Prise en charge des prélèvements de gorge pour suspicion de diphtérie au laboratoire National de Reference pour la diphtérie et la coqueluche

Prise en charge des prélèvements de gorge pour suspicion de diphtérie au
laboratoire National de Reference pour la diphtérie et la coqueluche
1- Objectif
L’objectif est de décrire la Prise en charge des prélèvements de gorge pour suspicion de diphtérie
au laboratoire National de Reference pour la diphtérie et la coqueluche dans le but d’apporter
une réponse diagnostic et thérapeutique.
2- Matériel
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Prélèvement de gorge effectué par écouvillonnage transporté dans un milieu de culture
ou de l’eau physiologique (voir procédure : CERMES LNRCQ POS 01).
Gélose Tinsdal ou gélose ANC additionnée de 5% de sang de mouton.
Disques d’antibiotique (voir CASFM 2022 et 2013)
Oxydase, catalase, disque fosfomycine
3- Principe
La confirmation bactériologique de la diphtérie est basée sur l’isolement du Corynebacterium
diphtheriae toxxinigene par la culture et ou la détection des gènes du germe et de la toxine par
PCR du l’échantillon primaire.
4- Mode opératoire
1er jour
4.1- Réception des prélèvements
4.2- Mise en culture
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Ensemencement sur Gélose Tinsdal ou gélose ANC additionnée de 5% de sang de
mouton.
Incubation à 37°C +/- 1 pendant 24h
4.3- PCR de l’échantillon primaire
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Faire une suspension en eau physiologique du prélèvement initial.
Réaliser une extraction de l’ADN sur la suspension
Passer l’extrait d’ADN à la PCR triplex pour la détection des gènes diph , tox et CUD.
2ème jour
4.4- Étude des colonies sur les cultures de la veille
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Sur Tinsdal colonies noires entourées d'un halo brunâtre bien visible
Sur GS + ANC colonies blanche de type R sans relief.
4.5- Gram de contrôle sur les colonies suspectes
La morphologie à la coloration de Gram révèle des bacilles à Gram positif irréguliers à extrémités
renflées et disposés en palissades et en « lettres chinoises »
4.6- Oxydase et catalase
Oxydase négative
Catalase positive
5.
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Api Coryné
Antibiogramme et test a la fosfomycine
PCR sur la colonie isolée
3ème jour
Lecture Api Coryné
Lecture Antibiogramme et test a la fosfomycine
Rendu des résultats