Diphtérie : Prise en charge des prélèvements de gorge au laboratoire

Prise en charge des prélèvements de gorge pour suspicion de diphtérie au
laboratoire Naonal de Reference pour la diphtérie et la coqueluche
1- Objecf
L’objecf est de décrire la Prise en charge des prélèvements de gorge pour suspicion de diphtérie
au laboratoire Naonal de Reference pour la diphtérie et la coqueluche dans le but d’apporter
une réponse diagnosc et thérapeuque.
2- Matériel
- Prélèvement de gorge eectué par écouvillonnage transporté dans un milieu de culture
ou de l’eau physiologique (voir procédure : CERMES LNRCQ POS 01).
- Gélose Tinsdal ou gélose ANC addionnée de 5% de sang de mouton.
- Disques d’anbioque (voir CASFM 2022 et 2013)
- Oxydase, catalase, disque fosfomycine
3- Principe
La conrmaon bactériologique de la diphtérie est basée sur l’isolement du Corynebacterium
diphtheriae toxxinigene par la culture et ou la détecon des gènes du germe et de la toxine par
PCR du l’échanllon primaire.
4- Mode opératoire
1er jour
4.1- Récepon des prélèvements
4.2- Mise en culture
- Ensemencement sur Gélose Tinsdal ou gélose ANC addionnée de 5% de sang de
mouton.
- Incubaon à 37°C +/- 1 pendant 24h
4.3- PCR de l’échanllon primaire
- Faire une suspension en eau physiologique du prélèvement inial.
- Réaliser une extracon de l’ADN sur la suspension
- Passer l’extrait d’ADN à la PCR triplex pour la détecon des gènes diph , tox et CUD.
2ème jour
4.4- Étude des colonies sur les cultures de la veille
- Sur Tinsdal colonies noires entourées d'un halo brunâtre bien visible
- Sur GS + ANC colonies blanche de type R sans relief.

4.5- Gram de contrôle sur les colonies suspectes
La morphologie à la coloraon de Gram révèle des bacilles à Gram posif irréguliers à extrémités
renées et disposés en palissades et en « leres chinoises »
4.6- Oxydase et catalase
Oxydase négave
Catalase posive
5. Api Coryné
6. Anbiogramme et test a la fosfomycine
7. PCR sur la colonie isolée
8. 3ème jour
9. Lecture Api Coryné
10. Lecture Anbiogramme et test a la fosfomycine
11. Rendu des résultats