Tube D : culture seulement en bas du tube. La bactérie n`est pas

Gélose Viande Foie (VF)
I.
Principe
La gélose viande foie est un milieu de culture. Il est principalement utilisé en tube profond (tube de
Prévot) pour la détermination du type respiratoire des bactéries, mais aussi pour la culture de
germes anaérobies stricts tels que les Clostridium. Pour la culture de ceux-ci, on peut utiliser le milieu
Viande Foie en tube profond (composition identique au milieu de détermination du type respiratoire)
ou coulé en boite de Pétri (la composition est identique mais la concentration en agar est de l’ordre
de 15g/L).
II.
Composition
Pour 1L d’eau distillée :
 Base viande foie : 30 g
 Glucose : 2 g
 Agar : 6 g
 pH : 7.4
III.
Préparation
Mettre 38 g de poudre dans 1 L d’eau distillée et attendre 5 minutes.
Mélanger et vérifier le pH.
Chauffer doucement en agitant fréquemment puis porter a ébullition jusqu'à dissolution complète.
Répartir en tubes étroits de Prévot à raison de 4.5 mL par tube soit 12 cm de hauteur.
Stériliser à l’autoclave 20 minutes a 120°C.
IV.
Technique d’utilisation
Préparer un récipient d’eau froide.
Parallèlement faire fondre le milieu VF dans une casserole d’eau et a partir de l’ébullition compter au
moins 20 minutes de régénération (dégazage), laisser ensuite refroidir le tube au bain marie a 4550°C (surfusion) pendant 10-15 minutes. Il faut pouvoir tenir le tube dans sa main sans se brûler.
Ensemencer le aussitôt a l’aide d’une pipette Pasteur boutonnée et chargée en remontant en spirale.
Solidifier le milieu dans l’eau froide verticalement et incuber le tube à 37°C pendant 24 à 48 heures.
V.
Lecture
Tube A : culture sur toute la hauteur du tube. La bactérie est
capable de se développer en présence ou en absence d’oxygène :
bactérie dite aéro-anaérobie facultatif (AAF).
Tube B : culture seulement en haut du tube. La bactérie n’est pas
capable de se développer en l’absence d’oxygène : bactérie dite
aérobie strict (AS).
Tube C : culture dans une zone bien délimitée. La bactérie ne se
développe qu’à une certaine concentration d’oxygène : bactérie
dites micro-aérophile.
Tube D : culture seulement en bas du tube. La bactérie n’est pas
capable de se développer en présence d’oxygène, l’oxygène est
toxique pour elle : bactérie dite anaérobie strict (AnS).
Type respiratoire avec ou sans gaz : présence de bulles avec quelquefois fragmentation de la gélose.
VI.
Causes d’erreurs
Gélose mal régénérée.
Gélose ensemencée trop chaude.
Gélose ensemencée trop froide.
Pénétration d’eau dans al gélose lors de la régénération.
Si beaucoup de gaz, gélose disloquée, donc culture difficile a observé.