Centre universitaire NOUR Bachir, El-Bayadh Département des Sciences de la Nature et de la Vie Licence en Microbiologie, semestre 6 TP en module de Microbiologie industrielle Isolement de levure et de bactéries actinomycétales Chaque étudiant doit se munir d'une blouse, des étiquettes et d'un marqueur à encre indélébile (travail par trinôme) Enseignant : M. NAIMI Date : 08. 02. 2017 Durée : 1 h 30’ Code ID : MI 1 15. 02. 2017 Version : V 1.0 1. Objectif Il s’agit de faire un essai d’isolement de microorganismes tests (levures et bactéries actinomycètes) à partir des sols et/ou de produits traditionnels de la région d’El-Bayadh, pour mettre en disposition au laboratoire des souches tests qu’on peut les utilisées dans des travaux pratiques ultérieurs. 2. Matériels Incubateur réglé à 22 et à 30°C, réfrigérateur réglé à 4°C, balances, agitateur vortex ; Pissette : eau distillée, eau de javel et alcool ; Boites de Pétri, papier hygiénique, écouvillons stériles, micropipettes et embout stérile ; Eau distillée stérile, TSE, antibiotiques ; Milieux de culture : gélose Sabouraud, gélose amidon caséine ; Échantillons : sols sahariens, dattes, jus de dattes. 3. Isolement des levures 3.1 À partir du vinaigre traditionnel de dattes ou jus de dattes (l’robe) (paillasse 1 et 2) Réalisation Pour le jus de dattes, préparer des dilutions décimales de 10-2 à 10-3 ; homogénéisé au vortex pendant qq. minute ; Étaler en surface 0.1 ml de la solution-dilution sur les boites de Pétri contenant la gélose Sabouraud ; Réalisation Pour les dattes, effectuer un frottement sur une surface déterminée à l’aide d’écouvillon de coton hydrophile stérilisé (extrémité trempée dans le TSE) ; Tremper à nouveau l’écouvillon dans un tube TSE et homogénéisé au vortex pendant qq. minute ; Préparer des dilutions décimales 10-1 à 10-2 ; Étaler en surface un volume de 0.1 ml de la solution-dilution sur les boites de Pétri contenant la gélose Sabouraud ; Incuber les boites pendant 48 h à 22°C en aérobiose. 3.2 À partir du sol saharien (paillasse 3) Réalisation Pour le sol, préparer des dilutions décimales de 10-2 à 10-5 ; homogénéisé au vortex pendant qq. minute ; Étaler en surface 0.1 ml de la solution-dilution sur les boites de Pétri contenant la gélose Sabouraud ; Incuber les boites pendant 48 h à 22°C en aérobiose. 4. Isolement de bactéries actinomycétales à partir du sol saharien (paillasse 4) Réalisation Pour le sol, préparer des dilutions décimales de 10-2 à 10-5, homogénéiser au vortex pendant qq. minutes ; Additionner à la gélose amidon caséine pour une concentration finale : l’acide nalidixique à 10 μg / mL et la nystatine à 50 μg / ml ; Étaler en surface 0.1 ml de la solution-dilution sur les boites de Pétri contenant gélose amidon caséine ; Incuber les boites pendant 14j à 30 °C en aérobiose. Interprétation Numération de colonies de colonies de levure et/ou de bactéries actinomycétales et détermination de la forme de ces colonies à l’œil nu ou bien au moyen d’une loupe, selon le cas. Conserver les boites comptables au réfrigérateur réglé à 4°C. 5. Gestion des déchets Matériel non contaminé : papier, etc. dans la poubelle ; 6. Rangement des paillasses en fin de séance 7. Compte-rendu : Il est par trinôme et à rendre en fin des travaux pratiques (dernier délai est le jour d’examen). Il se fait manuscrit sur papier 21x27. N'oubliez pas de mentionner le n° de la paillasse. Année : 2016-2017 Page : 1 / 1