Bouillon d’enrichissement pour les entérobactéries (EE selon MOSSEL) DOMAINE D'UTILISATION Le bouillon EE proposé par Mossel est un milieu d'enrichissement sélectif pour la recherche des Enterobacteriaceae dans les produits pharmaceutiques et les produits alimentaires. HISTORIQUE A l'origine, la formule du milieu a été développée par Mossel, Visser et Cornelissen en 1963. Le glucose favorise la culture des Enterobacteriaceae et notamment des Shigella et des Salmonella aussi bien lactose-négatifs que lactose-positifs. La technique d'enrichissement en milieu liquide, qui met en évidence une croissance bactérienne plutôt qu'une production de gaz, permet de tenir compte des entérobactéries qui ne produiraient pas systématiquement de gaz sur d'autres milieux sélectifs liquides. PRINCIPES - La présence simultanée de bile de bœuf et de vert brillant provoque l'inhibition de la presque totalité des microorganismes à Gram positif et des bactéries à Gram négatif autres que les coliformes. - La peptone pancréatique de gélatine et le glucose constituent respectivement la source azotée et la source énergétique du développement des Enterobacteriaceae. - Les phosphates permettent de tamponner le milieu de façon à augmenter sa capacité de récupération. PREPARATION - Mettre en solution 43,5 g de milieu déshydraté (BK127) dans 1 litre d'eau distillée ou déminéralisée. - Agiter lentement jusqu'à dissolution complète. - Répartir en tubes ou en flacons, suivant l’application envisagée. - Stériliser à l'autoclave à 121°C pendant 15 minutes. 1/3 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr MODE D'EMPLOI - Refroidir le milieu jusqu'à 25°C. - Transférer l’inoculum dans un tube ou dans un flacon de ce bouillon d'enrichissement, à partir d'un milieu de préenrichissement tel que : eau peptonée tamponnée (BM010, BM057, BK018, BK131) ou bouillon nutritif lactosé (BK082). - Incuber pendant 18 à 24 heures à 37°C. - Effectuer un isolement sur un milieu sélectif tel que la gélose VRBG (BK011, BM075), au moyen d'une anse bouclée. - A partir des colonies caractéristiques obtenues, faire les essais de confirmation biochimique, après purification des cultures sur gélose nutritive à 2% (BK185, BM118). FORMULE - TYPE (pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales) Pour 1 litre de milieu : - Peptone pancréatique de gélatine ...............................................10,00 g - Bile de boeuf bactériologique ......................................................20,00 g - Glucose..........................................................................................5,00 g - Phosphate disodique .....................................................................6,45 g - Phosphate monopotassique ..........................................................2,00 g - Vert brillant.................................................................................. 15,0 mg pH du milieu prêt-à-l'emploi à 25°C : 7,2 ± 0,2. CONTRÔLE QUALITE - Milieu déshydraté : poudre beige à verdâtre, fluide et homogène. - Milieu préparé : solution verte, limpide. - Réponse culturale typique après 24 heures d'incubation à 37°C, puis subculture sur gélose VRBG : Croissance sur gélose VRBG Microorganismes Caractéristiques Escherichia coli + Enterococcus faecalis ATCC® 25922 ATCC 33186 ≥ 10 colonies colonies rouge violacé, entourées d'un halo violet Salmonella Typhimurium + Enterococcus faecalis ATCC 14028 ATCC 29212 ≥ 10 colonies colonies rose violacé Enterococcus faecalis Staphylococcus aureus ATCC 29212 ATCC 25923 inhibée, score 0 inhibée, score 0 2/3 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr STOCKAGE / CONSERVATION Milieu déshydraté : 2-30°C. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. - Milieu préparé en tubes : 3 mois à 2-8°C, à l’abri de la lumière (à titre indicatif). PRESENTATION Code Milieu déshydraté : - Flacon de 500 g BK127HA REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Mossel, D.A.A., Visser, M., and Cornelissen, A.M.R. 1963. The Examination of Foods for Enterobacteriaceae using a Test of the type Generally Adopted for the Detection of Salmonellae. Jour. of Appl. Bact., 24: 444-452. Pharmacopée européenne 4.7. § 2.6.13. Contrôle microbiologique des produits non stériles (Recherche de microorganismes spécifiés). Solution et milieux de culture recommandés, 4599-4602. XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture. NF ISO 21528-1 (V 08-039-1). Décembre 2004. Microbiologie des aliments. Méthodes horizontales pour la recherche et le dénombrement des Enterobacteriaceae. Partie 1 : Recherche et dénombrement à l’aide de la technique NPP avec préenrichissement. Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document. Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-02-10. Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis. Code document : BK127/F/2001-06 : 4. 3/3 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr