Bouillon d`enrichissement pour les entérobactéries (EE

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Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
Bouillon d’enrichissement pour les entérobactéries
(EE selon MOSSEL)
DOMAINE D'UTILISATION
Le bouillon EE proposé par Mossel est un milieu d'enrichissement sélectif pour la recherche des
Enterobacteriaceae dans les produits pharmaceutiques et les produits alimentaires.
HISTORIQUE
A l'origine, la formule du milieu a été développée par Mossel, Visser et Cornelissen en 1963. Le
glucose favorise la culture des Enterobacteriaceae et notamment des Shigella et des Salmonella
aussi bien lactose-négatifs que lactose-positifs. La technique d'enrichissement en milieu liquide,
qui met en évidence une croissance bactérienne plutôt qu'une production de gaz, permet de tenir
compte des entérobactéries qui ne produiraient pas systématiquement de gaz sur d'autres milieux
sélectifs liquides.
PRINCIPES
- La présence simultanée de bile de bœuf et de vert brillant provoque l'inhibition de la presque
totalité des microorganismes à Gram positif et des bactéries à Gram négatif autres que les
coliformes.
- La peptone pancréatique de gélatine et le glucose constituent respectivement la source azotée
et la source énergétique du développement des Enterobacteriaceae.
- Les phosphates permettent de tamponner le milieu de façon à augmenter sa capacité de
récupération.
PREPARATION
- Mettre en solution 43,5 g de milieu déshydraté (BK127) dans 1 litre d'eau distillée ou
déminéralisée.
- Agiter lentement jusqu'à dissolution complète.
- Répartir en tubes ou en flacons, suivant l’application envisagée.
- Stériliser à l'autoclave à 121°C pendant 15 minutes.

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MODE D'EMPLOI
- Refroidir le milieu jusqu'à 25°C.
- Transférer l’inoculum dans un tube ou dans un flacon de ce bouillon d'enrichissement, à partir
d'un milieu de préenrichissement tel que : eau peptonée tamponnée (BM010, BM057, BK018,
BK131) ou bouillon nutritif lactosé (BK082).
- Incuber pendant 18 à 24 heures à 37°C.
- Effectuer un isolement sur un milieu sélectif tel que la gélose VRBG (BK011, BM075), au
moyen d'une anse bouclée.
- A partir des colonies caractéristiques obtenues, faire les essais de confirmation biochimique,
après purification des cultures sur gélose nutritive à 2% (BK185, BM118).
FORMULE - TYPE
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Peptone pancréatique de gélatine...............................................10,00 g
- Bile de boeuf bactériologique ......................................................20,00 g
- Glucose..........................................................................................5,00 g
- Phosphate disodique.....................................................................6,45 g
- Phosphate monopotassique..........................................................2,00 g
- Vert brillant..................................................................................15,0 mg
pH du milieu prêt-à-l'emploi à 25°C : 7,2 ± 0,2.
CONTRÔLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre beige à verdâtre, fluide et homogène.
- Milieu préparé : solution verte, limpide.
- Réponse culturale typique après 24 heures d'incubation à 37°C, puis subculture sur gélose
VRBG :
Microorganismes Croissance sur
gélose VRBG Caractéristiques
Escherichia coli ATCC® 25922
+ Enterococcus faecalis ATCC 33186
Salmonella Typhimurium ATCC 14028
+ Enterococcus faecalis ATCC 29212
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Staphylococcus aureus ATCC 25923
≥ 10 colonies
≥ 10 colonies
inhibée, score 0
inhibée, score 0
colonies rouge violacé,
entourées d'un halo violet
colonies rose violacé

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STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu déshydraté : 2-30°C.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu préparé en tubes : 3 mois à 2-8°C, à l’abri de la lumière (à titre indicatif).
PRESENTATION Code
Milieu déshydraté :
- Flacon de 500 g BK127HA
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Mossel, D.A.A., Visser, M., and Cornelissen, A.M.R. 1963. The Examination of Foods for Enterobacteriaceae using a
Test of the type Generally Adopted for the Detection of Salmonellae. Jour. of Appl. Bact., 24: 444-452.
Pharmacopée européenne 4.7. § 2.6.13. Contrôle microbiologique des produits non stériles (Recherche de
microorganismes spécifiés). Solution et milieux de culture recommandés, 4599-4602.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
NF ISO 21528-1 (V 08-039-1). Décembre 2004. Microbiologie des aliments. Méthodes horizontales pour la recherche et
le dénombrement des Enterobacteriaceae. Partie 1 : Recherche et dénombrement à l’aide de la technique NPP avec
préenrichissement.
Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-02-10.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK127/F/2001-06 : 4.