macrophage et LT4 ( PDF

Transmission d’information entre un
macrophage et un lymphocyte T4
Etude de la phosphorylation des
protéines dans les T4.
Introduction
• Lorsque des cellules immunitaires
rencontrent un corps étranger, celles-ci
établissent une succession de réactions afin
de défendre l’organisme. Il existe différentes
cellules immunitaires :
Lymphocytes B
Lymphocytes T
Macrophages
Réponse du système immunitaire
face à un corps étranger
Protocole de stimulation des
lymphocytes T4
Incubation
à 37°C (5min)
- Centrifugation des tubes pour isoler les cellules.
- Prélèvement du surnageant des tubes.
- Ajout du tampon de lyse afin de casser les membranes.
Puis centrifugation pour récupérer les protéines dans le
surnageant.
- Incubation avec tampon de charge (pour charger
négativement et dénaturer les protéines) à 95°C
pendant 5 minutes.
- Parallèlement, fabrication des gels pour la migration.
Après l’incubation, échantillons placés dans ce gel.
Stacking gel
Running gel
Résultats de la migration
-Western blot : transfert des protéines, après
électrophorèse, sur une membrane de nitrocellulose.
-On imbibe la membrane dans une solution de rouge de
ponceau, afin de colorer les protéines et vérifier si le
transfert a bien marché.
-Saturation de la membrane par une solution saline tamponnée avec
un détergent et de la BSA.
-Incubation des protéines avec les anticorps spécifiques au groupe
phosphore.
-Trois lavages avec une solution de tampon salin et un détergent.
-Mise en contact avec la solution de révélation afin de révéler la
phosphorylation des protéines.
- Résultat de l’impression : On remarque qu’il y a plus de
phosphorylations dans l’expérience avec le témoin positif, au
niveau des grandes protéines, que dans celles du témoin négatif.
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- En revanche avec l’anticorps CD3 ce sont les petites protéines
qui sont phosphorylées.
- Enfin il n’apparaît pas de phosphorylation avec l’anticorps CD4.
Conclusion
• Grâce à cette expérience, nous avons pu observer que :
• -La phosphorylation s’appliquait à différentes protéines
suivant les stimulations opérées. De fait, pour le T+ la
phosphorylation s’applique sur les grandes protéines.
Néanmoins, pour les aCD3 la phosphorylation s’exerce sur
les petites protéines. La réaction est donc spécifique au
type d’anticorps. Il existe différents degrés de
phosphorylation : pour les aCD3, elle est moins intense que
le T+.
• Pour les aCD4, on remarque que sur le film il n’y a pas eu
d’impression, on a formé deux hypothèses :
• -Soit la stimulation a échoué.
• -Soit les aCD4 ne transmettent pas de message par
phosphorylation, mais utilisent un autre procédé.
Animation : Thetiot Johan
Production : Boisnier Jimmy
Rédacteur en chef : Taktak
Mélanie
Scénariste s: Giraud Flavie et
Martinez Florianne
Laborantin : Sanesti-Sanchez
Sylvain
Sponsor : Olivero Virgil
Photographe : Dupaquis
Laetitia
Remerciements spécial à :
Francesca