TPN°1 - Centre Universitaire Nour Bachir El

Centre universitaire NOUR Bachir, El-Bayadh
Département des Sciences de la Nature et de la Vie
Licence en Microbiologie, semestre 6
TP en module de Microbiologie industrielle
Isolement de levure et de bactéries actinomycétales
Chaque étudiant doit se munir d'une blouse, des étiquettes et d'un marqueur à encre indélébile (travail par trinôme)
Enseignant : M. NAIMI
Date : 08. 02. 2017
15. 02. 2017
Durée : 1 h 30’
Code ID : MI 1
Version : V 1.0
Année : 2016-2017
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1. Objectif
Il s’agit de faire un essai d’isolement de microorganismes tests (levures et bactéries actinomycètes) à partir des sols
et/ou de produits traditionnels de la région d’El-Bayadh, pour mettre en disposition au laboratoire des souches tests
qu’on peut les utilisées dans des travaux pratiques ultérieurs.
2. Matériels
 Incubateur réglé à 22 et à 30°C, réfrigérateur réglé à 4°C, balances, agitateur vortex ;
 Pissette : eau distillée, eau de javel et alcool ;
 Boites de Pétri, papier hygiénique, écouvillons stériles, micropipettes et embout stérile ;
 Eau distillée stérile, TSE, antibiotiques ;
 Milieux de culture : gélose Sabouraud, gélose amidon caséine ;
 Échantillons : sols sahariens, dattes, jus de dattes.
3. Isolement des levures
3.1 À partir du vinaigre traditionnel de dattes ou jus de dattes (l’robe) (paillasse 1 et 2)
Réalisation
 Pour le jus de dattes, préparer des dilutions décimales de 10-2 à 10-3 ; homogénéisé au vortex pendant qq. minute ;
 Étaler en surface 0.1 ml de la solution-dilution sur les boites de Pétri contenant la gélose Sabouraud ;
Réalisation
 Pour les dattes, effectuer un frottement sur une surface déterminée à l’aide d’écouvillon de coton hydrophile
stérilisé (extrémité trempée dans le TSE) ;
 Tremper à nouveau l’écouvillon dans un tube TSE et homogénéisé au vortex pendant qq. minute ;
 Préparer des dilutions décimales 10-1 à 10-2 ;
 Étaler en surface un volume de 0.1 ml de la solution-dilution sur les boites de Pétri contenant la gélose Sabouraud ;
 Incuber les boites pendant 48 h à 22°C en aérobiose.
3.2 À partir du sol saharien (paillasse 3)
Réalisation
 Pour le sol, préparer des dilutions décimales de 10-2 à 10-5 ; homogénéisé au vortex pendant qq. minute ;
 Étaler en surface 0.1 ml de la solution-dilution sur les boites de Pétri contenant la gélose Sabouraud ;
 Incuber les boites pendant 48 h à 22°C en aérobiose.
4. Isolement de bactéries actinomycétales à partir du sol saharien (paillasse 4)
Réalisation
 Pour le sol, préparer des dilutions décimales de 10-2 à 10-5, homogénéiser au vortex pendant qq. minutes ;
 Additionner à la gélose amidon caséine pour une concentration finale : l’acide nalidixique à 10 μg / mL et la nystatine
à 50 μg / ml ;
 Étaler en surface 0.1 ml de la solution-dilution sur les boites de Pétri contenant gélose amidon caséine ;
 Incuber les boites pendant 14j à 30 °C en aérobiose.
Interprétation
Numération de colonies de colonies de levure et/ou de bactéries actinomycétales et détermination de la forme de
ces colonies à l’œil nu ou bien au moyen d’une loupe, selon le cas.
Conserver les boites comptables au réfrigérateur réglé à 4°C.
5. Gestion des déchets
 Matériel non contaminé : papier, etc. dans la poubelle ;
6. Rangement des paillasses en fin de séance
7. Compte-rendu : Il est par trinôme et à rendre en fin des travaux pratiques (dernier délai est le jour d’examen). Il se
fait manuscrit sur papier 21x27. N'oubliez pas de mentionner le n° de la paillasse.