont été contrôlés en sérologie IgG et
en PCR, ceux qui étaient non immuns ont été vaccinés et
les personnes à risque tels que les immunodéprimés et les
femmes enceintes ont reçu des gammaglobulines dans les
72 heures post exposition. La séroprévalence chez les professionnels de la santé concorde avec celle de la population
générale (70,5 %). La couverture vaccinale des soignants
de moins de 30 ans reste donc insuffisante pour assurer
une immunité de groupe satisfaisante. Une 2e dose est
préconisée pour tous les sujets n’ayant reçu qu’une seule
dose, et qui sont nés après 1980. En cas de facteur de
risque de complication, la 2e dose est également fortement
recommandée.
été isolées avec une prédominance de K. pneumoniae
(40,58 %) suivie d’E. coli (23,58 %). La majorité de ces
souches étaient des souches de colonisation (80,25 %).
Le reste des souches provenait d’urines, d’hémocultures
et de pus respectivement dans 8,77 %, 5,66 % et 5,3 % des
cas. Concernant les résistances associées aux antibiotiques,
48,63 % des souches étaient résistantes à la ciprofloxacine,
et 38,57 % à l’amikacine. Uniquement 3,29 % de résistance
acquise à la colistine a été retrouvée, essentiellement chez
des souches de K. pneumoniae. Toutes nos souches étaient
sensibles à l’imipénème. Conclusion : Ce travail montre
que la majorité des souches BLSE étaient des souches de
colonisation. K. pneumoniae est l’espèce prédominante. La
résistance associée aux aminosides et aux fluoroquinolones
est élevée.
Validation des méthodes en microbiologie
clinique
Louissi S, Pean Y
Épidémiologie des entérobacteries
sécrétrices de bêtalactamases à spectre
élargi au centre national
de greffe de moelle osseuse de Tunis
Glenza A, Baaboura R, Majouri D, Achour W, Ben Hassen A
Service des laboratoires, Centre national de greffe de moelle
osseuse, Tunis
Introduction : Les infections à entérobactéries productrices de bêta-lactamases à spectre élargi (BLSE)
constituent un problème majeur de santé publique. En
effet, ces souches associent souvent des résistances affectant d’autres familles d’antibiotiques posant très souvent
des problèmes thérapeutiques importants. Le but de notre
travail est de décrire le profil épidémiologique des entérobactéries productrices de BLSE chez les patients du Centre
national de greffe de moelle osseuse (CNGMO) de Tunis.
Matériel et méthodes : Notre étude rétrospective conduite
sur 12 ans (1998-2010) au laboratoire du Centre national
de greffe de moelle osseuse de Tunis (CNGMO) a inclus
toutes les entérobactéries productrices de BLSE isolées à
partir de prélèvements divers chez des malades hospitalisés
ou consultant au CNGMO. L’identification a été faite grâce
aux méthodes classiques et Api système 20E (Bio Mérieux).
L’antibiogramme a été réalisé par la méthode de diffusion
en milieu gélosé selon les recommandations du CA-SFM.
La recherche d’une BLSE a été effectuée par le test de
double synergie entre un disque d’amoxicilline + acide clavulanique et un disque de céphalosporine de 3e génération
ou d’aztreonam. Résultats : Durant la période d’étude,
547 souches d’entérobactéries productrices de BLSE ont
68
Laboratoire de microbiologie, Institut mutualiste Montsouris, Paris
Objectif : Les laboratoires de biologie médicale devront
être accrédités avant octobre 2016 pour continuer à exercer.
La qualité est ainsi devenue un enjeu économique allant
jusqu’à la pérennité du laboratoire de microbiologie. Le
SH-GTA 04 détaille les exigences relatives aux vérifications/validations de méthodes. La microbiologie clinique
étant un secteur qui s’automatise de plus en plus. Une
vérification de méthode pour des automates de cytologie
urinaire et d’identification bactérienne a été réalisée. Matériels et méthodes : Le Sysmex UF-500i BioMerieux® est
un automate de cytologie urinaire utilisant la technique
de cytométrie de flux. Les critères de vérification choisis
pour cette technique quantitative sont les suivants : fidélité,
justesse, contamination inter-échantillon, limite de quantification et comparaison avec la méthode de référence.
Seuls les analytes hématies, leucocytes et bactéries ont été
évalués. L’IVD Maldi de Bruker utilise la technique de
spectrométrie par Maldi-Tof pour identifier les bactéries.
Une comparaison de méthode a été faite sur 40 échantillons « tout venant ». Résultats : Sysmex UF-500i : Les
coefficients de variations (CV%) sont inférieurs aux limites
imposées par le fabricant pour des urines troubles et hémorragiques. Néanmoins lors de l’analyse d’urines limpides
non hématurique, le CV% est trop élevé pour le critère de
fidélité. Les écarts types sont réduits et les moyennes restent en dessous des valeurs seuils données par le fabricant.
IVD Maldi de Bruker : On obtient 100 % de concordance
sur les résultats. Conclusion : Les critères de performance
de la répétabilité posent des questions de conformité du
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
Sysmex UF-500i. En effet les valeurs seuils officielles ne
sont pas applicables compte tenu de la plus grande sensibilité de la technique et du volume d’urine utilisé. L’IVD
Maldi de Bruker est considéré conforme au vu des résultats
de vérification. Malgré les performances remarquables de
l’automate, l’impossibilité d’identifier le dernier contrôle
qualité de l’Afssaps rappelle l’importance de l’exhaustivité
de la base de données. La vérification de méthode en microbiologie clinique ne semble pas être facilement réalisable.
Les seuils décisionnels n’ont pas été réévalués pour les
nouvelles techniques et ne semblent pas applicables. Il
apparaît que la microbiologie clinique rencontrera des difficultés à s’intégrer dans le processus d’assurance qualité
ISO 15189.
Les infections à Streptococcus agalactiae :
épidémiologie et état de résistance
aux antibiotiques (2005-2010)
Ben Haj Khalifa A, Kheder M
Laboratoire de microbiologie, Hôpital Tahar Sfar, Mahdia,
Tunisie
Objectifs : Streptococcus agalactiae, un des principaux
agents microbiens responsables des infections fœtomaternelles graves chez le nouveau-né. Dans la dernière
décennie, une augmentation spectaculaire de la résistance
de ce micro-organisme à l’érythromycine et la clindamycine a été observée. Dans ce cadre, nous nous sommes
proposés d’étudier le profil épidémiologique des souches
de S. agalactiae ainsi que leur état de résistance aux antibiotiques. Matériel et méthodes : Cette étude a concerné
toutes les souches de S. agalactiae isolées à partir des différents prélèvements reçus au laboratoire de microbiologie
du CHU de Mahdia à visée diagnostique sur la période
janvier 2005-août 2010. L’isolement et l’identification des
souches ont été réalisés selon les techniques conventionnelles. La sensibilité aux antibiotiques a été déterminée
selon les normes du comité de l’antibiogramme de la
Société française de microbiologie (CA-SFM). Résultats :
L’étude a concerné 293 souches de S. agalactiae non répétitives. Parmi ces souches, 143 (48,8 %) provenaient de
prélèvements vaginaux, 100 (34,1 %) des urines, et 31
(10,6 %) de prélèvements périphériques et de liquide gastrique. Toutes les souches de S. agalactiae étaient sensibles
à la pénicilline G, amoxicilline, vancomycine, teicoplanine, rifampicine et pristinamycine. La résistance à haut
niveau aux aminosides était de 5,1 %, 2,7 %, 1,7 % respectivement pour la kanamycine, la streptomycine et la
gentamicine. La résistance aux macrolides était de 23,9 %,
20,8 % et de 18,8 % respectivement pour l’érythromycine,
la lincomycine et la spiramycine. Le taux de résistance à
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
la tétracycline était de 46,4 %, celle à l’association triméthoprime + sulfaméthoxazole était de 44,5 %. L’analyse de
la résistance des souches isolées en 2005-2010 a montré
que la résistance à l’érythromycine est passée de 19,6 %
en 2005 à 31,2 % en 2010 (p < 0,05). La résistance à la
tétracycline dans le même délai a passé de 33,4 à 59 % (p
< 0,01). De même pour la résistance à l’association triméthoprime + sulfaméthoxazole qui est passée de 37,2 % à
53,8 % (p < 0,03). Conclusion : Cette étude nous a permis de situer l’épidémiologie des infections à S. agalactiae
ainsi que l’état de résistance de ce germe aux principaux
antibiotiques surtout ceux recommandés en thérapeutique :
bêtalactamines et macrolides. En effet, le recueil minutieux
des données actualisées relatives à la résistance des S. agalactiae aux antibiotiques permettrait d’adapter les stratégies
thérapeutiques.
Les entérobactéries productrices
de bêtalactamases à spectre élargi
(EBLSE) chez l’enfant
Ben Haj Khalifa A1 , Ben Hammouda H2 , Brahim R1 , Sfar
MT2 , Kheder M1
Laboratoire de microbiologie, CHU Tahar Sfar Mahdia,
Tunisie ; Service de pédiatrie, CHU Tahar Sfar Mahdia,
Tunisie
Objectifs : La production des BLSE par les entérobactéries
(EBLSE) constitue l’un des mécanismes de résistance les
plus répondues chez les entérobactéries et dont l’incidence
n’a pas cessé d’augmenter. Un tel profil a été constaté
au niveau du service de pédiatrie de notre CHU. Nos
objectifs étaient de déterminer l’incidence et la prévalence
des entérobactéries productrices de BLSE, mettre en évidence les principaux facteurs de risque de leur acquisition,
déterminer leurs profils de résistances vis-à-vis des autres
antibiotiques et établir la corrélation entre la consommation des principaux antibiotiques utilisés et l’émergence
de ces EBLSE. Matériel et méthodes : Il s’agit d’une
étude rétrospective réalisée au niveau du service de pédiatrie à l’hôpital Tahar Sfar Mahdia sur une période de quatre
années (2006-2009). Cette étude a concerné 184 enfants.
Les données démographiques, séjours hospitaliers antérieurs, prélèvements BLSE positifs, antibiotiques utilisés,
ont été recueillis rétrospectivement à l’aide d’un questionnaire standardisé, créé pour l’occasion. Résultats : Au
cours de cette étude, l’incidence et la prévalence des EBLSE
ont présenté un pic en 2007 (incidence = 3,75 ‰, prévalence = 0,7 %), suivie d’une diminution pour atteindre les
valeurs les plus basses en 2009 (incidence = 0,8 ‰, prévalence = 0,31 %). En analyse univariée, les nouveau-nés
(p < 0,001), le terme (p < 0,001), le séjour en réanimation
69
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
(p = 0,002) et l’association KTVO et intubation (p < 0,001)
étaient les facteurs prédictifs d’acquisition d’EBLSE. En
analyse multivariée, le séjour en réanimation OR : 3,825 ;
IC 95% [1,296-11,286] (p = 0,015) des nouveau-nés OR :
2,870 ; IC 95% [1,206-6,831] (p = 0,017) était le seul facteur
prédictif d’acquisition d’EBLSE dans notre population. On
a rapporté également dans cette étude qu’il existe une corrélation positive entre la consommation des céphalosporines
(p = 0,006), des aminosides (p = 0,037) et des fluoroquinolones (p = 0,023) et l’émergence des EBLSE. Conclusion :
Devant cette situation, la maîtrise de l’usage des antibiotiques et le respect des règles d’hygiène constituent les
points les plus importants dans la lutte contre l’émergence
des EBLSE.
Pneumopathies communautaires sévères en
réanimation : analyse des facteurs prédictifs
de mortalité, à propos de 209 cas
Ben Haj Khalifa A1 , Ayed S2 , Kheder M1 , Fekih Hassan
M2 , Atrous S2
1 Laboratoire de microbiologie, CHU Tahar Sfar de Mahdia,
5100 (Tunisie) ; 2 Service de réanimation médicale, CHU
Tahar Sfar de Mahdia, 5100 (Tunisie)
Objectifs : Malgré les progrès de la médecine et une prise
en charge précoce, les pneumopathies communautaires
sévères sont encore fréquentes et graves. Le but de cette
étude était de déterminer le taux de mortalité et les facteurs
prédictifs de mortalité de ces pneumopathies. Matériel et
méthodes : Il s’agit d’une étude rétrospective réalisée entre
mars 2001 et décembre 2007 au service de réanimation
médicale au CHU de Mahdia. Tous les patients hospitalisés pour pneumopathies communautaires sévères étaient
inclus dans cette étude. Le diagnostic de sévérité est basé
sur la présence d’un critère majeur ou deux critères mineurs
selon les recommandations de l’American thoracic society.
Les paramètres recueillis étaient les caractéristiques démographiques, les comorbidités, dyspnée à l’état de base, le
score de gravité SAPSII, APACHE II et le score de Fine, la
présence d’un état de choc, le recours à la ventilation mécanique, le germe et sa sensibilité, l’antibiothérapie (nature
et durée), durée du séjour et le devenir. Résultats : 209
patients d’âge moyen de 64 ± 16 ans à prédominance masculine et avec un SAPSII de 38 ± 19 étaient inclus dans
cette étude. Le pneumocoque était le germe prédominant
(25 %). La mortalité était de 29 %. En analyse multivariée les facteurs prédictifs de mortalité étaient le recours à
la ventilation mécanique [OR : 22,855 ; IC 95% : 4,193124,567 ; p < 0,001] et la non prescription de lévofloxacine
[OR : 0,45 ; IC 95% : 0,221-0,927 ; p = 0,03]. Conclusion :
70
Les pneumopathies communautaires sévères sont une cause
fréquente de décès en réanimation. Le recours à la ventilation mécanique et la non prescription de fluoroquinolones
étaient les deux facteurs de prédiction de la mortalité.
Séroprévalence de l’infection par le virus
West-Nile dans la population humaine
dans la région de Kénitra au Maroc
El Rhaffouli H1 , El Harrak M2 , Lotfi C2 , El Boukhrissi F3 ,
Bajjou T1 , Laraqui A1 , Hilali F1 , Kenfaoui M4 , LahlouAmine I1
Laboratoire de recherche et de biosécurité P3, Hôpital Militaire d’Instruction Mohammed V, Université Mohammed
V ; Hay ryade, Rabat, Maroc ; 1 Laboratoire de Recherche et
de Biosécurité P-3, Hôpital Militaire d’Instruction Mohammed V, Université Mohammed V-Souissi, Rabat, Maroc ;
2 Laboratoire de production biologique et pharmaceutique
vétérinaire, Rabat, Maroc ; 3 Laboratoire de biochimie et
de toxicologie, Hôpital militaire Moulay Ismail, Meknès,
Maroc ; 4 Laboratoire d’analyse médicale Maamora, Kenitra, Maroc
Objectifs : Déterminer la séroprévalence de l’infection par
le virus West Nile (WNV) dans la population humaine dans
la région de Kénitra, située au Nord-Ouest du Maroc et
connue pour être une zone d’épizootie à WNV. Matériels
et méthodes : Cent sérums ont été recueillis de façon anonyme dans un laboratoire d’analyse médicale de la ville de
Kénitra. Les sérums ont été testés par séroneutralisation sur
microplaque vis-à-vis de la souche marocaine « Morocco
1996-EQ 96-11 » sur cellules Vero (cellules rénales de singe
vert africain). Des dilutions sériques de facteur 3 (1:6 à
1:1458) ont été réalisées afin de déterminer le titre exact
en anticorps neutralisants selon la méthode de SpearmanKärber. Tout résultat supérieur ou égal à 1:18 est considéré
comme positif. Résultats : La moyenne d’âge des patients
prélevés est de 47 ± 17 ans et le sexe ratio homme/femme
est de 0,27. La séroprévalence globale obtenue est de 23 %.
Celle-ci est significativement plus élevée chez les femmes
que chez les hommes avec 27 % et 11 % respectivement.
Les titres en anticorps séroneuralisants variaient de 1:31
à 1:2630 avec un titre médian de 1:95. La séroprévalence
chez les sujets âgés de plus de 30 ans (24 %) était significativement plus élevée que celle des patients de moins
de 30 ans (13 %). Discussion : La région de Kénitra a
connu 3 épizooties de WNV au cours des années 1996, 2003
et 2010 avec un seul cas d’infection humaine rapporté en
1996. C’est l’une des zones les plus humides du royaume
qui présente un écosystème favorable à la circulation du
virus. Cette première enquête nous a permis d’obtenir une
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
séroprévalence supérieure à celle rapportée en Tunisie
(13,7 %), mais qui reste inférieure à celle d’autres pays
endémiques tels que l’Egypte (35 %). Le taux d’infection
augmente avec l’âge des patients en raison du contact
répété avec le WNV. La séroprévalence élevée chez les
femmes pourrait être due à une surexposition aux moustiques dans leurs foyers en raison de la proximité des
poulaillers. Conclusion : Cette étude préliminaire est la
première preuve de la circulation du WNV au sein de la
population humaine au Maroc. Des études complémentaires sont en cours afin d’améliorer les connaissances
épidémiologiques de cette arbovirose émergente dans notre
pays.
Profil bactériologique des urétrites
masculines à Marrakech
Arsalane L, Berraha M, Zouhair S
Laboratoire de microbiologie, Hôpital militaire Avicenne,
Marrakech, Maroc
Objectifs : Déterminer les agents étiologiques de l’urétrite
masculine, souligner leur fréquence et établir le profil
actuel de résistance aux antibiotiques des souches bactériennes isolées, tels sont les objectifs fixés dans cette
étude. Matériel et méthodes : Notre étude rétrospective d’une durée de deux ans (du 01/06/09 au 30/06/11)
a porté sur 187 patients consultant à titre externe ou
adressés au laboratoire de microbiologie par différents services de l’hôpital pour suspicion d’urétrite. L’identification
présomptive des souches bactériennes a été effectuée
par l’étude des caractères morphologiques et culturaux.
L’identification biochimique et l’antibiogramme ont été
réalisés par l’automate Microscan de Siemens. Les critères de lecture et d’interprétation sont ceux du CASFM.
Résultats : Parmi les 187 prélèvements urétraux analysés, 115 prélèvements se sont révélés positifs sur le plan
bactériologique (61,4 %) : 54 cas d’urétrites à Neisseria gonorrhoeae (46,9 %), 19 cas d’urétrites à Chlamydia
trachomatis (16,5 %), 15 cas d’urétrites à Ureaplasma urealyticum (13 %) et 11 cas de Mycoplasma hominis (9,5 %) ;
16 prélèvements urétraux n’ont pas révélé la présence d’un
germe sexuellement transmissible (13,9 %). Les souches
de N. gonorrhoeae isolées sont toutes sensibles à la ceftriaxone et à la ciprofloxacine. Discussion/Conclusion :
Les infections sexuellement transmissibles constituent un
sérieux problème de santé publique au Maroc. Une prise
en charge optimale préventive et curative s’impose pour
faire face aux conséquences fonctionnelles ou vitales de ces
infections.
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Apport de nouveaux génotypes de
Mycobacterium par le flux migratoire
Nateche F1,2 , Djenane Z2 , Baraka S1 , Mechouet F1 , LopezCalleja A3 , Gavin Benavent P3 , Lafoz C3 , Cebollada A3 ,
Martin C3 , Samper S3 et Khaled S1
1
Laboratoire central, EHS/ EL HADI FLICI. Alger, Algérie ; 2 Laboratoire de biologie moléculaire et cellulaire,
FSB, USTHB, Alger ; 3 Laboratoire de mycobactériologie,
faculté de médecine, Saragosse, Espagne
Objectif : Mise en évidence de nouveaux génotypes de
souches de Mycobacterium tuberculosis isolées dans un
hôpital spécialisé en infectiologie à Alger. Sujets : 162
isolats cliniques sont étudiés. Matériel et méthodes :
Le typage moléculaire des souches a été abordé par la
technique de spoligotypage pour 162 souches et par RFLPIS6110 pour 97 souches. Résultats : La biodiversité des
souches du complexe de M. tuberculosis montre 3 familles
phylogénétiques majeures : la famille H (Haarlem), la
famille T et la famille LAM (pour Amérique latine et
Méditerranée). Cependant, on a pu mettre en évidence
de nouveaux génotypes : Pour la première fois du profil ST 61 ou LAM 10-CAM pour 4 souches isolées de
4 patients originaires de pays sub-sahariens, dont 3 sont
VIH positif. Ce profil est fréquent surtout au Cameroun
et les pays de l’Afrique de l’Ouest. Le profil ST1 ou
souche « Beijing » concernant une seule souche, isolée d’un patient algérien VIH positif. Cette souche est
résistante uniquement à l’isoniazide avec double mutation
(arg463leu et ser315thr) sur le gène kat G. Sur le spolDB4,
1 souche est déclarée par l’institut Pasteur d’Alger. Discussion/Conclusion : A Alger, la tuberculose est due à
la réactivation ou à la transmission de souches historiquement présentes. Néanmoins, la mise en évidence de
nouveaux génotypes met en garde les structures sanitaires pour une meilleure surveillance de l’épidémiologie
moléculaire des souches qui circulent en Algérie. Ces
dernières années, en Algérie, nous assistons à un flux migratoire important principalement de pays sub-sahariens et
asiatiques.
Marqueurs de l’hépatite B chez les patients
atteints de l’hépatite C au Maroc
Ousti F, EL Annaz H, Doblali T, Belefquih B, Tagajdid R,
Touil N, Mrani S
Laboratoire de virologie, Hôpital militaire d’instruction
Mohammed V, Rabat, Maroc ; Faculté de médecine et de
pharmacie de Rabat, Université Mohamed V Souissi, Maroc
71
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
Les infections au VHB (virus de l’hépatite B) et VHC (virus
de l’hépatite C) sont responsables de la majorité des hépatites chroniques. La co-infection VHB/VHC est associée
à une progression rapide de l’hépatopathie et un risque
élevé d’évolution vers la cirrhose et l’hépatocarcinome du
foie. Le but de ce travail est de rapporter la prévalence des
marqueurs sérologiques et moléculaires de l’infection au
VHB chez des patients atteints d’hépatite chronique à VHC.
Les marqueurs sérologiques du VHB (AgHBs, AcHBc,
AcHBs et Ag/AcHBe) et la recherche de l’ADN (acide
désoxyribonucléique) du VHB ont été réalisés chez 105
patients suivis pour une hépatite C chronique à l’hôpital
militaire d’instruction Mohammed V à Rabat. La recherche
de l’AgHBs était positive chez 33 % des patients, l’Ac
HBc isolé a été retrouvé chez 40 % des patients, alors que
l’Ac HBc associé à l’Ac HBs a été retrouvé chez 44 % des
patients. Sur les patients étudiés, seulement 16 % avaient
des Ac HBs isolés. Les valeurs du taux de réplication du
VHB (charge virale) étaient plus faibles chez les patients
co-infectés VHB/VHC que chez les patients infectés par le
VHC seul, suggérant l’effet suppressif du VHC sur VHB,
alors que les valeurs du taux de réplication du VHC étaient
élevées aussi bien chez les patients co-infectés que chez les
patients infectés par le VHC seul, indiquant que la présence
du VHB n’influence pas la réplication du VHC. Le génotype
1b était le plus fréquent (85 %) chez les patients co-infectés.
La prévalence élevée de la co-infection VHB/VHC et le taux
faible de couverture vaccinale contre le VHB soulignent
l’intérêt majeur de la vaccination anti-VHB pour prévenir
ces co-infections.
Efficacy of novel liquid medium swab device
for faecal pathogens
Stuczen M1 , Edwards-Jones V1 , Bowling F2
1
Manchester Metropolitan University, Manchester, United
Kingdom ; 2 University of Manchester, Manchester, United
Kingdom
Background: In this study, we assessed the recovery of
Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Clostridium difficile and Campylobacter jejuni using Medical Wire’s new
liquid Sigma Cary Blair system, designed for testing of
faecal specimens by automated streaking systems. The
medium is inorganic and intended to limit overgrowth of
commensals in faecal specimens, while allowing good recoveries of enteric pathogens. Method: The test swabs were
inoculated one of several typical enteric pathogens Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Clostridium difficile
and Campylobacter jejuni. Recovery studies were performed using the quantitative swab elution method specified in
CLSI standard M40-A, adapted for enteric bacteria. Testing
72
was performed in triplicate at either controlled room temperature (RT), or refrigerator temperature (4◦ C). For each
organism viable counts were performed at zero (0) time,
24 h and 48 h. Results: All isolates were recovered for up
to 48h of incubation at RT and 4 ◦ C and met acceptance
criteria according to M40-A procedure. For specimens of
Salmonella typhimurium held at room temperature there
was only 0.4log decrease in the number of viable cells
after 48h of incubation. Respectively, there was only 1log
decrease in count of Shigella flexnerii after 48h across all
tested batches. Similar results were seen for the other test
organisms. For specimens held at refrigerated temperatures
the number of viable organisms remained stable for 48h
across all batches. Conclusion: There are few recent studies
evaluating the recovery of enteric pathogens from delayed
transport of fecal specimens in Cary-Blair gel medium. The
data suggest, however, that most Salmonella spp, Shigella
spp, Vibrio spp, Yersinia spp and Campylobacter spp are
recovered from Cary-Blair held at room temperature for 24
hours, but this may vary with the media produced by different manufacturers. This study confirms that Sigma Cary
Blair liquid medium system is an acceptable swab transport
system for transport of faecal pathogens, and will facilitate
the testing of faecal specimens on automated processing
platforms. This system consistently met CLSI acceptance
criteria when tested under refrigerated and room temperature storage conditions after 48 h.
Profil bactériologique des infections
cutanées en infectiologie à Alger
Mechouet F1 , Mohammedi D1 , Ouar MN1 , Kerrad N1 ,
Hamchaoui F2 , Khaled S1
1
Laboratoire de microbiologie, EHS El Hadi Flici 16000,
Alger, Algérie ; 2 Service d’épidémiologie, CHU BEO,
Alger
Objectifs : Déterminer les étiologies et le profil de
résistance aux antibiotiques des bactéries isolées de cas
d’infections cutanées superficielles et des parties molles
(ICPM) émanant des patients consultants et hospitalisés dans un hôpital d’infectiologie à Alger. Matériels et
méthodes : Il s’agit d’une étude rétrospective réalisée sur
une série collectée du 01/01/2006 au 31/12/2009 dans le
laboratoire de microbiologie. Après isolements sur milieux
standards, les isolats ont bénéficié de tests d’identification
biochimique et de tests de sensibilité aux antibiotiques. La
collecte et l’analyse des données ont été réalisées sur les
logiciels whonet 5.4 et epi-info V 06.4. L’étude statistique
a utilisé le calcul de moyenne et test de khi deux carré et
comparaison de pourcentages. Résultats : Sur une période
de 4 ans, nous avons enregistré 327 cas d’ICPM, dominées
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
par les abcès (30,58 %) totalisant 487 souches bactériennes
isolées de prélèvements de pus cutanés. L’âge moyen des
patients est de 31,64 ans (0-85 ans) et une prédominance
masculine (sex ratio = 1,28). Staphylococcus aureus était
l’agent étiologique majeur responsable des ICPM (58,93 %)
suivi par les entérobactéries (19,09 %), Streptococcus spp
(11,29 %) et Pseudomonas aeruginosa dans (10,67 %) des
cas. 51,56 % des souches de S. aureus sont résistantes à
l’oxacilline (SARM+) (la différence entre les fréquences
de SARM+ chez les patients consultants et hospitalisés
n’est pas statistiquement significative (DNS)). Ces souches
présentent une résistance croisée à d’autres antibiotiques :
acide fusidique (40,54 %) et macrolides (33,78 %). Les
pourcentages de résistance des entérobactéries et P. aeruginosa vis-à-vis des céphalosporines de 3e génération sont
respectivement de 9,67 %, 17,30 % (DNS). En ce qui
concerne l’ensemble des Streptococcus spp Le taux de résistance aux macrolides est de 12,72 %. Conclusion : Les
abcès représentent l’infection la plus fréquente dans notre
série, le profil bactériologique est dominé par S. aureus.
Plusieurs de nos souches étaient résistantes aux bêta lactamines tant en milieu hospitalier qu’en communautaire, ce
qui implique une utilisation plus rationnelle d’antibiotiques.
consentement écrit est préalablement obtenu. Le protocole
est approuvé par le comité d’éthique du CHU de Tlemcen.
Matériel et méthodes : Les lymphocytes T et B sont isolés à
partir du sang d’enfants témoins et obèses par centrifugation
différentielle dans un gradient de Ficoll-Paque. Les cellules
sont mises en culture en présence d’agents mitogènes (la
concanavaline A, ConA pour les lymphocytes T et la lipopolysaccharide, LPS pour les lymphocytes B). La détermination de la prolifération lymphocytaire se fait par le comptage
des cellules au bleu de trypan et par la méthode du MTT [3(4,5-diméthyl thiazol-2-yl)-2,5-diphényl tétrazolium bromide]. Après les différentes incubations, le dosage des interleukines (IL-2 et IL-6) se fait par méthode Elisa. Résultats :
Nos résultats montrent que la prolifération des lymphocytes
T et B à l’état basal ou stimulée par l’agent mitogène (ConA
ou LPS) est plus faible suite à la diminution des IL-2 et IL6 chez les enfants obèses comparés aux enfants témoins.
Conclusion : L’obésité perturbe la fonction lymphocytaire
et la sécrétion des cytokines chez les enfants.
Diagnostic d’une IgG monoclonale à partir
du rapport IgGK/IgG␭
Kolopp Sarda MN, Dupieux C, Lombard C, Chapuis
Cellier C
IMMUNOLOGIE
La lymphoprolifération et la sécrétion
des interleukines des enfants obèses
Bouanane S1 , Merzouk H1 , Baba Ahmed FZ1 , Saker M1 ,
Mokhtari N1 , Benkalfat BN1 , Baba Ahmed S2 , Narce M3
1
Laboratoire de physiologie, physiopathologie et biochimie de la nutrition, Département de biologie, Faculté des
sciences, Université de Tlemcen, Algérie ; 2 Service de
pédiatrie, CHU de Tlemcen, Algérie ; 3 Inserm UMR
866, ‘Lipids Nutrition Cancer’, Université de Bourgogne,
Faculté des sciences, 6 Boulevard Gabriel, 21000 Dijon,
France
Objectifs : L’obésité est fréquemment associée à des altérations du système immunitaire. Le taux des maladies
infectieuses est élevé chez les obèses. Notre objectif est
d’approfondir nos connaissances sur les altérations du système immunitaire associées à l’obésité infantile suite à
l’étude de la prolifération in vitro des lymphocytes et la
sécrétion des interleukines. Sujets : Les échantillons de
sang proviennent d’enfants témoins (n = 26) et d’enfants
obèses (n = 26) de la région de Tlemcen (Algérie). Les prélèvements sont réalisés au niveau du pli du coude dans des
tubes avec un anticoagulant (héparine). Le but de l’étude est
expliqué aux parents des enfants témoins et obèses, et leur
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Laboratoire d’immunologie, Centre de biologie sud, Centre
hospitalier Lyon Sud, Pierre-Bénite
Objectifs : Les réactifs IgG-Hevylite® (The Binding Site)
permettent de calculer un rapport IgGK/IgG␭ dont la valeur
serait susceptible de refléter l’absence ou la présence d’une
gammapathie monoclonale (GM) IgG. En outre la concentration IgGK ou IgG␭ permettrait une estimation plus juste
de la concentration de la GM. Nous avons vérifié la capacité
de ce rapport à diagnostiquer la présence d’une GM IgG et à
en estimer la concentration. Sujets : Les 95 sérums étudiés
étaient issus de 85 patients dont 60 avec un myélome, 12
avec une GM de signification indéterminée et 13 avec des
pathologies variées. Matériel et méthodes : Les électrophorèses (EP), les estimations de pics et les immunotypages
ont été réalisés sur Capillarys II® (Sebia). En cas d’absence
de pic la recherche d’une GM IgG a été effectuée par
immunofixation (IFE) sur SAS III® (Helena). Un dosage
des immunoglobulines a été réalisé sur BN Prospec® (Siemens). Les IgGK et IgG␭ ont été dosées sur SPA+® avec le
coffret IgG-Hevylite® . Selon la position de H/L par rapport
à l’intervalle de normalité défini par le fabricant (0,98-2,75)
nous en avons déduit la présence ou l’absence d’une GM
IgG et comparé cette déduction aux résultats obtenus par
EP couplée à IFE. À l’aide du logiciel Statview, nous avons
étudié les corrélations entre la somme [IgGK] + [IgG␭] et la
concentration en [IgG] puis entre la concentration du pic et
73
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
la concentration [IgGK] ou [IgG␭] selon les cas. Résultats :
Pour 16 échantillons sans pic mais à IFE positive, H/L a été
négatif 16 fois. Pour 37 échantillons avec un pic mesurable
mais de concentration inférieure à 5 g/L, H/L a été positif 10 fois. Pour 38 échantillons avec pic ≥ 5 g/L il y a eu
100 % de concordance avec H/L. L’étude des différentes
corrélations a permis d’établir les coefficients de corrélation suivants : R = 0,958 pour [IgG] vs [IgGK] + [IgG␭] ;
R = 0,964 pour 47 pics IgGK vs [IgGK] ; R = 0,939 pour
24 pics IgG␭ vs [IgG␭]. Discussion/Conclusion : Pour
des pics de 2 à 5 g/L H/L a une sensibilité de 80 % et de
100 % pour un pic IgG ≥ 5 g/L. Ce rapport permet donc de
dépister et suivre une GM IgG myélomateuse et de suivre
l’évolution d’une GMSI dont la concentration initiale du
pic serait ≥ 2 g/L. La concentration de pics IgG␬ et IgG␭
peut être estimée à partir de la mesure des concentrations
respectives [IgG␬] ou [IgG␭]. La normalisation de H/L au
cours du suivi d’une GM IgG myélomateuse nécessite néanmoins le recours à une EP suivie d’une IFE afin d’objectiver
le niveau de rémission.
Diagnostic des gammapathies à IgA :
intérêt du test Hevylite
Lombard C, Legrand A, Kolopp Sarda MN, Chapuis
Cellier C
Laboratoire d’immunologie, Centre de biologie sud, Centre
hospitalier Lyon Sud, Pierre-Bénite
Objectifs : La récente commercialisation des réactifs IgAHevylite® permet de calculer un rapport IgAK/IgA␭ dont
la valeur serait susceptible de refléter l’absence ou la présence d’une gammapathie monoclonale (GM) à IgA. De
plus la concentration IgAK ou IgA␭ permettrait une estimation plus juste de la concentration de la GM. Nous avons
vérifié la capacité de ce rapport à diagnostiquer la présence
d’une GM à IgA et à en estimer la concentration. Sujets :
Les 167 sérums étudiés étaient issus de 124 patients, 60
avec une GM IgA de signification indéterminée, 53 un
myélome à IgA, et 11 des pathologies variées. Matériel
et méthodes : Les électrophorèses (EP), les estimations de
pics et les immunotypages ont été réalisés sur Capillarys®
(Sebia). En cas d’absence de pic la recherche d’une GM
IgA a été effectuée par immunofixation (IFE) sur SAS III®
(Helena). Un dosage des immunoglobulines a été réalisé sur
BN Prospec® (Siemens). Les IgAK et IgA␭ ont été dosées
sur SPA+® avec le coffret IgA-Hevylite® de The Binding
Site. Selon la position de H/L par rapport à l’intervalle de
normalité défini par le fabricant (0,78 – 1,94 g/L), nous
en avons déduit la présence ou l’absence d’une GM IgA
et comparé cette déduction aux résultats obtenus par EP
couplée à IFE. À l’aide du logiciel Statview, nous avons
74
étudié les corrélations entre la somme [IgAK] + [IgA␭] et
la concentration en [IgA] puis entre la concentration du pic
et la concentration [IgAK] ou [IgA␭] selon les cas. Résultats : Pour 37 échantillons sans pic mais à IFE positive,
H/L a été positif dans 7 cas. Pour 8 échantillons à IFE
positive et pic ≤ 2 g/L, H/L a été positif dans 3 cas. Enfin
pour 112 échantillons avec pics ≥ 2 g/L il y a eu 100 % de
concordance avec H/L. L’étude des différentes corrélations
a permis d’établir les coefficients de corrélation suivants :
R = 0,961 pour [IgA] vs [IgAK] + [IgA␭] ; R = 0,971 pour
67 pics IgAK vs [IgAK] ; R = 0,923 pour 51 pics IgA␭
vs [IgA␭]. Discussion/Conclusion : En présence d’un pic
IgA ≥ 2 g/L, H/L a une sensibilité de 100 % ce qui lui permet donc de dépister et suivre une GM IgA myélomateuse
et de suivre l’évolution d’une GMSI dont la concentration
initiale du pic serait ≥ 2 g/L. La concentration de pics IgA␬
et IgA␭ peut être estimée à partir de la mesure des concentrations respectives [IgA␬] ou [IgA␭]. La normalisation de
H/L au cours du suivi d’un GM IgA myélomateuse nécessite néanmoins le recours à une EP suivie d’une IFE afin
d’objectiver le niveau de rémission.
Groupage sanguin : discordances
entre l’épreuve globulaire et plasmatique
Bhallil O, Atouf O, Benseffa N, Brick C, Ouadghiri S,
Bouayad A, Drissi A, Essakalli M
Service de transfusion sanguine et d’hémovigilance, Chu
Ibn Sina, Rabat - Maroc ; UFR d’immunologie, Faculté de
médecine et de pharmacie de Rabat, Université Mohammed
V Souissi, Rabat-Maroc
Objectif : Le risque immunohémolytique des transfusions
sanguines est directement lie au caractère immunogène
des antigènes érythrocytaires en particulier dans le système ABO. La validation d’un groupe sanguin est basée
sur la concordance obligatoire des épreuves globulaire et
plasmatique. Le but de notre travail est de rapporter les
discordances entre les épreuves globulaire et plasmatique
rencontrées au laboratoire d’immuno-hématologie du service de transfusion sanguine et la démarche suivie pour
valider le groupage sanguin. Matériels et méthodes : Il
s’agit d’une étude rétrospective portant sur 13 cas de discordance entre l’épreuve globulaire et l’épreuve plasmatique.
Le groupage sanguin a été pratiqué sur plaque d’opaline,
microplaque ou sur carte gel. Devant ces discordances,
des témoins d’agglutination allo, auto ont été pratiqués.
Des tests complémentaires (lavage des globules rouges,
chauffage de sérum, un 2e groupage) ainsi qu’une enquête
étiologique ont été nécessaires pour la validation du groupage. Résultats : Nos résultats montrent que la discordance
de groupage est en rapport avec un excès de réaction à
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
l’épreuve plasmatique et globulaire dans respectivement
46 % et 23 % des cas. Un défaut d’agglutination à l’épreuve
plasmatique a été observé dans 31 % des cas. La pratique
des témoins s’est révélée positive dans 46 % des cas. Dans
ces cas le lavage des globules rouges et/ou le chauffage du
sérum a permis de lever cette discordance. Dans 8 % des cas,
le défaut d’agglutination observé à l’épreuve plasmatique,
a pu être expliqué par le diagnostic du patient. Conclusion :
La réalisation technique du groupage sanguin repose sur des
principes simples. L’interprétation des résultats peut toutefois présenter quelques difficultés. Notre travail montre
d’une part l’apport des témoins d’agglutination et d’autre
part l’intérêt de l’enquête étiologique dans la démarche
adoptée pour la validation du groupage sanguin.
MICA-related phenotype and NPC risk. An
inverse relationship between soluble MICA
and anti-MICA antibodies in affected patients
Ben Chaaben A1,2 , Boukaouci W2 , Douik H1 , Ghanem A1 ,
Kablouti G1 , Mamoghli T1 , Chaouch L1 , Harzallah L1 ,
Bouassida J1 , Chammakhi N1 , Ben Guezella D1 , Chelbi
S1 , Fortier C2 , Krishnamoorthy R3 , Charron D2 , Guemira
F1 , Tamouza R2
1
Clinical Biology Department, Salah Azaiz Institut, Tunis,
Tunisia ; 2 Immunology and histocompatibility department,
CIH-HOG, AP-HP/GHU-Nord, IUH and INSERM, U940,
Saint-Louis Hospital, Paris, France ; 3 Inserm U763, Robert
Debré Hospital, Paris, France
Aim: Recently, we observed that MICA-129 Met/Val polymorphism and soluble MICA (sMICA) serum level were
both associated with the risk to develop nasopharyngeal
carcinoma (NPC) in Tunisia. Because MICA molecules
may act as an alloantigen capable of eliciting alloantibody response, here, we evaluated the presence of MICA
antibody (Abs MICA) in NPC patients and controls and
their potential relationship with sMICA serum level and
the disease. Backround: A soluble form of the major histocompatibility complex class I-related chain A (sMICA),
released from tumor cell-surface, inhibits CD8+ T lymphocyte cytotoxicity through down-regulation of the NKG2D
activatory receptor with consequent tumor escape. Conversely, MICA antibody (MICA Abs) not only promotes
dendritic cell-mediated cross- presentation of tumor cells
resulting in tumor cells lysis through complement fixation but also by neutralizing sMICA isoforms, favor NKand T cell- related cytotoxicity. Materials and methods:
157 NPC patients and 43 healthy individuals, all originating from Tunisia were included in the present study.
As previously described, Serum levels of sMICA were
determined using commercially available MICA ELISA
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
kits (Immatics, Tubingen, Germany) according to the
manufacturer’s instructions. MICA antibody assay was
performed using LABScreen® assay following manufacturer’s recommendations (One Lambda, Canoga park, CA,
USA). The fluorescent signal was measured using LABScan 100TM Flow Cytometry (Luminex Corporation, Texas,
USA) and analyzed by HLA-Visual 1.1TM software (One
Lambda, Canoga park, CA, USA). A cut-off fluorescent
signal value of 3 (consistent with the manufacturer’s recommended value) was chosen as a threshold of positivity. Sera
with borderline value, ranging from 2.0 to 3.0, were retested. Therefore, both values, 2 and 3, were used for statistical
analysis. The difference between sMICA and MICA Abs
was evaluated by standard chi-square test or Fisher exact
test. The difference was considered statistically significant
at values less than 0.05 (p < 0.05). Results: We found that
among the whole cohort (157), 66 patients (42%) produced high serum levels of sMICA (<80 pg/mL) while only
12 (8%) were found positive for MICA Abs (>3). Further Analysis accounting both high sMICA levels (> 80
pg/mL) and positive MICA Abs (>3), showed that among
the 12 patients positive for MICA Abs, 6 of them have
also high levels of sMICA, (3% vs 42%, p< 4.4 10 -17 ).
Interestingly, the patients with positive MICA Abs presented all a non-advanced stage of the tumor extension
at presentation. Discussion/Conclusion: The inverse relationship observed here may reflect a neutralizing effect of
MICA Abs on sMICA isoforms with consequent NK-cell
anti tumor defense. Altogether, these data, if confirmed in
a larger patient cohort including clinical and biological follow up, may pave the way to novel immuno-therapeutic
interventions involving MICA Abs in NPC treatment.
Fréquence des anticorps anti-TPO et anti-Tg
dans le vitiligo
Bouayad A, Benseffaj N, Brick C, Atouf O, Ouadghiri S,
Boughanbour A, Essakalli M
Unite d’immunologie, Service de transfusion sanguine et
d’hémovigilance, Hôpital Ibn Sina de Rabat, Maroc ; UFR
d’immunologie, Faculté de médecine et de pharmacie, Université Mohammed V, Rabat
Introduction : Le vitiligo est un trouble acquis de la dépigmentation due à la destruction des mélanocytes. Bien que
de nombreuses théories ont été proposées pour sa pathogénie, le mécanisme auto-immun est le plus communément
démontré dans la littérature. L’association de vitiligo avec
des maladies thyroïdiennes auto-immunes et la prévalence
accrue d’auto-anticorps notamment les antithyroïdiens dans
le vitiligo sont en faveur de ce rôle. Le but de ce travail a été d’étudier la fréquence des anticorps anti-thyroïde
75
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
peroxydase (anti-TPO) et anti-thyroglobuline (anti-Tg)
chez les patients atteints de vitiligo dans la population marocaine. Matériels et méthodes : Cette étude a porté sur
79 patients marocains atteints de vitiligo et qui sont suivis dans le service de dermatologie du CHU Ibn-Sina de
Rabat. L’échantillon comprenait 47 femmes et 31 hommes
dont l’âge variait entre six et 87 ans. La recherche des
anti-TPO et des anti-Tg a été faite par la technologie multiplexe Luminex® . Résultats : Nous avons observé, chez les
patients atteints de vitiligo, une fréquence de 23 % de l’antiTPO, 15 % de l’anti-Tg et 11 % des anti-TPO et anti-Tg.
Les femmes sont plus touchées que les hommes avec une
fréquence de 67 %. Conclusion : Cette étude montre une
association significative entre les anti-TPO et anti-Tg et le
vitiligo. La recherche des auto-anticorps antithyroïdiens est
pertinente chez les patients atteints de vitiligo pour détecter
les maladies thyroïdiennes auto-immunes.
PARASITOLOGIE
Onychomycoses diagnostiquées
au laboratoire central
du CHU Hussein Dey en 2008 – 2010
Bouamama M, Mekhalfia A, Guechi Z
Laboratoire central de biologie, CHU Hussein Dey, Alger,
Algérie
Objectif : Les onychomycoses sont définies comme toute
atteinte des ongles par un champignon. Elles englobent des
atteintes dues aux dermatophytes, aux levures et aux moisissures. À travers cette étude rétrospective, nous avons
voulu souligner l’importance des onychomycoses dans
notre pratique quotidienne et identifier les espèces incriminées. Matériel et méthodes : Nous avons réalisé 379
prélèvements de lésions unguéales sur une période de trois
années (janvier 2008 à décembre 2010). La majorité de nos
malades sont des externes, adressés par des médecins dermatologues. Ainsi 209 au niveau des ongles des pieds et 170
prélèvements au niveau des ongles des mains ont été récoltés. Pour chaque prélèvement nous avons réalisé un examen
direct et une mise en culture systématique sur milieux usuels
de mycologie (Sabouraud Chloramphénicol et Sabouraud
Chloramphénicol Actidione). Résultats : Au total 285 prélèvements se sont révélés positifs à l’examen direct et/ou
à la culture, soit une fréquence de 75 %. Nous avons isolé
229 souches de champignons. Elles se répartissent en 152
souches de levures soit une fréquence de 66,4 %, 69 souches
de dermatophytes soit 30 % et 8 souches de moisissures
soit 3,6 %. Parmi les levures Candida albicans est l’espèce
la plus isolée (86 fois), pour les dermatophytes le Trichophyton rubrum est la seule espèce incriminée. En ce qui
76
concerne la localisation, pour les levures 82 % sont retrouvées au niveau des mains et 18 % au niveau des pieds. Les
dermatophytes ont été isolés à 86 % au niveau des pieds
et à 14 % au niveau des mains. Conclusion : Les onyxis
candidosiques sont les plus fréquents ; ils se localisent surtout au niveau des ongles des mains et Candida albicans
demeure l’espèce la plus isolée. Les onyxis dermatophytiques touchent surtout les ongles des pieds ; Trichophyton
rubrum prédomine.
Diagnostic de Fasciola Hepatica chez Galba
truncatula par PCR multiplex
Righi S1 , Benakhla A1 , Mekroud A2 , Ouchene N1 ,
Sedraoui S1
Institut des sciences vétérinaires, Centre universitaire d’El
Tarf, B.P 73000 El Tarf, Algérie ; Institut des sciences
vétérinaires, Université de Constantine, Algérie
La fasciolose à Fasciola hepatica est une importante parasitose qui sévit largement en Algérie ainsi, la wilaya d’El Tarf
est considérée comme une région endémique lourdement
touchée par cette affection. La détection de l’infestation
naturelle par Fasciola hepatica de l’hôte intermédiaire
représenté en Algérie par Galba truncatula est traditionnellement basée sur les méthodes microscopiques. Nous
développons dans ce travail l’utilisation pour la première
fois de la PCR multiplexe pour le diagnostic de l’infestation
naturelle des mollusques prélevés dans la région d’El Tarf.
Deux primers ont été utilisés pour amplifier à la fois le
fragment d’ADN de 124 pb (paire de bases) spécifique
de Fasciola sp et la séquence ITS2 de mollusque (± 500
pb). Une mise en lots a été réalisée dans l’analyse des
mollusques (75 lots). L’étude a concerné 722 mollusques
récoltés dans des habitats typiques (fossés de route, mares,
cours d’eau et flaques) au niveau de cinq localités dans
la wilaya d’EL Tarf et sur les 722 mollusques, la bande
du contrôle interne n’a pas pu être amplifiée pour 24 mollusques, ils ont donc été exclus pour le calcul des différentes
prévalences. La prévalence de l’infestation a été estimée à
10,74 % (75/698). Les limnées de grandes tailles ont été les
plus infestées.
Évaluation du kit de détection
des anticorps antitoxoplasmiques
par immunochromatographie
Sayagh S, Bouchrik M, Naoui H, Ikken M, Boumhil L,
Kahouli S, Lmimouni B
Service de parasitologie et mycologie médicale, Hôpital
militaire d’instruction Mohammed V, BP 1018, Hay Riad,
Rabat, Maroc
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
Introduction : La toxoplasmose est une parasitose cosmopolite due à un protozoaire Toxoplasma gondii. Cette
infection, habituellement bénigne, est particulièrement
redoutable dans deux populations, la femme enceinte et
le sujet immunodéprimé. Vu son caractère généralement
asymptomatique, le diagnostic de la toxoplasmose repose
essentiellement sur la sérologie. Le test recomLine Toxoplasma IgG est un test immunoenzymatique sur membrane
pour la détection des anticorps IgG spécifiques. Il est
basé sur l’utilisation de différents antigènes recombinants.
Objectifs : Notre étude a pour objectif de comparer les
performances du test recomLine Toxoplasma IgG® à ceux
obtenus par une méthode de référence, Enzym linked immunosorbed assay (Elisa) conventionnelle, afin d’en déduire la
sensibilité et la spécificité du test. Matériel et méthodes :
Chaque sérum a fait l’objet d’un test par technique Elisa
Platelia Toxo IgG® BioRad et du test recomLine Toxoplasma IgG® . Nous avons mesuré le temps de réalisation et
le prix de chaque technique utilisée, nous avons par ailleurs
comparé les performances de ce kit par rapport à la technique Elisa manuelle. Résultats : Nous avons inclus 20
sérums parvenus au laboratoire de parasitologie de l’hôpital
militaire d’instruction Mohammed V dans le cadre de son
activité de routine de dépistage et de suivi sérologique des
femmes enceintes. La sensibilité du kit est de 75 %, la spécificité est de 50 % et la concordance kappa est bonne
(kappa = 0,825). Conclusion : Le test recomLine Toxoplasma IgG, bien qu’il soit simple et peu coûteux, présente
l’inconvénient d’avoir une sensibilité et une spécificité peu
satisfaisantes et de nous permettre un suivi sérologique
fiable des personnes à risque.
Évaluation de deux techniques d’examen
direct et deux tests de détection antigénique
dans le diagnostic d’accès palustre
El alami S, Handor N, Bouchrik M, El Mellouki W,
Lmimouni B
Laboratoire de parasitologie et de mycologie, Hôpital militaire d’instruction Mohamed V, Rabat-Maroc
Introduction : Le paludisme demeure la plus importante
maladie parasitaire, responsable environ d’un million de
décès chaque année. Le diagnostic biologique du paludisme
est une urgence. Les résultats doivent être rendus dans un
délai maximum de 2 heures en prenant contact avec le clinicien. L’examen microscopique des étalements sanguins est
la méthode de choix. Objectif : Le but de ce travail est de
comparer les résultats de deux techniques d’examen direct
et deux tests de détection antigénique sur bandelette dans le
diagnostic d’accès palustre en urgence, d’évaluer les intérêts et les limites de la détection des antigènes circulants,
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
d’analyser les paramètres de fiabilité (sensibilité, spécificité), les valeurs prédictives et le temps de réalisation pour
chaque technique utilisée et de valider ainsi les techniques
les plus adaptées pour le diagnostic de cette parasitose.
Patients et méthodes : Il s’agit d’une étude prospective
réalisée du 1er septembre 2007 au 30 janvier 2008 au laboratoire de parasitologie et de mycologie à l’hôpital militaire
d’instruction Mohamed V à Rabat. Durant cette période
100 prélèvements ont été adressés au laboratoire devant
toute suspicion de paludisme. Chaque prélèvement a bénéficié, dans l’ordre, d’une goutte épaisse rapide, d’un frottis
sanguin et de 2 tests immunochromatographiques : Now
Malaria® et Immunoquick® . Résultats : Sur les 100 échantillons examinés 23 ont été retrouvés positifs et 77 négatifs
aussi bien par la goutte épaisse rapide que par le frottis sanguin ; 17 prélèvements ont été positifs et 83 négatifs par le
test immunchromatographique Now Malaria® . La combinaison de ce test avec la goutte épaisse rapide a montré un
gain de sensibilité de 100 % et une spécificité de 10 0 %.
Pour le test Immunoquick® ; 9 prélèvements ont été positifs
et 91 négatifs. La sensibilité de ce test était de 47 %, la spécificité de 98,8 %, la valeur prédictive positive de 88,89 %
et la valeur prédictive négative de 90 %. L’espèce la plus
fréquemment identifiée est le Plasmodium falciparum avec
un taux de 73,9 %. L’utilisation des bandelettes constitue
un moyen de diagnostic très rapide mais la persistance de
l’antigénémie après guérison et sa monospécificité vis-àvis de P. falciparum constituent des inconvénients majeurs.
Conclusion : Le schéma le plus intéressant (meilleure
concordance et prix de revient modéré) pour le diagnostic d’accès palustre en urgence est la réalisation simultanée
d’une goutte épaisse rapide, d’un frottis sanguin et d’une
bandelette Now Malaria® .
PHARMACOTOXICOLOGIE
Mise au point du dosage de quatre
␤-bloquants par chromatographie
Louis M1 , Legas A2 , Funck-Brentano Ch2 , Zahr N2
1
Laboratoire de Biochimie, GH Pitié Salpêtrière, 47,
boulevard de l’hôpital, 75013 Paris ; 2 Laboratoire de Pharmacologie, GH Pitié Salpêtrière, 47, boulevard de l’hôpital,
75013 Paris
Objectifs : Mise au point du dosage de 4 ␤–bloquants
(métoprolol, aténolol, sotalol, nadolol) fréquemment utilisés en clinique, par chromatographie liquide haute
performance (HPLC). Sujets : Les ␤-bloquants sont des
antagonistes compétitifs et sélectifs des récepteurs ␤adrénergiques périphériques et centraux. Une intoxication
77
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
par ceux-ci est une urgence grave entraînant une hospitalisation en réanimation. La gravité dépend de la dose ingérée
ainsi que de la nature du ␤-bloquant. Ce dosage permettra de déterminer la nature et la concentration sanguine du
␤-bloquant en cause, et de réaliser un suivi thérapeutique
pharmacologique du sotalol. Matériels et méthodes : Le
système chromatographique Waters® comprend une pompe
binaire, un injecteur, une colonne Interchrom® C18, un
détecteur fluorimétrique avec quantification à 225 (logeur
d’onde d’excitation) et 298 nm (longeur d’onde d’émission)
et un système d’acquisition informatisé. La phase mobile,
circulant à un débit de 1,2 mL/min, est composée d’un
mélange d’acétonitrile et de potassium dihydrogène phosphate (KH2 PO4 ). Après séparation par centrifugation,
l’extraction a été réalisée par l’acétate d’éthyl en milieu
alcalin. La phase organique est évaporée et reprise par
200 ␮L de phase mobile. Résultats : La méthode est spécifique et sensible (limite de détection : 50 ng/mL pour
l’aténolol et le nadolol, HMG/mL pour le sotalol, 10 ng/mL
pour le métoprolol). La linéarité va de 0 à 1 000 ng/mL,
de 0 à 200 ng/mL, de 0 à 5 000 ng/mL pour l’aténolol
et le nadolol, le métoprolol et le sotalol respectivement.
La répétabilité et la reproductibilité, mesurées à 3 niveaux
de concentrations pour chaque molécule, ont montré des
coefficients de variation inférieurs à 15 %. Le rendement
d’extraction est supérieur à 60 % pour chaque molécule.
Chez 92 patients prenant une dose unique de 80 mg de
sotalol, la concentration plasmatique moyenne est de 639 ±
204 ng/mL (254-1 197 ng/mL) avec un coefficient de variation de 32 %. Conclusion : Nous avons mis au point une
méthode spécifique utilisant l’HPLC avec détection fluorimétrique pour le dosage de 4 ␤-bloquants. Ce dosage
permettra d’une part d’identifier la molécule lors d’une
intoxication massive par un ␤-bloquant, et d’autre part de
surveiller leur concentration plasmatique à faible marge
thérapeutique.
Chitosan nanoparticles as carrier
for zidovudine, an anti HIV drug
Dahmane EM1 , Taourirte M1 , Rhazi M2 , Belfkira A1 ,
Fertah M1
1
Laboratoire de chimie bio organique et macromoléculaire
(LCBM) ; Département des sciences chimiques, Faculté
des sciences et techniques Guéliz (FSTG), Marrakech,
Morocco ; 2 Laboratoire des macromolécules naturelles
(LMN), Ecole normale supérieure, BP S41, Marrakech,
Morocco
Purpose: The clinical limitations of zidovudine are
its short plasma half-life (approximately 1 h), and its
dose-dependent toxicities, especially granulocytopenia and
78
anemia, often found in zidovudine-treated patients. To
overcome these inconveniences. Methods: The zidovudine loaded chitosan nanoparticles are prepared by gelation
of chitosan with tripolyphosphate by ionic cross-linking
and quantified by an HPLC method. The physicochemical
properties of nanoparticles are investigated by FTIR and
scanning electron microscopy. Results: The images show
that these particles are spherical in shape. The properties
of chitosan nanoparticles such as encapsulation capacity,
the loading capacity and controlled release behaviors zidovudine are evaluated. Experimental results indicate that
the loading capacity, encapsulation efficiency and zidovudine release behaviors are affected by several factors
including pH, zidovudine initial concentration, chitosan
molecular weight and concentration of tripolyphosphate. In
vitro release shows that the nanoparticles provide a continuous release. Entrapped zidovudine is released for more
than 21 h. Conclusions: These results indicated that chitosan/tripolyphosphate nanoparticles are a promising carrier
system for controlled delivery of anti-HIV drugs.
Influence of co-administered
immunosuppressive drugs
on immunoenzymatic dosage
of mycophenolic acid
Koraïchi F1 , Gandia P1,2 , Kamar N3 , Rostaing L3 , Chalret
du Rieu Q1 , Lavit M1 , Houin G1
1 Laboratoire de pharmacocinétique et toxicologie clinique,
Institut fédératif de biologie, Hôpital Purpan, Toulouse ;
2 Laboratoire de pharmacocinétique, EA3035, Toulouse ;
3 Service de néphrologie, dialyse et transplantation
d’organes, Hôpital Rangueil, Toulouse
Objectives: Mycophenolate mofetil (MMF) is the prodrug
of mycophenolic acid (MPA), an immunosuppressive drug
used to prevent graft rejection. In order to optimize the
treatment and to avoid under- and over-dosages, therapeutic drug monitoring (TDM) of MPA has become a common
practice for renal-, hepatic- and cardiac-transplant patients.
To date, several analytical methods can be used for the
TDM of MPA. The objective of this study was to compare
Enzyme multiplied immunoassay technique (EMIT) and
Liquid chromatography-UV detection (LC-UV) for MPA
quantification, according to the co-administered immunosuppressive drugs (cyclosporine vs belatacept). Method:
123 samples from 58 adult patients, with kidney transplant, participating in phase III clinical trials (Benefit
studies) were analysed. Eighteen patients received MMF
co-administered with cyclosporine (anticalcineurine) while
40 patients received MMF associated with belatacept (a
protein composed of the Fc fragment of a human IgG1
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
immunoglobulin linked to the extracellular domain of
CTLA-4). Each sample was analysed with both EMIT
and LC-UV. The agreement between the MPA concentrations obtained with the two analytical methods was
assessed using Bland Altman plot and Passing-Bablock
regression. Results: Independently of the co-administered
drug, the MPA concentrations were underestimated by
the EMIT method when compared with LC-UV one
(EMIT = 0.727 + 0.854 LC-UV), with a significant bias of
- 0.829 mg/L, and systematic proportional and constant
errors. This underestimation was observed in the belatacept co-treated group (EMIT = 0.619 + 0.852 LC-UV), with
a significant bias of - 1.06 mg/L and a systematic proportional error while concentrations agreed in the cyclosporine
co-treated group (no significant bias was found). Conclusion: The quantification of MPA using the EMIT method
is influenced by the co-administered immunosuppressive
treatment. Since MPA presents a narrow therapeutic index,
such an analytical method is not acceptable for clinical
use. Thus, chromatographic methods such as LC-UV or
Liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS/MS)
are currently preferred.
Mise en place d’une interprétation
biologique dans un laboratoire
de pharmaco-toxicologie
Gandia P1,2 , Lavit M1 , Saivin S 1 , Trancart T1 , Houin G1
1 Laboratoire de pharmacocinétique et toxicologie clinique,
Institut fédératif de biologie, Hôpital Purpan, Toulouse ;
2 Laboratoire de pharmacocinétique, EA3035, Toulouse
Objectifs : Pour les médicaments présentant une forte
variabilité inter-individuelle des paramètres pharmacocinétiques, associée à une marge thérapeutique étroite
et à l’existence d’une corrélation entre concentrations
(exposition) et efficacité/toxicité, le suivi thérapeutique
pharmacologique (STP) conduit à une adaptation individuelle de la posologie, devenant ainsi un outil majeur
dans la prise en charge du patient. Parallèlement, chaque
résultat en terme de concentrations/exposition doit pouvoir être interprété par le biologiste afin de fournir
au clinicien une information regroupant (1) les raisons
ayant conduit à des concentrations/exposition située(s)
en dehors de la zone thérapeutique préconisée et (2)
le délai d’attente avant toute nouvelle vérification des
concentrations circulantes. Méthode : Au laboratoire de
pharmacocinétique et toxicologie clinique du CHU Purpan (Toulouse), pour chaque médicament répondant aux
critères d’un STP, une interprétation pharmacologique,
validée par l’ensemble des biologistes du laboratoire, a
été rédigée en déclinant trois cas de figure : concentraAnn Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
tions/exposition situées (1) en dessous, (2) au-dessus ou
(3) dans la zone thérapeutique préconisée. Les raisons
connues d’un sous- et surdosage ont été déterminées en
se basant sur les données issues de la littérature (défaut
d’absorption, induction/inhibition enzymatique, altération
des voies d’élimination. . .). Le délai d’attente avant toute
nouvelle vérification des concentrations circulantes a été
défini comme étant le temps nécessaire pour atteindre le
nouvel état d’équilibre suite au changement de posologie,
soit 5 demi-vies d’élimination. Par ailleurs, ces interprétations pharmacologiques ont été intégrées dans le système
informatique (MOLIS) du laboratoire afin d’apparaître sur
le compte-rendu validé par le biologiste. Résultats : Ce travail a été réalisé pour plusieurs classes pharmacologiques
bénéficiant d’un STP (antibiothérapie, antiviraux, immunosuppresseurs, antiépileptiques. . .) soit à ce jour un total
de 30 molécules. Les interprétations pharmacologiques ont
permis d’apporter au clinicien une information pertinente
et rapide, combinant des données physiopathologiques et
pharmacocinétiques. Conclusion : Le STP associé à une
interprétation pharmacologique est une activité positionnant le biologiste comme un acteur de santé pleinement
impliqué dans la prise en charge du patient, selon les recommandations du chapitre 4.7 « Prestations de conseils » de
la norme ISO 15189.
Dosage de glycols en chromatographie
gazeuse couplée à un détecteur FID
Séraissol P1 , Moulin C1 , Gandia P1,2 , Lavit M1 , Houin G1
1 Laboratoire de pharmacocinétique et toxicologie clinique,
Institut fédératif de biologie, Hôpital Purpan, Toulouse ;
2 Laboratoire de pharmacocinétique, EA3035, Toulouse
Objectif : Les intoxications par les glycols sont un sujet
de préoccupation majeure en toxicologie clinique en raison de leur gravité potentielle. L’éthylène glycol est le
plus fréquemment incriminé. En l’absence d’antidote spécifique, le pronostic vital peut être engagé avec l’absorption
de quelques dizaines de millilitres de liquide. En cas
d’ingestion accidentelle ou volontaire de glycols, un diagnostic rapide et précis de la nature de l’intoxication, ainsi
qu’une prise en charge thérapeutique précoce, augmentera considérablement les chances de survie. De ce fait,
le dosage des glycols en urgence est extrêmement utile.
L’objectif de ce travail a consisté à mettre au point et valider une méthode de dosage rapide, facile à mettre en œuvre
et pouvant être réalisée 24 h/24. Notre choix s’est porté sur
une méthode de chromatographie en phase gazeuse (CPG)
couplée à un détecteur FID. Méthode : La méthode développée a été validée par l’étude de la linéarité, la spécificité,
le rendement d’extraction, la limite de quantification, la
79
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
dilution, la stabilité ainsi que la répétabilité et la reproductibilité pendant 5 jours. Ont été extraits 200 ␮L de plasma,
par une extraction liquide-liquide, avec pour étalon interne
le 1,2-butanediol. Six glycols ont été déterminés par CPGFID. La séparation chromatographique a été réalisée à l’aide
d’une colonne Permabond–CW20M–DEG 25mx0.25mm
(Macherey-Nagel, Allemagne). Le gaz vecteur utilisé a été
de l’azote à un débit de 2 mL/min. Un programme de températures a été choisi pour optimiser la séparation des glycols,
avec une durée d’acquisition de 20 min. Résultats : Les
temps de rétention s’échelonnent de 9 à 19 min, avec une
symétrie des pics très satisfaisante. La linéarité a été validée pour une amplitude de 25 à 2 000 mg/L. Un modèle de
régression linéaire pondérée par 1/C a été utilisé, et le coefficient de régression linéaire obtenu a toujours été > 0,999.
Le taux d’extraction moyen pour les 6 glycols a été compris
entre 83 et 90 % et l’étalon interne à 67 % avec une précision inférieure à 20 %. Les inexactitudes étaient comprises
entre - 10,80 et 8,42 % pour la variabilité intra-jour, et 2,17 et 8,70 % pour la variabilité inter-jour. Conclusion :
Les services d’urgence sollicitent de plus en plus un dosage
rapide et précis des glycols, en particulier en pédiatrie. La
méthode ainsi validée est particulièrement adaptée pour la
toxicologie d’urgence et est accessible à un grand nombre
de laboratoires. En effet, elle est rapide, spécifique, facile à
mettre en œuvre, et peu onéreuse en terme d’équipements.
A new CYP2D6 genotyping method
based on a single run analysis
Classen JF1 , Pepermans X2 , Vaerman JL3 , Linden R4 ,
Wallemacq P1 , Haufroid V1
1
Centre for Toxicology and Applied Pharmacology, Université catholique de Louvain, Belgium ; 2 Centre of Human
Genetics, Cliniques Universitaires Saint-Luc, Brussels,
Belgium ; 3 Department of Molecular Biology, Cliniques
universitaires Saint-Luc, Brussels, Belgium ; 4- Instituto de
Ciências da Saúde, Universidade Feevale, Brazil
Background: Cytochrome P450 2D6 is a highly polymorphic and well-characterised drug-metabolizing enzyme. It
is responsible for the biotransformation of about 20% of all
currently prescribed drugs. More than 80 alleles have been
described and CYP2D6 genotype is related to CYP2D6
activity. Several techniques have been developed to genotype CYP2D6 such as Multiplex PCR, RealTime PCR,
SNapshot, but none of them include the analysis of the
most relevant alleles in a single assay. Furthermore, the
presence of highly homologous pseudogenes and the possibility to get gene duplications or deletions make genotyping
of CYP2D6 even more challenging. Luminex xTAG® technology is a new easy genotyping method that allows the
80
simultaneous detection of most relevant alleles found in different ethnicities as well as deletions and duplications. The
aim of the present study was to compare the Luminex® multiplex genotyping technique with commonly used TaqMan®
assays. Methods: 97 DNA from Brazilian women with
breast cancer treated with tamoxifen were screened for
CYP2D6 polymorphisms. DNA was extracted by a salting
out method and by an automated extraction method (Magna
Pure® (Roche Diagnostics)). DNA was analyzed by the
Luminex xTAG® CYP2D6 Kit v3 (Luminex Corporation)
and for all patients, 7 selected SNPs were compared with
the TaqMan® assays (TaqMan® Drug Metabolism Genotyping Assays (Applied Biosystems)). Results: Similar
results were obtained for both extraction methods indicating
that automated techniques are also suitable for genotyping methods including long fragment PCR analysis as for
CYP2D6. Ten commercial controls (Coriell) were tested
by Luminex® and TaqMan® assays and gave successful
results. Among the 679 SNPs analysed by both methods
672 gave concordant results (99,0%). According to the wellknown Brazilian ethnic intermixing, we found a wide range
of different CYP2D6 genotypes using the Luminex® assay.
Conclusion: Luminex xTAG® CYP2D6 kit v3 provides a
powerful and easy handling technique allowing the determination of 19 SNPs on a single assay, corresponding to
15 different alleles. It has to be considered as an interesting
alternative to the AmpliChip® CYP450 Test (Roche Diagnostics) for CYP2D6 genotyping of patients from different
ethnicities. In comparison with other existing techniques, it
allows a wider screening including CYP2D6 deletion (*5)
and duplications analyses.
Tacrolimus et tampon de perfusion
placentaire : méthode de dosage
Jobard M1,2 , Gil S1 , Furlan V3 , Croux L2 , Funck-Brentano
Ch4 , Lott MC2 , Zahr N4
1
Laboratoire EA 4123, Université Paris Sud 11, Chatenay Malabry (92) ; 2 Service pharmacie, Hôpital Antoine
Béclère, APHP, Clamart (92) ; 3 Service pharmacie, CHU
de Bicêtre, APHP, Le Kremlin Bicêtre (94) ; 4 Service
pharmacologie, GH Pitié Salpêtrière, APHP, Paris (75)
Introduction : Le projet Placen’tac vise à étudier le passage transplacentaire du tacrolimus chez la femme enceinte
greffée rénale en utilisant le modèle ex vivo du cotylédon
humain perfusé. Ce modèle nécessite un tampon de perfusion placentaire. Deux méthodes de dosage sanguin du
tacrolimus sont employées en routine pour le suivi thérapeutique des patients : le dosage par chimiluminescence
(Architect® ) et le dosage par spectrométrie UPLC-MS/MS
(Waters® ). Si elles sont validées pour la matrice « sang »,
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
aucune de ces méthodes n’est validée pour la matrice
« tampon de perfusion placentaire ». Objectif : Choisir la
technique analytique la mieux adaptée au dosage du tacrolimus dans le tampon de perfusion placentaire et procéder
à sa validation. Matériels et méthodes : Une concentration connue de tacrolimus dans le tampon de perfusion
placentaire a été dosée à 3 reprises par les 2 techniques
(Architect® et spectrométrie MS/MS). Ce tampon est une
solution aqueuse composée d’ESBB (Earle’s Balanced Salt
Solution), enrichie en albumine et tamponnée au pH physiologique. La validation de la méthode a consisté à déterminer
la spécificité, la linéarité, l’exactitude, la répétabilité et la
fidélité intermédiaire sur une gamme de tacrolimus (de 5
à 100 ng/mL) et 4 niveaux de contrôles (5–15–30 et 80
ng/mL). Une précipitation des protéines par une solution
aqueuse de sulfate de zinc 0,1 M, l’addition d’une solution d’étalon interne (ascomycine) et d’acétonitrile ont été
réalisées avant injection de l’échantillon dans le système
d’analyse. Résultats : L’erreur relative par rapport à la
valeur cible était de - 13 % pour la spectrométrie MS/MS
et de - 27 % pour l’Architect® (n = 3). La spectrométrie MS/MS a été retenue, les valeurs d’acceptabilité étant
comprises entre ± 15 %. De par sa nature, la spectrométrie MS/MS est considérée comme spécifique. La relation
linéaire entre la concentration et le signal est vérifiée pour
les gammes de concentrations de 5 à 100 ng/mL de tacrolimus (r2 = 0,998). La méthode est exacte (coefficient de
variation 7,7 %). Les coefficients de variation traduisant
la répétabilité et la fidélité intermédiaire sont inférieurs à
15 % : la méthode est répétable et fidèle. Conclusion : Ce
travail montre l’intérêt de la spectrométrie MS/MS pour le
dosage de molécules dans des milieux spécifiques utilisés
en recherche fondamentale. La validation de la méthode de
dosage du tacrolimus dans le tampon de perfusion placentaire permettra de mener à bien l’étude Placen’tac.
ORGANISATION DU LABORATOIRE
les normes ISO 15189 et 17025. La première thématique
de notre démarche a consisté à mettre en place un corpus documentaire constamment réactualisé et ciblé, sur les
documents du Cofrac (SH GTA 01, SH REF 02, LAB GTA
06, etc.), sur les référentiels de bactériologie (Rémic, CASFM) et sur les recommandations de l’Afssaps. La seconde
thématique a été dédiée au processus pré-analytique avec
rédaction d’un manuel de prélèvements, d’un catalogue
des analyses et d’un guide des prélèvements microbiologiques. L’objectif de ces documents est de fournir des
conseils en matière de choix d’examens et de prestations du laboratoire. La troisième thématique a concerné
le processus analytique avec la vérification (portée A) sur
site des différentes techniques manuelles et automatisées
(Vitek 2 Compact, BacT/Alert, UF 50). Dans le cadre de
l’évaluation des performances analytiques, nous avons initié l’étude de la répétabilité du Vitek 2 Compact en utilisant
un nombre d’essais n = 3 sur 9 souches de références pour
l’identification et l’antibiogramme, puis nous sommes passés à n = 10 pour 3 souches ATCC pour essayer de respecter
les nouvelles recommandations du SH GTA 04. Pour la
cytologie urinaire automatisée par cytométrie en flux avec
l’UF 50 nous avons utilisé un nombre d’essais n = 30. La
quatrième thématique a été consacrée à la maîtrise de la gestion des portées de type A conformément aux documents
SH INF 50 et SH REF 08. Une attention particulière a été
portée à la dynamique d’amélioration continue (gestion des
non conformités et des réclamations, enquêtes de satisfaction, actions correctives et préventives, indicateurs qualité,
audits internes, revues de direction, suivi et redéfinition des
plans d’action). Le processus post analytique a fait l’objet
d’une attention particulière et notamment concernant : la
convention de preuve, les comptes rendus, la gestion des
urgences, la traçabilité de la prestation de conseils. Enfin,
les dispositions organisationnelles et techniques déployées
ont permis au terme de quatre années de préparation une
mise en conformité avec le référentiel d’accréditation SH
REF 02 fondé sur la norme 15189.
L’accréditation en bactériologie :
organisation et méthodologie
Premarket evaluation of the new Beckman
Coulter AU5800 chemistry system
Klein JP, Gorsy T, Xaille E
von Schrenck T, Kuczinski S, Tehrani D, Weinhold A,
Clasen A
Laboratoire Xaille-Klein - 98 rue des Capucins 55200
Commercy
Compte tenu de sa spécificité l’accréditation en bactériologie des laboratoires de biologie médicale est plus difficile
à mettre en œuvre que pour d’autres disciplines en raison
d’une automatisation partielle laissant une large place aux
techniques manuelles. C’est pourquoi, sur environ 4 500
laboratoires en France seulement 22 sont accrédités selon
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Labor Dr. von Froreich-Bioscientia, Hamburg, Germany
Introduction: The Clinical Chemistry department serves
more than 1.500 active referrers, 96% physicians practices
and 4% hospitals. App. 10.000 daily orders are received,
with a peak between noon and 3 p. m. In the present study
one of the four AU5420 systems has been compared with
the new AU5820. Methods: All testing run on one AU5420
81
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
were mirrored onto the AU5820, simulating the exact routine conditions using a mirrored data bank of the LIMS.
Patients data were anonymized. We evaluated 33 photometric and 3 ISE tests, with special focus on the quality
of results and the speed of analysis. The ethical committee of the Hamburg Chamber of Physicians approved the
study. Results: Comparisons (AU 5420 vs. AU5820) for
all tests (n = 45.000) demonstrated an excellent correlation. Instrument quality control was performed according to
RiliBäK (Richtlinien der Bundesärtzekammer, 2008) rules.
Out of 36 analytes, 33 fully met the precision criteria over
the whole measuring range, with CKMB, RF and GOT
showing somewhat higher CV in the very low measuring
range. Internal instrument quality control was performed
with each run. For all 36 analytes the external quality
control (ring trials) were passed. Due to a faster cycle time
and independently pipetting probes, turn around times of
the AU5820 were at least 30% faster than on the current
instrumentation when routine conditions were applied (3
photometric, 1 ISE tests per sample). Specifically, the maximum increase in number of analyses was 43% (37 to 53
analyses per minute). Conclusion: Under routine conditions the new AU5820 demonstrated high quality of analysis
for all parameters tested for both internal and external quality controls. A significant increase of tests/hours has been
observed. The instrument showed a good robustness with
no emergency service call during the evaluation time of
5 months.
Terminologie NPU pour échanger fiablement
Pontet F1 , on behalf of the IFCC (International Federation
of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine)-IUPAC
(International Union of Pure and Applied Chemistry)
joint C-SC-NPU (Committee-Subcommittee on Nomenclature for Properties and Units) : Bruunshuus I2 , Dybkaer
R3 , Férard G4 , Flatman R5 , Forsum U6 , Fuentes-Arderiu
X7 , Johannessen H8 , Karlsson D9 , Magdal Petersen U8 ,
Nordin G10
1 Service de biochimie, Hôpital Lariboisière, Paris, France ;
2
Copenhagen, Denmark ; 3 Department of Standardization
in Laboratory Medicine, Region H Frederiksberg Hospital,
Copenhagen University Hospital, Frederiksberg, Denmark ;
4 Strasbourg, France ; 5 Biochemistry Department, Sullivan
Nicolaides Pathology, Indooroopilly, Australia ; 6 Division of Clinical Microbiology, Faculty of Health Sciences,
Linköpings Universitet, Linköping, Sweden ; 7 Laboratori Clínic, Hospital Universitari de Bellvitge, Feixa
Llarga s/n, L’Hospitalet de Llobregat, Catalonia, Spain ;
8 Sundhedsinformatik – Sundhedsstyrelsen, Copenhagen
S, Denmark ; 9 Linköpings universitet, IMT, Linköping,
Sweden ; 10 Equalis, Uppsala, Sweden
82
Le but de la terminologie NPU est d’identifier et de
décrire les propriétés examinées dans les laboratoires de
biologie clinique. Placées dans le système informatisé du
laboratoire, les descriptions sont des identifiants pour une
communication fiable des résultats de laboratoire. Elle intéresse la plupart des spécialités et est recommandée par
l’IFCC et l’IUPAC. Un examen étudie les propriétés de
quelque chose. En biologie clinique, l’issue d’un examen
de patient est un ensemble d’informations sur des propriétés
de ce patient. La terminologie NPU identifie les éléments
du résultat de laboratoire en précisant ces propriétés dans
une définition soigneusement structurée. Ces définitions
décrivent la partie de l’univers étudiée (le système), le
composant examiné dans ce système, la nature-de-propriété
de ce composant, l’unité de mesure et des précisions si
nécessaire. Ceci est exprimé à l’aide de termes internationalement reconnus et référencés, assemblés en une syntaxe
fixée, et identifié par un code:
– NPUxxxxx
– Système—
– Composant
– nature-de-propriété
– unité de mesure
L’emploi des unités SI et de cette syntaxe permet la traduction de ces définitions dans d’autres langues sans altérer le
concept défini. La version française est accessible gratuitement sur le site web de la SFBC.
What are nominal properties
and examinations ?
Pontet F1 , Nordin G2 , Dybkaer R3 , Forsum U4 , FuentesArderiu X5
1 Service de biochimie, Hôpital Lariboisière, Paris, France ;
2
EQUALIS, Uppsala, Sweden ; 3 Department of Standardization in Laboratory Medicine, Region H Frederiksberg
Hospital, Copenhagen University Hospital, Frederiksberg,
Denmark ; 4 Division of Clinical Microbiology, Faculty of
Health Sciences, Linköpings Universitet, Linköping, Sweden ; 5 Laboratori Clínic, Hospital Universitari de Bellvitge,
Feixa Llarga s/n, L’Hospitalet de Llobregat, Catalonia,
Spain
Metrology is related to quantities. Laboratory sciences also
deal with nominal properties, not covered by the ‘International vocabulary of metrology – Basic and general
concepts and associated terms (VIM)’. There is a need
for a similar vocabulary about examinations others than
measurements (notably classification of blood cells, blood
grouping, and identification of microbes). The process to
elaborate this vocabulary is similar to that of the VIM revision: a wide opening to the relevant organisations providing
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
Congrès
recommendations. The definitions and examples of the VIM
are partly adapted to nominal properties and examinations.
ISO terminology work rules are applied. The current document includes 73 entries, with terms, definitions, notes and
examples. It comprises three parts: Nominal properties,
Nominal examinations, Nominal examination standards.
This poster presents explanatory excerpts from the document with relation to their superordinates that cover both
quantities and nominal properties. A diagram illustrates
the ISO terminology conceptual scheme. Discussion points
are raised, aiming at opening fruitful exchanges between
authors and readers: are nominal properties a sort of quantities? How to define ‘nominal examination uncertainty’?
Is it preferable to use and define ‘nominal examination precision’ or ‘nominal examination imprecision’? What is a
‘blank nominal property value’? Is the concept of ‘calibration’ applicable to nominal examinations? This work helps
laboratory scientists, professional societies and manufacturers to discuss and understand the basic concepts related to
nominal properties – hitherto lacking an appropriate vocabulary for laboratory sciences.
Workflow optimization in the clinical
chemistry department
of a high volume laboratory
Wisplinghoff F
Laboratoriumsmedizin köln – Dres. med. Wisplinghoff and
Colleagues, Cologne, Germany
Objectives: High volume laboratories provide a large number of clinical tests, both to hospitals and private practices.
To optimize clinical impact, highly accurate results need
to be generated in a minimal amount of time. Therefore
optimization of methods, platforms, and workflow in the
laboratory are a crucial part in the provision of optimal
care of patients. This study was conducted to evaluate
the impact of a novel clinical chemistry platform. Material and methods: Laboratoriumsmedizin köln is one of
the largest providers of laboratory medicine in Germany.
Implementation of the AU5800 platform was evaluated for
analytical accuracy and speed, both in simulation and after
installation in the routine workflow under high throughput conditions. For simulation, a broad variety of tests per
sample and a high number of samples per hour were evaluated. Results: In comparison with the AU5400 systems
previously used, the simulations projected an up to 30%
increase in throughput per hour, mainly associated with a
decrease in turn-around time. Simulation of numbers of
samples over time also showed an improved balance of
workload due to faster cycle time. After implementation, we
found a decrease in turn-around time of more than 25%, and
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012
an increase in sample throughput of 48%. In addition there
was a significant reduction of hands-on time due to parameters not included in the simulation such as online-QC,
ease of handling and lower maintenance time. Sensitivity, specificity and reproducibility were at least equivalent.
Conclusion: Implementation of the novel platform decreased turn-around time and increased overall performance
while maintaining analytical quality. Improved handling
and advanced software may allow further workflow optimization due to decreased hands-on time.
Evaluation of the Beckman Coulter AU5822
clinical chemistry system
Strater T, Heindorf M, Müller T, Nauck M
Bioscientia Institut für Medizinische Diagnostik, Labor
Krefeld, Germany
Introduction: The Clinical Chemistry department of the
Bioscientia Laboratory Krefeld (Bioscientia is a member
of Sonic Healthcare), serves 1000 physicians in the area
and processes 5000 samples for clinical chemistry analyses
per day with a total number of 35000 tests. The Beckman
Coulter AU5800 is a new generation high throughput random access clinical chemistry analyser. The AU5800 series
features an onboard capacity of up to 120 simultaneous chemistries with a throughput ranging from 2000 of up to 9800
test per hour (theoretical). The purpose of this study was
to evaluate the new AU5822 composed of two photometric and two ISE modules with a maximum throughput of
5800 tests per hour. A particular focus was set on system
throughput and quality of results and additionally we performed a comparison with our current equipment (Modular
DPPE, Roche Diagnostics) under routine laboratory conditions. Methods: Routine serum samples were tested in
single measurements on the Modular system as well as
on the AU5822. The following 33 parameters were analyzed: Urea, creatinine, uric acid, cholesterol, HDL, LDL,
triglycerides, glucose, total protein, phosphorus, Na, K, Ca,
iron, bilirubin direct, bilirubin total, LDH, AST, ALT, GGT,
AP, CHE, LDH, amylase, lipase, CK, CKMB, acid phosphatase, IgA, IgG, IgM, transferrin, ASL, CRP. Correlation
between both systems was evaluated by debiased regression
analysis according to the method of Passing and Bablok
using the statistical package ABACUS. The within-run and
between-day imprecision was determined using Beckman
Coulter Control material according to the NCCLS 5 × 4
scheme. Results: The within-run as well as the between
day imprecisions were very good for all tested parameters.
In addition, the regression analysis revealed an excellent
correlation between the AU5822 and the Modular with
no significant deviation from linearity for all parameters
83
Congrès
is the high throughput of the system, which resulted in a
significant reduction of the TAT compared to the Modular
system. The AU5800 is easy to operate and requires only
very little maintenance. We conclude that the AU5800 is a
good choice for a high volume laboratory.
Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 03/06/2017.
evaluated. Conclusion: The new Beckman Coulter
AU5800 Clinical System is a fast, easy to use, highly precise
and robust clinical chemistry analyzer. The system showed
a very low imprecision and an excellent correlation to the
Modular system for all tested methods. A major advantage
84
Ann Biol Clin, vol. 70, n◦ 1, janvier-février 2012