Laboratoire : Bactériologie (2)

Laboratoire : Bactériologie (2)
MICROBIOLOGIE. SEMAINE 2 :
Contrôle des micro-organismes
(techniques de destruction et contrôle des micro-organismes)
Matériel
- Activité 2.1 :
- Cultures bactériennes de la semaine 1 (géloses nutritives)
- Activité 2.2 (Selon ta table)
- Désinfectants chimiques
- Alcool 70%, proviodine, Bio-clean II, Pine sol
Eau de Javel, vinaigre, peroxyde, scope, etc…
- Pipette pasteur
- Poires
- Anse de platine
- Brûleur bunsen
- Briquet
- Écouvillons stériles
- Lampe U-V + lunettes spéciales
- Distributeurs pour antibiotiques
- Plaque chauffante
- Bécher de 250 ml
- Pince à éprouvette
- Crayon gras
- Géloses nutritives en boîte de Pétri.
- Milieux de culture liquides contenant des bactéries à identifier.
- Disques d’antibiotiques :
- Ampicilline 10 g (AM).
- Bacitracine 10 u.i. (B).
- Clindamycine 2 g (CC).
- Pénicilline G 10 u.i. (P).
- Polymyxine B 300 u.i. (PB)

ACTIVITÉ 2.1:
EXAMEN DES RÉSULTATS DE LA DERNIÈRE SÉANCE
1. Placer les boîtes de Pétri devant soi et les examiner
2. Décrire en termes généraux, l’apparence des colonies isolées. Pour décrire les
colonies, indiquer la couleur et se servir du vocabulaire ci-dessous
3. Répondre au questionnaire pour guider ton analyse
CARACTÉRISTIQUES DES CULTURES BACTÉRIENNES (COLONIES)

ACTIVITÉ 2.2 :
CONTRÔLE ANTI-MICROBIEN
Nous testons ici divers moyens d’intervention physique (chaleur, rayons UV) et
chimiques (désinfectants, antibiotiques) pour lutter contre les bactéries.
Théorie
CHALEUR. La chaleur détruit physiquement la paroi et les organites bactériens en
augmentant la vitesse et l’énergie des molécules.
RAYONS UV. Les rayons UV sont des rayons puissants et très pénétrants. Ils détruisent
ou modifient les molécules chimiques bactériennes, principalement ils attaquent l’ADN
en bouleversant l’ordre des bases azotées. Des précautions spéciales doivent être prises
lorsqu’on manipule les UV (lunette, éloignement, etc.). Ce sont les mêmes UV qui émis
par le soleil peuvent entraîner la détérioration des cellules souches de la peau
(vieillissement, taches sombres ou même cancers). Lorsque nous bronzons, des cellules
spéciales de la peau appelées mélanocytes fabriquent et placent une couche de pigments
protecteurs de type mélanine au dessus des cellules souches de la peau. La diminution de
la couche d’ozone cause un accroissement des UV solaires reçus par chacun. Plusieurs
bactéries sont sensibles aux UV. Souvent les salles d’opérations sont stérilisées par
rayonnement UV.
DÉSINFECTANTS CHIMIQUES. Les désinfectants chimiques sont des molécules
chimiques que modifient ou brisent les molécules chimiques bactériennes. Le peroxyde
d’hydrogène (H2O2), par exemple, introduit de l’oxygène moléculaire qui oxyde les
molécules ; un phénomène semblable à la rouille, l’oxydation du fer. Un autre exemple se
trouve dans les solutions acides; la présence de fortes quantités d’ions H+ modifie la
structure tertiaire des enzymes bactériens. Un œuf dans le vinaigre n’est pas attaquée par
les bactéries. D’autres molécules comme le menthol qu’on trouve dans les plantes de
menthe sauvage sont utilisées pour combattre les infections bactériennes ou fongiques ;
c’est pourquoi on en ajoute dans les gommes à mâcher et les dentifrices. Certains atomes,
comme le Chlore, le fluor ou le soufre sont de bons antimicrobiens. Dans nos régions, la
résine du sapin baumier était renommée chez les amérindiens pour ses propriétés
antibactériennes et antifongiques. L’homme utilise, modifie ou invente constamment des
molécules pour contrôler les microbes. La toxicité des désinfectants est grande et ils ne
peuvent, généralement, être utilisés que de façon externe.
ANTIBIOTIQUES. Les antibiotiques sont des molécules principalement développées par
les moisissures (mycètes) pour lutter contre les bactéries. Ce sont des molécules souvent
très complexes qui agissent au niveau du blocage enzymatique bactérien et de la
réplication, de la transcription ou de la traduction du génome bactérien. La spécificité
« relative » des antibiotique permet leur utilisation en usage interne (injection) ou externe
(onguent, crème). Ce sont des armes précieuses souvent un peu sur utilisées.

Consignes :
Le professeur distribue les tâches. Toutes les équipes ne font pas les mêmes
tests et pour un même test, les produits utilisés peuvent varier selon les
équipes.
Lire les instructions au complet avant de procéder à un test.
Activités.
2.2.1 Désinfection chimique : ( 2 agents chimiques / table). Chaque personne fait un test.
Identification.
- Identifie deux boîtes de Pétri de la façon suivante : La boîte est séparée en 4 parties égales (4
quarts). Écrire dans un quart le mot « TÉMOIN », dans un autre quart « 30 SECONDES »,
puis « 2 MIN » et finalement « 8 MIN ». N’oublie pas de mettre ton numéro de table, le
NOM DU DÉSINFECTANT TESTÉ et la lettre identifiant la bactérie utilisée. Tu as deux
désinfectants à tester par équipe et les désinfectants varient selon les équipes de la classe. De
plus, les équipes utilisent diverses bactéries.
Ensemencement du quart « témoin » des Pétri avec l’agent chimique pur.
- Il est nécessaire de vérifier si l’agent chimique que tu teste n’est pas lui-même une
source de contamination. Certains agents antiseptiques sont très faibles ou inefficaces
ou détériorés et les bactéries peuvent y survivre et même s’en nourrir. Si la semaine
prochaine, tu trouve des colonies bactériennes dans ton quart témoin, c’est
évidemment très inquiétant pour l’efficacité du désinfectant testé.
- Chauffe ton fil de platine à blanc (stérilisation à la flamme). Laisse le refroidir.

- Trempe le fil de platine dans un de tes deux désinfectants à tester
- Localise le Pétri portant le nom du désinfectant à tester.
- Ouvre ce Pétri d’une main.
- De l’autre main, fais trois stries avec le fil de platine dans le quart « TÉMOIN ». Les
stries doivent déposer sur la gélose un peu de liquide désinfectant testé. C’est ton
témoin.
- Procède de la même façon pour ton autre Pétri.
Contamination de l’éprouvette de désinfectant avec ta bactérie à tester.
- Tu contamine maintenant tes désinfectants avec ta bactérie.
- A l’aide d’une poire et d’une pipette Pasteur, prélève quelques millilitres du bouillon
de ta bactérie inconnue.
- Dépose exactement 10 gouttes (env. 0.5 ml) dans l’éprouvette contenant l’agent
chimique à tester (tu choisis un des 2 tubes du support à éprouvettes de ta table).
- Note l’heure.
- Procède de la même façon pour ton autre agent chimique à tester.
Ensemencement des quarts restants des géloses avec le désinfectant contaminé.
- Tes deux désinfectants sont maintenant contaminés avec des millions de cellules
bactériennes bien vivantes. Plus ton désinfectant est efficace, plus les bactéries vont
mourir rapidement et ne pourront se multiplier si tu les dépose sur ta gélose nutritive.
Tu pourra vérifier l’efficacité de ton produit la semaine prochaine par la présence ou
l’absence de colonies. Rappelle toi aussi que ta classe teste trois (3) espèces
bactériennes différentes et que certaines espèces sont beaucoup plus résistantes que
d’autres.
- Après 30 secondes, en te servant de ton anse de platine stérilisée à la flamme, retire
une ansée du mélange (l’ansée est le petit film de liquide bactérien que tu peux
remarquer sur le cercle à l’extrémité de l’anse de platine).
- Ensemence le quart « 30 secondes » de ta gélose en y faisant 3 stries.
- Refais les mêmes opérations après « 2 minutes » et ensemence le quart « 2 minutes ».
- Refais les mêmes opérations après « 8 minutes » et ensemence le quart « 8 minutes ».
À réfléchir pour la semaine prochaine.
- Tes géloses contaminées seront mises à l’étuve. Si des bactéries ont survécues aux
désinfectants testés, ils vont pouvoir se multiplier (MITOSE) et former des colonies
visibles à l’œil nu.
- Que pense-tu d’une bactérie qui survivrais à 8 minutes dans un désinfectant. Qu’est-
ce que cela indique en ce qui concerne la bactérie ou le désinfectant ? Pourquoi est-il
important de recueillir les résultats de toute la classe ?