Examen BIO232 L2 Sujet de Génétique microbienne (12 points

Examen BIO232 L2
Sujet de Génétique microbienne (12 points) proposé par
Dominique Schneider
Janvier 2016
Vous répondrez aux différentes questions directement sur le sujet, dans les cadres
prévus à cet effet. Soyez brefs et concis.
Exercice 1 (3,5 points):
La souche MA30 d’Escherichia coli possède le génotype suivant : metA malT thr bio
∆manXYZ glpK avec :
metA : gène impliqué dans la biosynthèse de méthionine,
malT : gène impliqué dans la dégradation de maltose,
thr : gène impliqué dans la biosynthèse de thréonine,
bio : gène impliqué dans la biosynthèse de biotine,
manXYZ : gènes impliqués dans la dégradation de mannose,
glpK : gène impliqué dans le transport du glycérol.
1/ Indiquez un milieu minimum permettant la croissance de MA30 (0,5 point).
2/ Pour chacun des 6 caractères génotypiques pris indépendamment, indiquez les milieux de
culture à utiliser pour confirmer le phénotype conféré par le génotype de MA30 et indiquer si
MA30 pousse ou non sur chacun des milieux (0,5 point par caractère, 3 points au total).
Exercice 2 (6 points):
Pour connaître la position des gènes sur le chromosome d'Escherichia coli, une expérience de
conjugaison interrompue a été réalisée, avec une souche F- dont le phénotype est le suivant :
F- : Gal- His- Trp- Phe- Lys- StrR Lac- Cys-.
1/ Quel est le phénotype de la souche Hfr qui doit être utilisée ? Pourquoi ? (0,5 point)
2/ Les résultats de la conjugaison sont obtenus en prélevant des échantillons toutes les
minutes et en les étalant sur les milieux sélectifs suivants :
A : milieu minimum+glucose+tryptophane+phénylalanine+lysine+cystéine+streptomycine.
B : milieu minimum+glucose+tryptophane+phénylalanine+histidine+cystéine+streptomycine.
C:
milieu
minimum+galactose+tryptophane+phénylalanine+lysine+histidine+cystéine+
streptomycine.
D : milieu minimum+glucose+histidine+phénylalanine+lysine+cystéine+streptomycine.
E : milieu minimum+glucose+tryptophane+histidine+lysine+cystéine+streptomycine.
F : milieu minimum+lactose+histidine+tryptophane+phénylalanine+lysine+cystéine+
streptomycine.
G : milieu minimum+glucose+tryptophane+phénylalanine+lysine+histidine+streptomycine.
Des colonies recombinantes sont observées sur le milieu F au bout de 10 min, sur le milieu C
au bout de 18 min, sur D au bout de 25 min, sur A de 36 min, sur E de 48 min, sur G de 68
min et sur B de 55 min.
Quel(s) recombinant(s) chaque milieu permet-il de sélectionner (1,75 points) ?
Dessiner une carte avec la position des gènes sur le chromosome (0,25 point).
3/ Quelle expérience feriez-vous pour calculer les distances génétiques entre les trois gènes
gal, trp et his ? (1 point)
Donner le protocole expérimental en précisant les étapes, les milieux de culture utilisés et les
recombinants sélectionnés. (2,5 points)
Exercice 3 (2,5 points):
Une culture d'Escherichia coli, sensible à la streptomycine, est diluée jusqu’à un facteur 10-7
dont 0,1 mL est alors étalé sur un milieu LB. Après incubation d’une nuit à 37°C, 10 colonies
sont comptées sur la boîte.
A partir de la culture initiale non diluée, 0,1 mL est étalé sur un milieu LB additionné d'un
antibiotique, la streptomycine. Après incubation d’une nuit à 37°C, 4 colonies sont comptées
sur la boîte.
1/ Que sont ces colonies ? (0,5 point)
2/ Quelle est leur fréquence d’apparition ? (1 point)
3/ Quelle est la différence entre une fréquence et un taux et que faut-il connaître pour calculer
le taux d’apparition de ces colonies ? (1 point)