Thérapie Tissulaire Activité de la Banque de Tissus Greffe de cornée Greffe de membrane amniotique Dr Guilhem COUDERC Banque régionale de tissus CHRU de Montpellier Les Tissus LES ETAPES Le La La prélèvement conservation en banque greffe ACTIVITE TRES REGLEMENTEE Les tissus humains à usage thérapeutique Loi de Bioéthique (loi 2011-814 du 7 juillet 2011) Consentement du donneur Gratuité du don Interdiction de publicité Anonymat Sécurité sanitaire Réglementation Etablissements autorisés au prélèvement sur donneur décédé Dossier d’autorisation Règles de bonnes pratiques de prélèvement (arrêté 97306 du 1er avril 1997) Les tissus humains à usage thérapeutique Réglementation Banque de Tissus autorisées Dossier d’autorisation (décret 2015-509 du 6 mai 2015 simplifiant le décret 2008-968 du 16 septembre 2008) Règles de bonnes pratiques de conservation et de distribution (décision du 27 octobre 2010) Chaque tissus doit en plus obtenir une autorisation spécifique correspondant au procédé de préparation, de validation et de conditionnement LE PRELEVEMENT Les tissus utilisés à des fins thérapeutiques Donneur DCD en mort encéphalique ou à cœur arrêté: Vaisseaux Valves cardiaques Peau Os massifs et articulations Cornées Les tissus utilisés à des fins thérapeutiques Donneur vivant (résidus opératoires): Têtes fémorales et dérivés viro-inactivés Volets crâniens: traitement décompressif Membranes amniotiques Les artères et les valves Artères: Aorte thoracique, abdominale Bifurcation aorto-iliaque Artère fémorale et axe ilio-fémoro-poplité Valves cardiaques (aortiques et pulmonaires) Indications: vitales Prothèse infectée Sauvetage de membre Les greffes d’artères en 2014 40 artères pour 30 patients, 67 ans (41-93) en LR Indications: Type de greffons: 20 infections sur prothèse 10 revascularisations du MI 10 cancers, greffes hépatiques, anévrismes 9 greffons aortiques 4 bifurcations aorto-iliaques 24 axes ilio-fémoro-(poplités) 3 artères pulmonaires 540 artères greffées en 2014 en France La peau Indications vitales: grand brûlé Prévention des complications (infections, désordres hyrdo-électriques…) Protection des autogreffes Prélèvement du seul épiderme sur le dos et membres inférieurs Lambeaux prélevés au dermatome Environ 25 m2 greffés en 2014 en France Les os massifs Os massifs: Indications : sauvetage de membre Fémur entier ou extrémité supérieure ou inférieure Tibia, humérus Articulation du coude Hémi-bassin carcinologie traumatologie 275 greffes en 2014 en France Les têtes fémorales Prélèvement: Indications : Sur donneur vivant Lors de la mise en place d’une prothèse totale de hanche Reconstructions et comblements osseux Chirurgie orthopédique ou rachidienne Tissu le plus greffé Fragments osseux viro-inactivés dérivés de tête fémorale • Formes géométriques standardisées • Hémi-tête • Bloc • Coins d’ostéotomie • Fragments de tailles différentes…. • • • • Trame osseuse seule Traitement viro-inactivant Moins bonne ostéo-conduction Conservation à température ambiante Source: catalogue OST Développement La conservation Cryopréservation avec cryoprotecteur type DMSO et stockage en vapeur d’azote –180°C pendant 5 à 10 ans: Cryoconservation à –80°C pendant 2 à 5 ans : Vaisseaux et valves cardiaques Peau Os massifs et articulations Têtes fémorales Volets crâniens Os massifs Membranes amniotiques Conservation à 31°C pendant 30 j: Cornées La congélation avec cryoprotecteur 180808b 20 0 0 -20 5 10 15 20 25 30 35 40 1 à 2 degrés/mn 45 50 Température (°C) -40 -60 PROD:t (s) CUVE:t (s) -80 -100 5 degrés/mn -120 -140 -160 Tem ps (m inutes) La conservation La distribution Validation des tissus En urgence ou programmée Prescription nominative Conditionnement, transport La greffe Réception du greffon Déconditionnement et décongélation éventuelle Cinétique de décongélation d'une poche tém oin 30/07/2014 m =124g 30 20 10 0 -10 30 °C/mn -40 -50 -60 -70 -80 -90 10 °C/mn -100 -110 t (h:m n) Renvoi du tissu à la banque (élimination) Traçabilité Documents remplis et signés à renvoyer à la banque Double des documents à classer dans le dossier patient Suivi, vigilance 14:49 14:48 14:47 14:46 14:45 14:44 14:43 14:42 14:41 -150 -160 14:40 Greffe 14:38 -120 -130 -140 14:39 T°(°C) -20 -30 La greffe de cornée La cornée Coupe sagittale de l’œil, partie antérieure 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Conjonctive Cornée Iris Cristallin Corps vitré Corps ciliaire Sclérotique Cornée 1. 2. 3. 4. 5. Épithélium Membrane de Bowman Stroma Membrane de Descemet Endothélium Indications des greffes de cornées en 2013 Kératocone : 16% Décompensation endothéliale secondaire pseudophaque : 21% Séquelles Séquelles Dystrophie de Fuchs : 20% Echec de greffe : 14% de de kératites : 14% traumatisme : 3% Le prélèvement de cornée Donneur: Prélèvement: Lors d’un prélèvement d’organes et de tissus (ME) Donneur à cœur arrêté (dans les 8h, dans les 24h si réfrigération dans les 4h) Découpage de la sclère Suspension dans le milieu de conservation Restauration anatomique Contre indications Hémopathies malignes Tumeur oculaire ou du SNC Démence Sérologies positives Pathologies oculaires Délai entre prélèvement et décès Absence de prélèvement sanguin Les cornées Organoculture à 31°C pendant 30 jours au maximum 2 évaluations de l’endothélium Tests sérologiques Tests bactériologiques Travail en Zone d’Atmosphère Contrôlée (cascade de pression, renouvellement d’air filtré…) Protocole d’entrée/sortie et d’habillage Bio nettoyage spécifique et approfondi Contrôle environnemental strict Surveillance du matériel continue, locale et déportée Evaluation Evaluation Evaluation Remise en culture Critères de conformité Nombre de cellules >2000/mm2 Nombre de cellules mortes <2% Aspect de la mosaïque Absence de plis bleus Perte cellulaire < 20% Arbre décisionnel Prélèvement Sérologie et bactériologie conformes Non conformes destruction Première évaluation conforme Non conforme destruction Seconde évaluation conforme Non conforme destruction Décision de greffe Mise en déturgescence Greffe Bactériologie négative Positive destruction Causes de non conformité Cornées éliminées en France en 2014: 52 % Causes Bactériologie % 2014 6% Sérologie + ou NF 11% Evaluation 31% Autres 4% Les différents types de greffe de cornée Kératoplastie transfixiante Kératoplastie lamellaire antérieure profonde: pathologie associant altération du stroma avec endothélium et membrane Descemet normaux (kératocônes, séquelles de kératite, de brûlures…) Kératoplastie lamellaire postérieure: pathologies de l’endothélium et membrane Descemet (dystrophie de Fuchs et kératopathies bulleuses…) Kératoplastie lamellaire antérieure profonde greffe du stroma et de l’épithélium Melles GR, Remeijer L, Geerards AJ, Beekhuist WH Cornea 2000;19:427-432 Kératoplastie lamellaire postérieure greffer une lame du stroma postérieur, la membrane de Descemet et l’endothélium NRC Handelsblad. Wim Kohler/Roland Blokhuizen, September 8 2001. Résultats Retour progressif de l’AV, corticothérapie locale pendant 1 an avec décroissance progressive et antibiothérapie locale Résultats jugés entre 1 et 3 mois, mais la vision définitive n’est obtenue qu’après 1 an, astigmatisme Rejets peu fréquents (10 à 20%), généralement curables La greffe de cornée est une des greffes les plus simples et dotée d’un taux de succès important 50% AV > 5/10 Concerne plus de 4800 greffes en 2014 La greffe de membrane amniotique Membrane amniotique Epithélium: sera détruit par la congélation Membrane basale: favorise la migration, l’adhésion et la différenciation épithéliale sera le support de la recolonisation Stroma : réservoir de facteurs de croissance NGF en grande quantité, KGF (stroma limbique), HGF (stroma cornéen) avec suppression du signal TGFβ Principes et indications L’objectif est de limiter les phénomènes inflammatoires et fibrotiques pour permettre la régénération de l’épithélium à partir des cellules limbiques Indications: Ulcères chroniques Brûlures Reconstructions conjonctivales (ptérygions, symblépharons..) Maladies bulleuses Contre indications Sélection de la donneuse: Maladies infectieuses et groupes à risque Maladies de système ou dégéneratives Affections néoplasiques Au moment de la césarienne: Pathologie infectieuse génitale Fièvre maternelle supérieure à 38°C Évènement mettant en jeu l’enfant ou la mère Prélèvement Sélection clinique de la donneuse Césarienne programmée Consentement de la patiente Absence de CI médicale Dépistage des marqueurs infectieux/biologiques à J0 Absence de CI médicale au cours de la césarienne Prélèvement Conditionnement pour le transport Procédé de transformation Transport stérile Rinçage des membranes avec solution ATB Séparation de la membrane du chorion Apposition des membranes de nitrocellulose Découpage des fragments Contrôle bactériologique et histologique Congélation en milieux contenant 30% de glycérol Stockage – 80°C Procédé de transformation Séparation amnios-chorion Découpage Procédé de transformation Conditionnement unitaire Procédé de conservation Réception Contrôle microbiologique du milieu de transport Séparation amnios chorion Contrôle histologique du placenta Découpage de l’amnios Conditionnement des fragments Conservation à –80°C pendant 2 ans Contrôle microbiologique du milieu de rinçage et sur fragments Contrôle histologique sur fragments Greffe de membrane amniotique Sur prescription nominative Décongélation à température ambiante ou à 37°C Rinçage au sérum physiologique Greffe Résultats Pas alternative thérapeutique Effet trophique et antalgique rapide Technique chirurgicale simple > 2 800 greffes en 2014 Usage scientifique Passage du cadre thérapeutique au cadre scientifique Cadre de la loi de bioéthique identique Notion de changement de finalité Nécessite une déclaration de conservation et une autorisation de cession dans le cadre d’un CRB auprès du ministère de la recherche, de l’ARS, de l’ABM (décret 2007-1220 du 10 août 2007). Intégration des collections de la Banque de tissus au CRB du CHRU de Montpellier Déclaration et autorisation de cession obtenues pour les cornées, les membranes amniotiques et la peau FIN Merci de votre attention