BTS BIOANALYSES ET CONTROLES
TECHNIQUES DE MICROBIOLOGIE
2.2.3. Compte-rendu
Pourquoi l’eau à analyser a-t-elle été filtrée ?
Expliquer la réalisation des dilutions de l’eau filtrée « EF ».
3. Etude des bactéries dénitrifiantes d’un biofilm
Les bactéries dénitrifiantes sont des bactéries hétérotrophes qui, grâce à une nitrate réductase, utilisent les
nitrates comme accepteurs terminaux d’une chaîne respiratoire en anaérobiose.
Certaines usines de traitements des eaux utilisent ces bactéries fixées sur des billes alvéolées pour former
un filtre biologique de dépollution.
3.1.Matériel
culture bactérienne de 24 heures sur gélose nutritive inclinée notée « D »
culture bactérienne de 24 heures en bouillon nitraté noté « Dbn »
un tube d’eau physiologique stérile (5 mL)
trois tubes de milieu viande-foie régénérés en surfusion
1 pipette de 1 mL stérile
un tube à hémolyse contenant 2 mL de solution de nitrate de sodium (100 g.L-1)
un tube contenant une solution de chlorate de potassium
un tube à hémolyse vide
réactifs de recherche de la nitrate réductase
lames et réactifs pour coloration de Gram
peroxyde d’hydrogène
3.2.Mode opératoire et compte-rendu
3.2.1. Mise en évidence des propriétés de dénitrification de la souche « D »
Vérifier que la souche possède une nitrate réductase.
Exposer la démarche et le résultat obtenu sur le compte-rendu.
Dans deux milieux viande-foie en surfusion, introduire 0,75 mL de solution de nitrate de sodium.
Dans l’un des deux viande-foie nitratés, introduire 5 gouttes de solution de chlorate de potassium.
Ensemencer les trois milieux viande-foie (VF « normal », VF nitraté, VF nitraté + chlorate).
Incuber à 30°C pendant 24 heures.
Calculer la concentration en nitrate de sodium dans le milieu VF, dont le volume est de 7,5 mL.
3.2.2. Identification de la souche « D »
Effectuer les observations microscopiques nécessaires puis un test enzymatique approprié.