2.2.3. Compte-rendu

BTS BIOANALYSES ET CONTROLES
1e année - TP n°1
AFBB
TECHNIQUES DE MICROBIOLOGIE
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BREVET DE TECHNICIEN SUPERIEUR
BIOANALYSES ET CONTROLES
Techniques de microbiologie
Observation et culture des micro-organismes (2e jour)
Effectuer au préalable les lectures des ensemencements effectués la veille.
1. Observation de l’état physiologique des levures
A partir du bouillon ensemencé la veille avec les levures, réaliser un état frais. Comparer l’aspect des
cellules de levures avec celui observé la veille à partir des levures lyophilisées.
2. Etude des bactéries présentes sur le milieu Trypticase-Soja
2.1. Réalisation de suspensions bactériennes pures
But : préparer des suspensions bactériennes contenant une seule souche bactérienne à partir d’un
isolement contenant plusieurs souches.
Mode opératoire :
Sur l’isolement du bouillon « B », deux types de colonies sont présents.
Préparer deux tubes à hémolyse contenant environ 1 mL d’eau physiologique.
Introduire une seule colonie dans le premier tube.
Introduire une seconde colonie (d’aspect différent de la première) dans le second tube.
Pour chaque souche bactérienne étudiée, réaliser un frottis coloré (Gram).
Observer à l’objectif x100 à immersion.
Compte-rendu :
Faire un tableau récapitulatif des descriptions macroscopiques et microscopiques.
Décrire les micro-organismes observés (Cf. fiche technique « examens microscopiques »).

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1e année - TP n°1
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TECHNIQUES DE MICROBIOLOGIE
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2.2. Test enzymatique d’orientation : catalase ou oxydase
2.2.1. Notions théoriques
Catalase et oxydase sont des enzymes respiratoires recherchées dans le but d’orienter le diagnostic
bactériologique :
- la catalase est le test d’orientation habituellement réalisé pour les bactéries Gram positives ;
- l’oxydase est le test d’orientation habituellement réalisé pour les bactéries Gram négatives.
2.2.2. Manipulations (Cf. fiche « métabolisme énergétique »)
En fonction de leur affinité tinctoriale (« Gram + » ou « Gram - »), à l’aide de la fiche « tests
enzymatiques d’orientation », rechercher la présence d’une catalase ou d’une oxydase chez les souches
bactériennes étudiées, directement à partir d’une colonie isolée (et non à partir de la suspension).
2.2.3. Compte-rendu
Décrire les réactions observées et conclure pour chacune des deux souches.