5 - microcsb

COFFRET D’IDENTIFICATION
DES STAPHYLOCOQUES
URBM/MON/Id.STAPH
REDACTEURS
VERIFICATEUR
Amadou DIOP
Abdoulaye DIOP
Dr Fatou Bintou GUEYE GBAYA
Amy SYLLA
Version :
APPROBATEUR
Pr Cheikh Saad-Bou BOYE

3
URBM/MON/Id.Staph / Date d’application : Décembre 2013 / Version :
Sommaire
1. OBJECTIF ............................................................................................ 5
2. PRINICIPE ................................................................................. 5
3. MATERIEL .......................................................................................... 5
4. Réactifs ........................................................................................ 5
5. MODE OPERATOIRE ....................................................................... 5
5.1 Préparation Milieux ................................................................. 5
5.2 Contrôle de qualité des milieux ............................................... 5
5.2.1 Test de stérilité ....................................................................... 5
5.2.1.1 Interprétation et résultats .......................................................................... 5
Les milieux sont considérés comme stériles en l’absence de ................................ 5
5.2.2 Test d’efficacité ...................................................................... 6
• Technique ..................................................................................... 6
5.3 Préparation des plaques ........................................................... 6
5.4 Conditionnement ...................................................................... 6
5.5 Contrôle de qualité du produit fini .......................................... 6
5.5.1 Contrôle de stérilité ............................................................... 6
• Technique ..................................................................................... 6
5.5.2 Contrôle d’efficacité ............................................................... 7
TABLEAU DE LECTURE ................................................................................................ 7
5.6 Stockage ............................................................................................................ 7
ANNEXE 1 ............................................................................................................. 8
MILIEU UREE - TRYPTOPHANE ................................................................................ 8
USAGE ................................................................................................................................. 8
PRINICPES ........................................................................................................................ 8
COMPOSITION (Pour 1 litre d’eau distillée)....................................................... 8
PREPARATION..................................................................................................... 8
LECTURE ........................................................................................................................... 8
CONTRÔLE DE QUALITÉ ............................................................................................. 9
MILIEU DE CLARK ET LUBS ...................................................................................... 9
USAGE ................................................................................................................................. 9
PRINCIPE .............................................................................................................. 9
COMPOSITION (Pour 100 ml d’eau distillée) .................................................... 9
PREPARATION..................................................................................................... 9
LECTURE ........................................................................................................................... 9
CONTRÔLE DE QUALITÉ ............................................................................................. 9
MILIEU DE FALKOW ................................................................................................... 10
USAGE ............................................................................................................................... 10
PRINCIPE ............................................................................................................ 10
COMPOSITION (Pour 1 litre d’eau distillée) .................................................... 10
PREPARATION....................................................................................................10
LECTURE ......................................................................................................................... 10
CONTRÔLE DE QUALITÉ ........................................................................................... 10
MILIEU NITRATE ......................................................................................................... 11
Usage ..................................................................................................................... 11
Principe .................................................................................................................11
Composition (COMPOSITION POUR 100 ML) .......................................................... 11
Préparation ...........................................................................................................11
Lecture ............................................................................................................................... 11
CONTRÔLE DE QUALITÉ ........................................................................................... 11
MILIEU A L’ONPG ......................................................................................................... 12
Formule ................................................................................................................ 12
ANNEXE 5 - 6 - 7 ................................................................................................. 12
MEVAG /STAPH .............................................................................................................. 12
Mode d’emploi ...................................................................................................... 12
LES SUCRES ............................................................................................................................ 12

COFFRET D’IDENTIFICATION
DES STAPHYLOCOQUES
URBM/MON/Id.STAPH

COFFRET D’IDENTIFICATION
DES STAPHYLOCOQUES
URBM/MON/Id.Staph
5
URBM/MON/Id.Staph / Date d’application : Décembre 2013 / Version :
1.
OBJECTIF
Ce document décrit la procédure de production du
coffret d’identification des Staphylocoques par la
galerie Micro CSB.
2.
PRINICIPE
Il s’agit d’une méthode miniaturisée standardisée
permettant à partir de substrats déshydratés de
mettre en évidence des activités enzymatiques ou
d’assimilation de substrats carbonés. Il permet de
faire un diagnostic de genre ou d’espèce avec 16
tests biochimiques.
3.
MATERIEL
• balance de précision
• agitateur magnétique
• pH-mètre
• flacons en verre avec bouchon à vis de 2,50 et 100 ml
• seringues
• filtres de 0,2 μm de diamètre
• erlenmeyer
• embouts stériles
• micro pipettes
• autoclave
• boîte de pétri de 4 ou 6 cm de diamètre
• hotte à flux
laminaire
• papier emballage
• appareil de
scellage
• micro plaques
• micro pipettes de 20 μl, 200 μl
• pipette Pasteur
• embouts stériles
• étuve
• films adhésifs
• bec bunsen
• microscope optique
4.
RÉACTIFS
• Sucres : Lactose, Glucose, Mannitol, Saccharose,
Tréhalose, Glycérol, Mannose Raffinose
• Lysine décarboxylase :
LDC
• Ornithine décarboxylase :
ODC
• Arginine dihydrolase : ADC
• L-tryptophane
• Phosphate monopotassique
• NaCl
• Urée
• Alcool 95°
• Eau distillée
• Rouge de phénol à 1%
• Peptone trypsique ou polypeptane
• Pyruvate de sodium
• Phosphate dipotassique
• Fumarate disodique
• Sulfate de magnésium
• Phosphate mono-ammonique
• NaCl
• Bleu de bromothymol
• Chlorhydrate de l cystéine
• Dextrose
• Extrait de levure
• Peptone de caséine
• Peptone de viande
• Poudre ONPG
• Thiosulfate de sodium
• Sulfate d’ammonium
• Créatinine
• Potasse
• Alpha-naphtol (VP2)
• Perchlorure de fer au 1/3
• Réactifs de KOVACS.
5.
MODE OPERATOIRE
5.1 Préparation Milieux
- Milieu Urée (ANNEXE 1)
- Milieu de Clark et Lubs (ANNEXE 2)
- Milieu de Falkow (ANNEXE 3)
- Milieu Nitrate (ANNEXE 4)
- Milieu à l’ONPG (ANNEXE 5)
- MEVAG Staph (ANNEXE 6)
- Les Sucres (ANNEXE 7)
- Réactifs de révélation (ANNEXE 8)
5.2 Contrôle de qualité des milieux
5.2.1 Test de stérilité
- utiliser des tubes à hémolyse.
- prélever 2 ml de chaque milieu liquide et l’introduire
dans un tube donné.
- Pour les sucres il faut ajouter 1 ml de MEVAG Staph.
- Les tubes ont été fermés avec du coton et incubé
à l’étuve à 37°C pendant 24h.
5.2.1.1Interprétation et résultats
Les milieux sont considérés comme stériles en
l’absence de :