coffret d`identification des bacilles à gram négatif non

COFFRET D’IDENTIFICATION
DES BACILLES À GRAM NÉGATIF
NON FERMENTAIRE
URBM/MON/Id.BNF
REDACTEURS
VERIFICATEUR
Amadou DIOP
Abdoulaye DIOP
Dr Fatou Bintou GUEYE GBAYA
Amy SYLLA
Version :
Date : 26/08/2013
APPROBATEUR
Pr Cheikh Saad-Bou BOYE

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URBM/MON/Id.BNF / Date d’application : Décembre 2013 / Version :
Sommaire
1. OBJECTIF............................................................................................ 5
2. PRINICIPE ................................................................................. 5
3. MATERIEL .......................................................................................... 5
4. réactifs .......................................................................................... 5
5. MODE OPERATOIRE ....................................................................... 5
5.1. Préparation des milieux ........................................................... 5
5.2. Contrôle de qualité des milieux ...............................................6
5.3. Préparation des plaques ........................................................... 6
5.4. Conditionnement ...................................................................... 6
5.5. Contrôle de qualité du produit fini ..........................................6
5.6. Stockage .................................................................................... 8
6. ANNEXES ............................................................................................ 8

COFFRET D’IDENTIFICATION
DES BACILLES À GRAM NÉGATIF
NON FERMENTAIRE
URBM/MON/Id.BNF

COFFRET D’IDENTIFICATION DES BACILLES
À GRAM NÉGATIF NON FERMENTAIRE
URBM/MON/Id.BNF
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URBM/MON/Id.BNF / Date d’application : Décembre 2013 / Version :
1. OBJECTIF
Ce document décrit la procédure de production du
coffret d’identification des bacilles à Gram négatif
non fermentaire (BGN-NF) par la galerie Micro CSB.
2. PRINICIPE
Il s’agit d’une méthode miniaturisée standardisée
permettant à partir de substrats déshydratés de
mettre en évidence des activités enzymatiques ou
d’assimilation de substrats carbonés. Il permet de
faire un diagnostic de genre ou d’espèce avec 16
tests biochimiques.
3. MATERIEL
• balance de précision
• agitateur magnétique
• pH-mètre
• flacons en verre avec bouchon à vis de 2,50 et
100 ml
• seringues
• filtres de 0,2 μm de diamètre
• erlenmeyer
• embouts stériles
• micro pipettes
• autoclave
• boîte de pétri de 4 ou 6cm de diamètre
• hotte à flux laminaire
• papier emballage
• appareil de scellage
• micro plaques
• micro pipettes de 20 μl, 200 μl
• pipette Pasteur
• embouts stériles
• étuve
• films adhésifs
• bec bunsen
• microscope optique
4. RÉACTIFS
• Sucres : Lactose, Glucose, Mannitol, Saccharose,
Sorbitol, Rhamnose, Adonitol, Dulcitol, Inositol.
• Lysine décarboxylase : LDC
• Ornithine décarboxylase : ODC
• Arginine dihydrolase : ADC
• L-tryptophane
• Phosphate monopotassique
• Gélatine
• NaCl
• Urée
• Alcool 95°
• Eau distillée
• Rouge de phénol à 1%
• Peptone trypsique ou polypeptane
• Pyruvate de sodium
• Phosphate dipotassique
• Charbon de bois en poudre
• Fumarate disodique
• Sulfate de magnésium
• Phosphate mono-ammonique
• NaCl
• Bleu de bromothymol
• Citrate de na
• Citrate ferrique ammoniacal
• Chlorhydrate de l cystéine
• Dextrose
• Extrait de levure
• Malonate de sodium
• Peptone de caséine
• Peptone de viande
• Poudre ONPG
• Thiosulfate de sodium
• Sulfate d’ammonium
• Créatinine
• Potasse
• Alpha-naphtol (VP2)
• Perchlorure de fer au 1/3
• Réactifs de KOVACS.
5. MODE OPERATOIRE
5.1 Préparation Milieux
Les différents milieux du coffret sont les suivants :
- Milieu Urée (Annexe 1)
- Milieu Clark et Lubs (Annexe 2)
- Milieu de Falkow (Annexe 3)
- Milieu H2S/Indole (Annexe 4)
- Milieu Citrate de Simmons (Annexe 5)
- Milieu Citrate de Christensens (Annexe 6)
- Milieu Nitrate (Annexe 7)
- Milieu Malonate/Phenylalamine (Annexe 8)
- Milieu à l’ONPG (Annexe 9)
- Milieu à la Gélatine (Annexe 10)
- Milieu MEVAG (Annexe 11)
- Solutions de Sucres (Annexe 12)
- Réactifs de Révélations (Annexe 13)