2 - Nantes Metropole

SCIENCES DE LA TRANSPLANTATION ET D’IMMUNOTHERAPIE »
Annexe 1 : Description du projet CESTI et des attributions de chaque partenaire
ProjetsduCESTIIHU‐Prometteurfinancésparlescollectivités
TitreduprojetPlateautechniquecommunIHU"Genomeediting"(nucléasesspécifiquesdegènes:
utilisationetvectorisation)
NomduResponsable DrIgnacioANEGON,InsermUMR1064,ITUN,CHUdeNantes
RésuméduprojetPlate‐forme"Genomeediting"(nucléasesspécifiquesdegènes:utilisationetvectorisation)
Applicationsdesnucléases:
Modèlesanimaux:KOpouranalysenouveauxgènes(reversegenetics)
KOpournouveauxmodèles
KIparrecombinaisonhomologue
Modèlescellulaires:KOpouranalysenouveauxgènes(reversegenetics)
KIpournouveauxmodèles(cancer)
Thérapieanti‐virale:KOCMV(cellules),PERVs(porcKOpourxéno)
Thérapiegénique: correctiondéfautsgénétiques(foie,rétine)
Biotechnologie: lignéescellulairesproduisantdestransgènesparKI
Leplateautechniquefera:
- Obtentiondenucléasesspécifiquesdegènes,soitpargénérationinterne(TALENs)
ouparobtentionàtraversd’industriels(collaborationspourTALENs,ZFNs,
méganucléases)oucommerciales(ZFNs)
- Conseiletorientation(typedenucléase,sourcedenucléases,stratégiepourKOet
KI)
- Vectorisation:mRNA,plasmidesavecZFNsouTALENsencisouisolées,nucléases‐
2A‐GFP,clonagedansdesvecteursshuttle(AAV,adénosoulentis)
- productiondeslentispournucléases(enparticuliernon‐intégratifs)
- Générationdeconstructionsd’ADNréparateurspourKI
- analysedesmutations(testPCR/mismatch,PCRpourséquences)
- Veilletechnologique
- ConstructiondeTALENsdansl’avenir?
Compositionactuelduplateau:
- I.Anegon INSERM (10%)
- T.NguyenINSERM (20%)
- L.Tessoningénieur (10%)
- R.ThinardAI/ingénieurCDD(50%)
Impacts:
- Industrielsintéressésdansleursapplicationsaveclesquelsonadéjàdes
collaborations(genOwayetCellectis)
- Développementdesinteractionsavecdesindustrielsproducteursdenucléasesavec
lesquelsonadéjàdescollaborations(SangamopourZFNsetTALENS,Cellectispour
méganucléases,PrecisionBiosciencespourméganucléases)
- Expérienceetvisibilitédansleurutilisationpourdesratsgénétiquementmodifiés
parlaplate‐formeRatsTrasngéniques
- UtilisationprojetéedanslecadreducontrateuropéenInnovaLiventhérapie
génique/médecinerégénérativedemaladiesdégénérativesdufoie.
- UtilisationprojetéedesprojetsIHUencourspouréliminerdesvirus(CMVet
PERVs)impliquésdanslatransplantationd’organes
- 
Retombés:
- Visibilitéscientifiquenationaletinternationalpardespublications
- Diffusionàd’autresthématiquesderecherche(médecinerégénérative,cancer)
- Valorisationavecdesindustriels
Duréeduprojet5ans

SCIENCES DE LA TRANSPLANTATION ET D’IMMUNOTHERAPIE »
ProjetsduCESTIIHU‐Prometteurfinancésparlescollectivités
TitreduprojetNouveaumodèlederongeurdoublementhumanisépourlefoieetlesystème
immunitaire:modélisationdudevenirdelagreffed'hépatocytesallogéniques
humains(ProjetHuLivlm)
NomduResponsable
DrTuanHuyNguyen,InsermUMR1064,ITUN,CHUdeNantes
RésuméduprojetContexte
Latransplantationd’organesrestel’uniquethérapiecurativepourremplacer
l’organevitalquin’estplusfonctionnel.Cependant,lesystèmeimmunitairedu
receveursedéfendcontrececorpsétranger.
Lesimmunosuppresseursactuelsontdeseffetssecondaires.Ilfautmieux
comprendrelesmécanismesdesgreffeschezl’Hommepourdévelopperde
nouveauximmunosuppresseurs,oustratégiesdetoléranceimmunitaireaugreffon
(surviedugreffonenl’absenced’immunosuppresseur).Latranspositionchez
l’hommedesavancéesobtenuesdansl'inductiondelatoléranceimmunitaireau
greffonchezlesrongeursaétésouventdécevante;cecienraisondedifférences
immunologiquesentreespèces.
Objectifs
L’objectifdecetravailestdecréerunnouveaumodèleanimalhumanisépour
l’étudedel’alloréactivité.Pourmodéliserlaréponseimmunehumainecontreun
greffonhumain,nousproposonsdedévelopperunmodèlederatdoublement
humanisé,possédantunfoiehumaniséetunsystèmeimmunitairehumanisé.Dans
cemodèle,nouspourronsalorsévaluerdenouvellesstratégies
d’immunosuppressionpharmacologiqueetd’inductiondetoléranceaugreffonqui
sontspécifiquesàl’Homme.
Résultatsattendus
Nousauronsunnouveaumodèlederongeurreproduisantmieuxlerejetdegreffe
humain.Danslesangdesratspossédantunfoiehumanisé,nousdétecteronsdes
facteurssériqueshumainstellel’albumine.Lorsquenousinjecteronsdescellules
mononucléesimmunitaires(PBMC)prélevéesdedonneurssains,celles‐cidétruiront
leshépatocyteshumainscontenusdanslefoiehumanisé.Decefait,l’albumine
humainesériqueneseraplusdétectée.Parcontre,nousnousattendonsàceque
lesanimauxayantreçunostraitementsimmunosuppresseursouinduisantune
toléranceimmunitaire,continuentàproduirel’albuminehumaine.
Impacts
Lesanimauxhumaniséssesontimposéscommelesmodèlesàdévelopperdansle
futurpourétudierl’immunologiedelatransplantation.Notreoriginalitéestde
développerunmodèlestandardiséderatavecunfoiehumanisé.Cedéfiest
envisageablemaintenantgrâceàlatechnologiedescellulessouchespluripotentes
induites(iPS)quiserontutiliséescommesourceinépuisabledesdifférentescellules
maturesdesorganes,ycomprisleshépatocytes.Notremodèleanimalse
positionneraaussicommemodèlepré‐cliniquepourévalueretsélectionnerles
moléculesoustratégiesd’immunorégulationpotentiellementlesplusefficaceschez
l’Homme.
Duréeduprojet3ans

SCIENCES DE LA TRANSPLANTATION ET D’IMMUNOTHERAPIE »
Projets du CESTI IHU-Prometteur financés par les collectivités
TitreduprojetMiseenévidenced’1signatureprédictivedurejetchroniquedegreffepulmonaire
NomduResponsable
PrAntoineMAGNAN,InsermUMR1087,Institutduthorax,CHUdeNantes
DrSophieBROUARD,InsermUMR1064,ITUN,CHUdeNantes
RésuméduprojetLerejetchronique(RC)représenteactuellementlaprincipalecausededécèsàdistancede
latransplantationpulmonaire.Ilaffecte30%despatientstransplantéspulmonairesà3ans
detransplantation,sansquelesmécanismesmisenjeusoientclairementidentifiés.
Afind’étudiercettepathologie,lacohortemulticentriquenationaleCOLTaétéconstituée
depuis2009.Elleregroupeactuellementplusde600patientstransplantéspulmonaireset
s’appuiesurunebiocollectionincluantARNsanguinetbiopsiesbronchiquescollectésà
partirdelatransplantationpuistousles6moispendant5ans.
Notreprojetseproposedoncd’analyserparpuceàADNetparTLDA,l’ARNetlesmiRNA
sanguinde200patientstransplantésavecunsuivide3anspost‐transplantation.Les
résultatsserontcomparésentrelespatientsindemnesdeRCetceuxayantdéveloppéun
RC,afindemettreenévidencedesbiomarqueursprécocesduRC.L’étudedestranscritset
miRNAseraégalementréaliséedanslegreffonetcomplétéeparuneétudemécanistique
afindecomprendrelerôledesfacteursidentifiésdanslemécanismedeRC.Enfin,
l’ensembledesdonnéesseraintégréafindemodéliserunréseauderégulation
transcriptionnel.
Ceprojet,parl’identificationdebiomarqueursprécocesduRCainsiqueparl’identification
denouvellesciblesthérapeutiqueentransplantationpulmonaire,devraitàterme
permettreunemeilleurepriseenchargedespatientstransplantéspulmonaires.
Duréeduprojet4ans

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Projets du CESTI IHU-Prometteur financés par les collectivités
TitreduprojetDevelopmentofanewimmunotolerantfetalskinconstructforwoundhealing
NomduResponsablePrBrigitteDRENO,UnitédeThérapieCellulaireetGéniqueUTCG,CHUdeNantes
Résuméduprojet
Leprojetapourbutledéveloppementd’unnouveausubstitutcutanéassociantdescellulesde
peaufœtaleauseind’unematricedecollagènepourletraitementdespertescutanées.
L’ingénierietissulaireapermisledéveloppementdethérapiesinnovantesdansledomainedela
réparationcutanée,baséessurl’utilisationdekératinocyteset/oufibroblastesenculture.
Actuellement,letraitementdespertescutanéesparthérapiecellulairesefaitprincipalement
selondeuxapproches,quiontcependantchacuneleurslimites.Lapremièrereposesurle
remplacementdelapertecutanéepargreffedéfinitivedecellulesautologuesproliférantes.
Cettesolutional’avantagedeneprésenteraucunrisquederejetpourlepatientmaiselle
nécessitederéaliserunprélèvementchezlepatientlui‐mêmeetreprésenteuncoûtde
productionextrêmementimportantavecdesrésultatsquiserontaléatoires,dépendantsdela
capacitédescellulesdupatientàproliférerinvitro(facteurâgedépendant).Laseconde
approcheconsisteàutiliserdescellulesallogéniquesengreffetemporairedontlaproductionest
bienmieuxmaîtrisablemaisavecunrisquederejetimportant.Parailleursàcejourpersonnen’
aréussiaobtenirunfeuilletépidermiquecomplet.
L’originalitédenotreprojetrésidesur3pointsliésàl’utilisationdecellulesfoetales:(1)Grâceà
leurfaibleimmunogénicitéetleurspropriétésimmunosuppressivesellespeuventêtreutilisées
dansuncontexteallogéniquesansengendrerdephénomènederejet.(2)Lescellulesdepeau
fœtale,parlesfacteursqu’ellessécrètentsontcapablesd’améliorerlaqualitéetlarapiditédela
cicatrisation,problèmeconstantpourleschirurgiensplasticiens.Ellesparticipentnotammentau
phénomènederégénération(fermeturedesplaiessanscicatrice).(3)Enfin,grâceàleurforte
capacitédeprolifération,àpartird’unsimpleprélèvementdepeauilestpossibled’enproduire
entrèsgrandequantitésousformedebanquesdecellules.Celles‐cipermettentalorslamiseà
dispositionduchirurgiend’unpansementbiologiqueenquelquesjours.
Danslecadredeceprojet,nousavonsdéveloppéunprotocolespécifiquequinousapermis,à
partird’unprélèvementuniquedepeaufœtalede6cm²,deproduiredeuxbanques
spécifiquementconstituéesdefibroblastesetdekératinocytesenconditionsGMP/BPF,
compatiblespouruneutilisationenclinique.Chacunedecesdeuxbanquesaétécaractériséede
façonintensive,d’unpointdevueidentité,puretéetfonctionnalité.Nousavonsainsipuvérifier
quelesfibroblastesetleskératinocytespossèdentuneforteactionimmunosuppressiveen
inhibantdrastiquementlaproliférationdelymphocytesactivés.Cettepropriété,nouspermet
d’envisagerl’utilisationdecescellulesdansuncontexteallogéniqueavecunrisquetrèsfaible
derejet.Lesfonctionssécrétricesdecescellulesontégalementétéétudiées.Nousavons
montréqueplusieursfacteurscytokiniquesstimulantl’angiogénèsesontsécrétésparles
fibroblastesetparleskératinocytesfœtaux.Nousavonségalementtravaillésurune
combinaisondecescellulesfœtalesauseind’unematricedecollagènequiconstituerale
substitutcutané.Nousavonsvérifiéquel’associationdescellulesfœtalesaveclamatricene
modifiepasleurspropriétés.
NotreobjectifmaintenantestdemetteenplaceuneétudepilotephaseI/IIpourjugerdela
toléranceetdupouvoircicatrisant,denotrepansementbiologiqueutilisépourcouvrirundéficit
cutané.Danscetteoptiquenousavonsdéjàrencontrél’AgenceNationaledeSantéquia
confirmél’intérêtdenotreprojetenvued’uneétudeclinique.Pourcela,nousdevonstout
d’abordréaliserlasécurisationdesdeuxbanquesdefibroblastesetkératinocytes(sécurisation
microbiologique,étudedetumorigénicité,biodistribution).
Sicetteétudepiloteestconcluante,uneétudedephaseIIsurunplusgrandnombredepatients
seramiseenplace.Lesindicationsthérapeutiquespotentiellessontlesbrûlés,lesulcèresde
jambe,lespertesdesubstancescutanéesaprèsexérèsedenaevi.Cemodèledepansement
biologiquen’aaucunéquivalentàcejour.
Duréeduprojet5ans

SCIENCES DE LA TRANSPLANTATION ET D’IMMUNOTHERAPIE »
Projets du CESTI IHU-Prometteur financés par les collectivités
Titreduprojet
Cellulesdendritiques:biologieetapplicationscliniques
NomduResponsable
PrRégisJOSIEN,InsermUMR1064,ITUN,CHUdeNantes
RésuméduprojetL’objectifprincipaldeceprojetestdemieuxcomprendrecertainsaspects
fondamentauxdelabiologiedescellulesdendritiques(DC)(présentationantigénique,
diversité,fonctionsinnées)etoptimiserlagénérationdeDCtolérogènespourle
développementd’applicationscliniquesentransplantationetthérapiegénique.
LesDCjouentunrôlecentraldanslecontrôledesréponsesimmunitairesinnéeset
adaptatives.Cettethématiquederechercheporteusseestdéveloppéedansnotrecentre
depuisunequinzained’annéeavecunereconnaissanceinternationaleavéréeparles
publications.
Malgrétout,lesdeveloppementcliniquesentransplantationrestentlimitéscarilest
nécessairedemieuxcomprendrelesmécanismesmoléculairesdelaprésentation
antigénique,ladiversitéetlesspécialisationsfonctionnellesdesDCetdemieux
caractériserlesDCtolérogènespourunusageclinique.Cesaspectsderecherche
fondamentalesontdeplussousfinancésetfreinentdonclesdéveloppements
précliniques.Lesbutsspécifiquesdecedeprojetsontde:1.Comprendelerôlede
TORID,unemoléculeidentifiéedansnotrelaboratoiredanslaprésentationcroisée
d’antigènesparlesDC.;2/Comprendrelesfonctionsphysiologiquesdelaproduction
d’IL‐22BPparunepopulationdeDCdanslarégulationdel’homéostasieintestinaleet
l’inflammation;3/OptimiserleseffetsprotolérogènesdeHO1surlesDCpourle
dévéloppementd’applicationcliniquesetcomprendrelesmécanismesd’actiondeHO1
surlarégulationdelaprésentationantigéniqueinvivo.Cesprojetsnécessitentle
développementdemodèlesrongeursetprimatesetl’utilisationdeplateformes
existante(Transgénèse,DTC,protéinesrecombinantes).
Lesrésultatsattendusdeceprojetsontdedévelopperdenouvellesapprochescliniques
pourlecontrôledesréponsesimmunitairesentransplantatonsoitparthérapiecellulaire
(DCtolérogènes)soitparciblageinvivodemoléculesimpliquéesdanscertaines
fonctionsdes17DC(TORID,IL‐22BP,HO1).
Ilpermettraégalementderenforcercettethématiquederechercheetdedévelopper
denouvellescollaborationsinternationales.
Duréeduprojet3ans