Gélose KF (base)

Gélose KF (base)
DOMAINE D’UTILISATION
La gélose KF (Kenner Fecal) est un milieu sélectif utilisé pour l'isolement et le dénombrement
des entérocoques dans les produits alimentaires par la méthode classique de numération en
boîtes de Petri.
HISTORIQUE
La gélose KF, utilisée par Kenner et al. en 1960 pour le dénombrement des streptocoques fécaux
dans les eaux, a montré un excellent pouvoir récupérateur comparativement à d'autres milieux
antérieurement utilisés. Les auteurs ont observé que le milieu permettait une excellente
caractérisation des entérocoques ainsi que des microorganismes présentant des caractéristiques
biochimiques et antigéniques proches : Streptococcus bovis, Streptococcus equinus.
PRINCIPES
- La forte nutritivité du milieu est due à la forte proportion de polypeptone, d'extrait de levure et
de glucides.
- Le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique.
- Le lactose et le maltose sont des sources d'énergie pour les microorganismes susceptibles de
les utiliser.
- L'acidification du milieu est révélée par le virage au jaune du pourpre de bromocrésol.
- L'azide de sodium permet d'inhiber la croissance des microorganismes contaminants à Gram
négatif.
- Le TTC ajouté extemporanément est un indicateur de la croissance bactérienne. Il est réduit
en un formazan insoluble à l'intérieur de la cellule. Cette réaction se manifeste par l'apparition
de colonies de couleur rouge à marron.
PREPARATION
- Mettre en suspension 68,4 g de milieu de base déshydraté (BK132) dans 1 litre d’eau distillée
ou déminéralisée.
- Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps
nécessaire à sa dissolution.
- Maintenir l'ébullition pendant 5 minutes, sans dépasser cette durée de chauffage.
- Ne pas autoclaver.
- Répartir stérilement à raison de 100 mL par flacon stérile.
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Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
MODE D’EMPLOI
Refroidir et maintenir le milieu à 44-47°C.
Ajouter stérilement 1 mL de supplément TTC reconstitué (BS027) par flacon.
Homogénéiser parfaitement.
Couler en boîtes de Petri stériles.
Laisser solidifier sur une surface froide.
Transférer 0,1 mL du produit à analyser et de ses dilutions décimales successives dans les
boîtes.
- Etaler l’inoculum en surface à l’aide d’un étaleur stérile.
- Incuber à (43 ± 1)°C pendant 48 heures.
-
LECTURE
Les colonies présentant une coloration rouge, marron ou rose entourées d'un halo jaune doivent
être considérées comme caractéristiques.
FORMULE - TYPE du milieu de base (sans TTC)
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Polypeptone...................................................................................10,0 g
- Extrait autolytique de levure ..........................................................10,0 g
- Maltose ..........................................................................................20,0 g
- Lactose ............................................................................................1,0 g
- Chlorure de sodium .........................................................................5,0 g
- Glycérophosphate de sodium ........................................................10,0 g
- Azide de sodium ..............................................................................0,4 g
- Pourpre de bromocrésol ............................................................. 15,0 mg
- Agar agar bactériologique..............................................................12,0 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,2 ± 0,2.
CONTRÔLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre blanchâtre, fluide et homogène.
- Milieu préparé (complet) : gélose bleu violacé.
- Réponse culturale typique après 48 heures d’incubation à 43°C :
Microorganismes
Croissance
(Rapport de productivité : PR)
Enterococcus faecalis
ATCC® 29212
PR ≥ 70%
Enterococcus faecium
ATCC 19434
PR ≥ 70%
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
ATCC 25922
ATCC 25923
inhibée, score 0
inhibée, score 0
Caractéristiques
colonies roses à rouges,
entourées d'un halo jaune
colonies roses à rouges,
entourées d'un halo jaune
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STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu de base déshydraté (sans TTC) : 2-20°C.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu complet préparé en boîtes, avec supplément : 8 jours à 2-8°C (à titre indicatif).
Supplément TTC 50 mg :
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
PRESENTATION
Code
Milieu déshydraté :
- Flacon de 500 g
BK132HA
Supplément TTC 50 mg :
- Coffret de 10 flacons
BS02708
SUPPORT PHOTO
Référence produit : BK132HA + BS02708
Utilisation : L'isolement et le dénombrement des entérocoques dans les produits alimentaires.
Enterococcus faecalis (ensemencement dans la masse)
Gélose KF
Réf : BK132HA + BS02708
Incubation : 48 heures / 43°C
Caractéristiques : colonies rouges à marron, entourées d’un halo jaune.
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REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Kenner, B.A., Clark, H.F., and Kabler, P.W. 1961. Fecal Streptococci. I. Cultivation and Enumeration of Streptococci in
Surface Waters. Appl. Microb., 9: 15-20.
MacFaddin, J.F. 1985. Media for Isolation-Cultivation-Maintenance of Medical Bacteria. Vol 1. Williams and Wilkins,
Baltimore, 395-398.
FIL-IDF 149A. Juillet 1997. Levains lactiques de cultures de bactéries lactiques. Norme de composition.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-02-10.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK132/F/2003-01 : 6.
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