COFFRET D’IDENTIFICATION
DES ENTEROBACTERIES
URBM/MON/Id. ENTERO
REDACTEURS
VERIFICATEUR
Amadou DIOP
Abdoulaye DIOP
Dr Fatou Bintou GUEYE GBAYA
Amy SYLLA
Version :
Date : 26/08/2013
APPROBATEUR
Pr Cheikh Saad-Bou BOYE
3
URBM/MON/Id.Entero / Date dapplication : Décembre 2013 / Version :
Sommaire
1.
OBJECTIF............................................................................................ 5
2. PRINICIPE ................................................................................. 5
3.
MATERIEL .......................................................................................... 5
4. REACTIFS ................................................................................... 5
5.
MODE OPERATOIRE ....................................................................... 5
5.1. Préparation des milieux ........................................................... 5
5.2. Contrôle de qualité des milieux ...............................................6
5.3. Préparation des plaques ........................................................... 6
5.4. Conditionnement ...................................................................... 6
5.5. Contrôle de qualité du produit fini ..........................................6
5.6. Stockage .................................................................................... 8
6.
ANNEXES ............................................................................................ 8
COFFRET D’IDENTIFICATION
DES ENTEROBACTERIES
URBM/MON/Id.ENTERO
COFFRET DIDENTIFICATION
DES ENTEROBACTERIES
URBM/MON/Id.ENTERO
5
URBM/MON/Id.Entero / Date dapplication : Décembre 2013 / Version :
1.
OBJECTIF
Ce document crit la procédure de production du
coffret d’identification des Entérobactéries par la
galerie Micro CSB.
2.
PRINICIPE
Il s’agit d’une méthode miniaturisée standardisée
permettant à partir de substrats déshydratés de
mettre en évidence des activités enzymatiques ou
d’assimilation de substrats carbonés. Il permet de
faire un diagnostic de genre ou d’espèce avec 16
tests biochimiques.
3.
MATERIEL
balance de précision
agitateur magnétique
pH-mètre
flacons en verre avec bouchon à vis de 2, 50 et
100 ml
seringues
filtres de 0,2 μm de diamètre
erlenmeyer
embouts stériles
micro pipettes
autoclave
boîte de pétri de 4 ou 6cm de diamètre
hotte à flux laminaire
papier emballage
appareil de scellage
micro plaques
micro pipettes de 20 μl, 200 μl
pipette Pasteur
embouts stériles
étuve
films adhésifs
bec bunsen
microscope optique
4.
ACTIFS
Sucres : Lactose, Glucose, Mannitol, Saccharose,
Sorbitol, Rhamnose, Adonitol, Dulcitol, Inositol.
Lysine décarboxylase : LDC
Ornithine carboxylase : ODC
Arginine dihydrolase : ADC
L-tryptophane
Phosphate monopotassique
Gélatine
NaCl
Urée
Alcool 95°
Eau distile
Rouge de phénol à 1%
Peptone trypsique ou polypeptane
Pyruvate de sodium
Phosphate dipotassique
Charbon de bois en poudre
Fumarate disodique
Sulfate de magnésium
Phosphate mono-ammonique
NaCl
Bleu de bromothymol
Citrate de na
Citrate ferrique ammoniacal
Chlorhydrate de l cystéine
Dextrose
Extrait de levure
Malonate de sodium
Peptone de caine
Peptone de viande
Poudre ONPG
Thiosulfate de sodium
Sulfate d’ammonium
Créatinine
Potasse
Alpha-naphtol (VP2)
Perchlorure de fer au 1/3
Réactifs de KOVACS.
5.
MODE OPERATOIRE
5.1
Préparation Milieux
Les différents milieux du coffret sont les suivants :
- Milieu Urée (Annexe 1)
- Milieu Clark et Lubs (Annexe 2)
- Milieu de Falkow (Annexe 3)
- Milieu H2S/Indole (Annexe 4)
- Milieu Citrate de Simmons (Annexe 5)
- Milieu Citrate de Christensens (Annexe 6)
- Milieu Malonate/Phenylalamine (Annexe 7)
- Milieu à l’ONPG (Annexe 8)
- Milieu à la Gélatine (Annexe 9)
- Milieu MEVAG (Annexe 10)
- Solutions de Sucres (Annexe 11)
- Réactifs de Révélations (Annexe 12)
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