Rached Hadrien Degrenne Nicolas 10 /03/2010 EC immunodep,la

Rached Hadrien
Degrenne Nicolas
10 /03/2010
EC immunodep,la cellule souche outil en therapie cellulaire
La prof a souligné de bien connaitre les parties GVH, GVL, les différents types de greffon et les indications. Bon
courage
La cellule souche, outil en thérapie
cellulaire
I-Thérapie cellulaire et cellules souches
A-Définition
-Nouvelle approche thérapeutique en expention
-Administration à un patient d’une population cellulaire (préparation cellulaire)
présentant des caractéristiques définies, afin de corriger une pathologie
-Finalité : corriger le tissu déficient ou une fonction biologique
-Utilisation de nombreux type cellulaire : les cellules hématopoïétiques, cellules
du foie, cellules de la peau…
-Les procédés de préparation cellulaires peuvent comprendre une sélection, une
culture, une amplification voir une activation des cellules
-Elle nécessite la réalisation d’un control de qualité du produit cellulaire avant
l’injection au patient
Généralités :
 Des cellules souches capables d’assurer l’homéostasie cellulaire sont
présentes dans les tissus à l’âge adulte
 Les cellules souches hématopoeitique à l’origine des cellules sanguines
sont connues depuis plusieurs décennies et sont utilisées de manière
courante en thérapie cellulaire
Définition : Cellule indifférenciées douées de la capacité d’auto-renouvellement de de

différenciation
II- Greffe de cellules souches hématopoïétiques
A- Généralité
Principe :
-Administrer à un patient atteint de néoplasie un traitement lourd
chimio/radiothérapique à visé de destruction tumorale sans se soucier de sa toxicité
hématologique qui sera contre balancé pas la greffe de CSH
-Notion d’effet dose
Définitions :
-Greffe allogénique : greffon prélevé sur un donneur sain
-Greffe autologue : Greffon prélevé sur le patient lui-même
Interet important des facteurs de croissance, celui qui est actuellement utilisé est le
G-CSF (granulocyte colony stimulating factor) ayant supplanté son prédécesseur le
GM-CSF
Sources de greffon possibles :
-La moelle osseuse (MO)
-Le sang périphérique
-CSP (cellules souches périphériques circulantes
-Sang placentaire (USP : Unité de sang placentaire)
B-Indication d’allogreffe de CSH
Maladies hématologiques :
-Leucémie aigue (LAM LAL), leucémie myéloïde chronique (LMC)
-Lymphome non Hoggkiniens (NLH graves du sujet jeune)
-Aplasie médullaire
Anomalies génétiques :
-Maladie héréditaires rares affectant la MO
Déficits immunitaires congénitaux sévères
Anémie de Fanconi qui aboutira in fine a une aplasie médullaire

Beta thalassémies
schéma indication actuelle des greffes de CSH)
La réussite d’une greffe de CSH va dépendre de deux facteurs majeurs, d’une part la
compatibilité HLA qui doit être la meilleure possible (10 Ags HLA sont importants,
notamment A, B , C, DR, DQ) et de la quantité de CSH réinjectée qui doit être suffisante par
rapport au poids du patient
C – Autogreffes
Généralités :
- Ne possède pas la toxicité de l’allogreffe
- Mais ne possède pas l’effet immunothérapique de l’allogreffe (GVL)
- Interet : permettre l’effet dose (dose maximale de chimio/radiothérapie) en
reconstituant l’hématopoïèse
- Limites : présence d’une maladie résiduelle soit dans le greffon soit chez le malade
- Réinjection après un traitement lourd en général à la fin du protocole
Type de greffon
-MO
-CSP : utilisé dans la majorité des cas
Indications
-Maladies hématologiques
-Tumeurs solides chimio sensibles
1- Recueil du greffon
Il existe des progéniteurs hématopoïétiques dans le sang circulant mais en toute petite
quantité (<0,1%)
Fin des années 1970
Augmentation des progéniteurs dans le sang après chimiothérapies
Le pic est :
 comptemporain de la sortie d’applasie
 transitoire
 d’amplitude variable
Nécessité +++ de mobilisation pour pouvoir prélever des CSH dans le sang périphérique
Déroulement
-mobilisation de MO vers le sang périphérique des progéniteurs par traitement G-CSF
(autrefois GM-CSF) seul ou associé avec chimiothérapie

-Cytaphérèse : receuil de progéniteurs hématopoietiques sanguins
 abord veineux périphérique
 séance de 3 à 4 heures
 greffons 1à à 100 fois plus riche que greffon médullaire
 1, 2 ou 3 séances
 Cellules du greffon cryopréservées en DMSO 10% (agent protecteur des cellules
contre le refroidissement progressif) et stocké en azote liquide à -196°C
- Ultérieurement : conditionnement à la greffe (chimiothérapie plus ICT)
- Injection du greffon : décongélation rapide dans Bain Marie à 37°C. Transfusion
immédiate de la suspension cellulaire
Evaluation de la qualitée du greffon
-Hématopoietique :
 Numération des cellule CD34+
 Numération des CFU-GM
-Maladie résiduelle
 Recherche de cellules tumorales
2- Numération des cellule CD34
Intérêt ?
-Déterminer le moment optimal pour réaliser la cytaphérèse, numération en cytométrie des
cellules CD34 le matin sur sang total
-Déterminer la qualité hématopoiétique du greffon
Technique ?
-Les cellule CD34+ sont des évènements rares, nécessitant donc une standardisation
importante par cytométrie de flux
3-numération des CFU-GM
Culture clonogénique à court terme
-Lecture au microscope des colonies à J14
-On a réalisé des standardisation de l’examun
-Seuil : CSP>10*10^4/kg du receveur
Moelle > 4*10^4 du receveur

4- Critères de validation d’un produit de CSH
On effectue une numération des CFU-GM
Le greffon est considéré comme satisfaisant si le nombre de CFU-GM est :
10*10^4/kg pour les CSP
4*10^4/kg pour la moelle
On effectue aussi une numération des cellule CD34, le greffon étant considéré comme
satisfaisant si le nombre de cellule CD34 est supérieur à 3*10^6/kg du receveur
Notion de seuil de CD34
Seuil de receuil dans le sang chez le donneur : >10 par mm3
Seuil de réinjection : il va différé selon l’age du receveur
Pour les adulte il faut que ce seuil soit supérieur à 10*10^6 CD34 /kg selon les auteurs, les
protocoles et les pathologies
Pour les enfants il faut que ce seuil soit supérieur à 3*10^6/kg
D-La greffe allogénique
C’est la « vraie » greffe
Elle possède une action curative
Elle nécessite l’existence d’un donneur HLA identique qu’il soit familiale (30% des cas) ou
non apparenté (gestion par l’association France Greffe de Moelle)
Type de greffon
MO ou Sang périphérique prélevé à la demande ou sang placentaire stocké et congelé
Il y aura réinjection après le traitement myéloablatif (chimio/radiothérapie)
1- Définition de l’allogreffe
L’origine du greffon est un donneur sain, provenant de la MO, du sang périphérique ou du
sang de cordon
L’intérêt de l’allogreffe est l’effet dose du traitement myéloablatif et immunosupresseur
réalisé avant greffe, en cela cet intérêt est le même que celui de l’autogreffe
L’intérêt tient aussi du fait du remplacement du système hématopoïétique malade et de
l’effet immunothérapique c’est-à-dire remplacé le système immunitaire du receveur par
celui du donneur
Cet effet immunothérapique va avoir deux conséquences majeures, l’effet GVH toxique et
l’effet GVL bénéfique.
2- Modalité de l’allogreffe