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Université Mohammed Premier
Faculté de médecine et de pharmacie
Oujda
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Laboratoire de Microbiologie
MANUEL DE TRAVAUX PRATIQUES
2ème année médecine
AU : 2015/2016
Pr.
r. Adil MALEB
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CONSIGNES IMPORTANTES
Avant la séance :
- Bien réviser les cours magistraux, notamment les chapitres indiqués dans
les rubriques « connaissances requises ».
- Ramener les supports pédagogiques : manuel des travaux pratiques, règle
millimétrée, stylos, marqueur permanent.
Au cours de la séance :
- Il est indispensable de :
o Respecter la réparation des groupes de travaux pratiques (AUCUNE
PERMUTATION DE GROUPES NE SERA AUTORISÉE).
o Porter une blouse blanche en coton, propre, manches longues et
boutonnée.
o Attacher les cheveux longs.
- Il est formellement interdit de :
o Porter de vêtements flottants (mettre foulard, écharpe ou cravate
au-dessous de la blouse).
o Utiliser son téléphone portable.
o Mâcher du chewing-gum.
o Poser ses affaires personnelles sur ou sous les paillasses.
À la fin de la séance :
- Ranger sa paillasse.
- Déposer le compte rendu sur la première paillasse.
- Se laver les mains avant de quitter le laboratoire.
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SÉANCE 1
I-
Manipulation 1 :Flore bactérienne normale
A- Objectifs d’apprentissage :
- Mettre en évidence la flore bactérienne cutanée normale.
- Montrer le rôle de l’hygiène des mains dans l’élimination de cette flore
bactérienne.
B- Connaissances requises :
- S3C1 - Interaction Homme - bactéries : Flore bactérienne normale.
- Friction
hydroalcoolique
et
lavage
des
mains :
http://www.chuoujda.ma/clin/2.pdf
C- Déroulement :
- Étape 1 :
o Tracer 3 traitsau marqueur permanent sur le verso de la boîte de
Pétri pour distinguer 3 compartiments.
o Numéroter au feutre les 3compartiments de la boîte Pétri : 1, 2 et 3.
o Ouvrir la boîte Pétri près de la flamme.
o Apposer, sans trop appuyer, les doigts de la main droite sur la surface
de la gélose ducompartiment N° 1.
o Fermer la boîte de Pétri.
- Étape 2 :
o Laver les mains au savon liquide.
o Sécher à l’aide d’un mouchoir en papier.
o Apposer, sans trop appuyer, encore une fois les doigts de la main
droite sur la surface de la gélose du compartiment N° 2.
o Fermer la boîte de Pétri.
- Étape 3 :
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o Appliquer une friction hydroalcoolique des mains.
o Laisser sécher à l’air libre.
o Apposer, sans trop appuyer, encore une fois les doigts de la
maindroite sur la surface de la gélose du compartiment N° 3.
o Fermer la boîte de Pétri.
- Étape 4 :
o Noter le numéro de groupe et le numéro de paillasse aumarqueur
permanent sur le verso de la boîte de Pétri.
o Incuber la boîte Pétri, couvercle en bas,dans l’étuve à 37 °C pendant
24 heures.
o Examiner les boîtes Pétri (séance 2)
D- Compte-rendu :Aucun
II-
Manipulation 2 :cytologie quantitative et qualitative
A- Objectifs d’apprentissage :
- Décrire la morphologie des leucocytes.
- Maitriser la technique de mise en évidence d’une réaction cellulaire au
cours d’un diagnostic cytobactériologique.
B- Connaissances requises :
- S3C1 - Interaction Homme - bactéries :Mécanismes de défense chez
l’Homme.
- S3C3 - Diagnostic bactériologique : Analyse cytologique.
C- Déroulement :
- Saisir la cellule de comptage (hématimètre) et observer les traits
microscopiques sur le verso.
- Suivre la démonstration.
D- Compte-rendu :Aucun
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SÉANCE 2
III-
Manipulation 1 :Flore bactérienne normale (suite séance 1)
- Sortir la boîte de Pétrie de l’étuve.
- Observer l’aspect de la gélose au niveau des 3 compartiments de la boîte
de Pétri.
- Décrire et dénombrer les colonies sur les 3 compartiments.
- Rédiger le compte rendu N°1 : Flore bactérienne normale.
- Remettre le compte rendu.
IV-
Manipulation 2 :examen microscopique après coloration de Gram
A- Objectifs d’apprentissage :
- Maitriser la technique de coloration de Gram.
- Décrire la morphologie des bactéries.
B- Connaissances requises :
- S1C3 - Structure bactérienne.
- S3C3 - Diagnostic bactériologique : Principe de la coloration de Gram.
C- Déroulement :
- Suivre la démonstration.
D- Compte-rendu :Aucun
V-
Manipulation 2 : Identification des bactéries
A- Objectifs d’apprentissage :
- Observer une des réactions d’identification présomptive des bactéries.
B- Connaissances requises :
- S2C1 - Physiologie bactérienne.
- S3C3 - Diagnostic bactériologique : Diagnostic bactériologique direct.
C- Déroulement :
- Mettre une goutte d’eau oxygénée sur une lame de verre.
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- Sélectionner une colonie bien distincte.
- Prélever la colonie et l’écraser dans la goutte d’eau oxygénée.
- Observer la libération ou pas de bulles de gaz.
D- Compte-rendu : Aucun
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SÉANCE 3 : antibiogramme
A- Objectifs d’apprentissage :
- Maitriser la technique de réalisation et de lecture de l’antibiogramme.
B- Connaissances requises :
- S3C3 - Diagnostic bactériologique : Antibiogramme.
C- Déroulement :
- Suivre la démonstration.
- Ouvrir la boîte de l’antibiogramme.
- Mesurer les diamètres d’inhibition autour des disques d’antibiotiques.
- Catégoriser la souche en sensible, intermédiaire ou résistant en se référant
au tableau affiché.
D- Compte-rendu :Aucun
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SÉANCE 4 : examen cytobactériologique des urines
A- Objectifs d’apprentissage :
- Maitriser la réalisation et l’interprétation d’un examen cytobactériologique
des urines.
B- Connaissances requises :
- S3C3 - Diagnostic bactériologique : Phase préanalytique en bactériologie
- S13C2 - Infections du tractus urinaire.
C- Déroulement :
- Suivre la démonstration.
D- Compte-rendu :
- Rédiger, parallèlement à la démonstration, le compte rendu N°2 : examen
cytobactériologique des urines.
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SÉANCE 5 : examen cytobactériologique du LCR
A- Objectifs d’apprentissage :
- Maitriser la réalisation et l’interprétation d’un examen cytobactériologique
du LCR.
B- Connaissances requises :
- S3C3 - Diagnostic bactériologique.
- S14C1 - Méningites et méningoencéphalites.
C- Déroulement :
- Suivre la démonstration.
D- Compte-rendu :
- Rédiger, parallèlement à la démonstration, le compte rendu N°3 : examen
cytobactériologique du LCR.
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