Prise en charge des prélèvements de gorge pour suspicion de diphtérie au laboratoire National de Reference pour la diphtérie et la coqueluche

Prise en charge des prélèvements de gorge pour suspicion de diphtérie au
laboratoire Naonal de Reference pour la diphtérie et la coqueluche
1- Objecf
L’objecf est de décrire la Prise en charge des prélèvements de gorge pour suspicion de diphtérie
au laboratoire Naonal de Reference pour la diphtérie et la coqueluche dans le but d’apporter
une réponse diagnosc et thérapeuque.
2- Matériel
- Prélèvement de gorge eectué par écouvillonnage transporté dans un milieu de culture
ou de l’eau physiologique (voir procédure : CERMES LNRCQ POS 01).
- Gélose Tinsdal ou gélose ANC addionnée de 5% de sang de mouton.
- Disques d’anbioque (voir CASFM 2022 et 2013)
- Oxydase, catalase, disque fosfomycine
3- Principe
La conrmaon bactériologique de la diphtérie est basée sur l’isolement du Corynebacterium
diphtheriae toxxinigene par la culture et ou la détecon des gènes du germe et de la toxine par
PCR du l’échanllon primaire.
4- Mode opératoire
1er jour
4.1- Récepon des prélèvements
4.2- Mise en culture
- Ensemencement sur Gélose Tinsdal ou gélose ANC addionnée de 5% de sang de
mouton.
- Incubaon à 37°C +/- 1 pendant 24h
4.3- PCR de l’échanllon primaire
- Faire une suspension en eau physiologique du prélèvement inial.
- Réaliser une extracon de l’ADN sur la suspension
- Passer l’extrait d’ADN à la PCR triplex pour la détecon des gènes diph , tox et CUD.
2ème jour
4.4- Étude des colonies sur les cultures de la veille
- Sur Tinsdal colonies noires entourées d'un halo brunâtre bien visible
- Sur GS + ANC colonies blanche de type R sans relief.

4.5- Gram de contrôle sur les colonies suspectes
La morphologie à la coloraon de Gram révèle des bacilles à Gram posif irréguliers à extrémités
renées et disposés en palissades et en « leres chinoises »
4.6- Oxydase et catalase
Oxydase négave
Catalase posive
5. Api Coryné
6. Anbiogramme et test a la fosfomycine
7. PCR sur la colonie isolée
8. 3ème jour
9. Lecture Api Coryné
10. Lecture Anbiogramme et test a la fosfomycine
11. Rendu des résultats