résume biocell

Partie II :
Biocell cours
et TD

Microscope optique
Microscope électronique
• Standard :
Observe les cellules fixées et colorées
Grossissement ; X1500 à X2000
Pouvoir séparateur : 0,1 µm
• En contraste de phase :
Voir les cellules vivantes et non colorées
• A fluorescence
• Polarisant
Etapes de préparations de l’échantillon :
1) Fixation
2) Déshydratation
3) Inclusion : par paraffine
4) Microtomie
5) Etalement
6) Coloration
7) Observation
Mauvaise fixation =tissu déchiré
Les coupes ne seront pas
différenciées car la chaleur fait fondre
la cire
Certains tissus peuvent être prépares
directement par frottis :
Frottis sanguin
Frottis de sperme
Frottis vaginale
Pouvoir séparateur : 1 à 2 nm
• MET :
Voir un échantillon dont l’épaisseur < 0,1 µm
• MET à haut voltage :
Voir des échantillons plus épais
Qlq ME possèdent des lentilles
électromagnétiques pour agrandir
• MEB :
Voir la surface cellulaire
Etapes de préparations de l’échantillon :
1) Fixation
2) Déshydratation
3) Inclusion : par résine
4) Ultramicrotome
5) Recueil : par grilles métalliques
6) Coloration : par métaux lourds
7) Observation
Centrifugation zonale = séparation selon la taille et la forme ≠ Cenrifugation iso-pycnique = selon la densité de
flottaison
L’éléctrophorèse = séparation des protéines selon la charge
L’autoradibiographie = La détection de certaines molécules dont certains atomes ont été remplacés par des
isotopes radioactifs. La détection morphologique nécessite l’emploi d’une surface photographique.
Chromatographie (de partage et sur colonne=
Marquage par anticorps fluorescent ou par pigment métallique = suivre le mouvement ou l’éxistence d’un
corps
Coloration négative = révèle la forme d’un éléments par coloration de l’éxtérieur
Hétérocaryon = obtenir une cellule qui possède 2 noyaux et une MP de protéines combinées par hybridation
somatique
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Instruments d’étude de la cellule
( Microscope Electrique à Transmission )
( Microscope Electrique à Balayage )
par la lumière UV

Morphologie
• Observation des coupes minces :
La MP est une membrane trilamellaire de 7,5
d’épaisseur comprenant deux feuillets denses de
2 nm d’épaisseur chacun séparés par un feuillet
clair d’épaisseur 3,5 nm
On note la présence d’une couche d’aspect
fibrillaire du côté du feuillet externe dont
l’épaisseur varie de 15 à 20 nm qu’on l’appelle le
Cell-coat
Pour les cellules de l’intestin (les entérocytes) et celles des poumons le cell-coat est
développé
Espace entre 2 cellules = espace intracellulaire
• Observation de répliques :
• Principe : 4 étapes :
1. Congélation
2. Fracture
3. Ombrage
4. Réplique
• Résultat :
 Le trait de fracture à tendance de passer par le feuillet moyen, ce qui laisse
supposer qu’il s’agit d’une structure de moindre résistance
 Les particules observées peuvent être dispersées ou groupées, ce qui laisse
supposer que les particules sont mobiles
Composition chimique
• Étude menées sur le globule rouge car ne contient que la MP +
hémoglobine
• Fraction obtenue par centrifugation : 60% protéines 40% lipides
Pour d’autre cellule la fraction est 50/50
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La MP : structure, composition
Appelé revêtement
cellulaire ou
revêtement fibreux
ou glycocalix
les entérocytes = cellules absorbants au niveau des intestins
3 lames

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Rappel de constituants cellulaires
Constituants minéraux
• L’eau et sels minéraux
Notion de molécules hydrophobes et hydrophiles :
Hydrophobes : n’aime pas l’eau mais aime les lipides
Hydrophiles : aime l’eau mais n’aime pas les lipides
Les glucides
• Les monosaccharides se lient par des liaisons glycosidiques pur former
des di-, oligo- ou polysaccharides
• Les oligosaccharides peuvent être linéaires ou ramifiées
Des oligosaccharides courts et ramifiées se lient à des
protéines ou à des lipides pour former des glyco-
Les GAG (catégories particulières des
polysaccharides) se lient aux protéines pour
former des protéoglycanes ou des mucoprotéines
Les lipides
• Lipides simples :
• Les acides gras : non saturés et saturés
• Les alcools : les glycérolés se lient aux acides gras pour former des mono-, di-, triglycérides
• Lipides complexes :
phospholipides
60%
choléstérol 23%
glycolipides 3%
autres 13%
Les phopholipides : sont
les constituants les plus
importants
Le cholestérol :
molécule amphiphile
qui intervient dans la
fluidité et la stabilité de
la MP
LDL ≠ HDL ≠
cholestérol
Exemple : le dolichol
protéines
ou
glycolipides
2 sucres liés répéter plusieurs fois d"une façon linéaire
la plupart sont Amphiphiles
( : la mauvaise
graisse )
+ l'inosital
60%
chez les phospholipides on distingue :
*les phosphoglycérides
(=glycérol+phosphate+2acides gras + une
molécule à fonction alcool
*les sphingomyéline
LDL="mauvais cholestérol" : plus de cholestérol par rapport au protéines
HDL= "bon cholestérol" : plus de protéines par rapport au cholestérol

Les protéines
• Structure : primaire (chaine), secondaire (hélice α ou feuillet β), tertiaire
(domaines) ou quartenaire
Pour un bon fonctionnement des protéines il faut que
1. La succession des AA soit correcte
2. La forme spatiale soit correcte
Formation des bicouches
lipidiques
En présence d’eau, formation des monocouches, bicouches, micelles, liposomes (protéines + lipides)
La MP est une mosaïque
• Mosaïque : mélange de lipides et des lipides (il ya 100 lipides pour une protéine)
• Les lipides :
• Les protéines :
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La MP : organisation moléculaire et
propriétés
Les lipides : disposées
en bicouches
Les poles hydrophobes
forment les feuillets clairs
Les poles hydrophiles
forment les feuillets denses
Hémi couches
Protéines transmembranaires
Protéines périphériques
Ils sont soit bitopiques
Soit polytopiques
Monotopiques (à demi
traversée ) existent dans
mithochondries
Ils sont de type 1 NT du coté
cytosolique
Ou de type 2
Certains liées à des protéines
intégrées
D’autres sont liées par GPI du
coté extracelullaire
D’autres sont liées par acides
gras du coté intracelullaire
fluide
des protéines
dite aussi protéines intrinsèques ou intégrées
dite aussi protéines extrinsèque
(traversée unique)
(traversées multiples)
ils sont amphiphiles avec une partie moyenne hydrophobe
coté cytosolique= coté intracellulaire
méthode de séparation des particules et des protéines : par centrifugation
*centrifugation différentielle ou zonale : les particules peuvent être séparée selon leur forme et leur taille par
centrifugation ou ultracentrifugation ainsi que les particules obtenues par ultracentrifugation sont caractérisées par
leur coefficient ou constante de sédimentation
*centrifugation isopycnique : centrifugation à l'équilibre qui consiste sur une séparation en une série de bandes
indépendamment de leur taille et forme mais selon leur densité de flottaison
Glycosylphosphatidylinositol
aime
l'eau
n'aime
pas
l'eau