06 10 16 9h 10h hemato tagzirt

2016-2017 Le PNN, propriétés et fonctions
Hématologie
– UEVII: Sciences biologiques–
Annexe complet sur Moodle
Semaine : n°5 (du 03/10/16 au
09/10/16)
Date : 06/10/2016
Heure : de 9h00 à
10h00 Professeur : Pr. Madjid
Binôme : n°81 Correcteur : n°79
Remarques du professeur
•Diapos sur Moodle
•Séance de TP commence à 13h30
•ED obligatoire et à préparer
•Peu d'étudiants en cours !!!!:)
PLAN DU COURS
I. Généralités
a) Morphologie, caractéristiques
b) Principaux récepteurs membranaires
II. Propriétés des PPN
a) Recrutement
1) Roulement
2) Polarisation
3) Activation par les facteurs chimiotactiques
4) RCPG
5) Adhésion ferme
6) Diapédèse
7) Migration tissulaire
b) Réponse pro-inflammation
1) Phagocytose
2) Bactéricidie
3) Dégranulation
4) NADPH oxydase
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I. Généralités
50%-70% des leucocytes circulants : durée de vie courte (quelques heures), turn-over rapide (si on en a
besoin,le déversement est très rapide) , cellules matures morphologiquement reconnaissables, se trouvant
dans la moelle osseuse. Ce sont les leucocytes les plus nombreux ++
3 répartition :
•compartiment de réserve médullaire : très facilement mobilisable, durée de vie courte (3-5jours)
•compartiment vasculaire : cellule transitoirement sanguine (6 à 8h) : pool circulant (2 à 7,5G/L) et
pool marginé sur l'endothélium (fixé sur la mono couche de cellules endothéliales donc la filtration
sera plus rapide)
•Compartiment tissulaire (1-3jours) : infiltré dans
le tissus.
3 états du PNN dans le compartiment vasculaire :
•au repos (inactif)
•conditionné (pré activé) : intermédiaire, et
permet au PNN, suite à un 2nd stimuli de s'activer
plus rapidement et d'agir de manière rapide en
conséquence
•actif
Rôles :
•Régulation de la réponse immunitaire innée ( avec une fonction antibactérienne, mais non exclusive
au PNN) : ex des patients neutropéniques (faible en PNN) seront soumis à un risque infectieux.
•Réponse inflammatoire, sous l'effet de facteurs de croissance, cytokines (chimiokines, interleukines
IL) : les PNN sont des granulocytes avec des granulations dans le cytoplasme qui sont remplies
d'enzymes, de facteurs de croissance et donc quand les PNN sont activés, ces granulations vont se
déverser dans l'environnement.
•Cependant, a un effet délétère dans les maladies inflammatoires (ex glomérulonéphrétites aiguës ;
détresse respiratoire, maladies inflammatoires du tube digestif) quand le nombre de PNN est très
important (donc activation trop importante)
a) Morphologie, caractéristiques
•Taille de 12-18 µm : soit 2-3 fois la taille d'une hématie. Plutôt ronde.
•Rapport N/C : 0,5 → le noyau prend la moitié de la place du cytoplasme de la cellule
•Noyau multilobé : 3-6 lobes reliés par des ponts chromatiniens, avec de la chromatine dense et
mottée
•Cytoplasme : clair, avec des granulations neutrophiles (beige, marron), nombreuses et dispersées,
fine et hétérogènes (dû au différents types de granulations 1aire, 2aire, 3aire) : on ne peut pas les
quantifier tellement elles sont nombreuses
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b) Principaux récepteurs membranaires
Le PNN joue un rôle dans la réponse anti-inflammatoire avec des stimuli (ex peptides) via des récepteurs. Ce
PNN, sur sa surface, contient de nombreux récepteurs (voir ci-dessous)
A côté de ces récepteurs, on a des molécules d'adhésion : le PNN est une molécule circulante mais aussi c'est
une cellule infiltrante dans le tissu. Donc pour adhérer la surface des cellules endothéliales, elle a besoin de
ces molécules (L-sélectines, et les intégrines CD18/CD11b)
Elles présentent aussi des récepteurs à l'anticorps, notamment pour les immunoglobulines de type G et A,
mais aussi des récepteurs au complément jouant un rôle important dans les fonctions de phagocytose du
PNN.
•Récepteurs du complément
•Récepteurs aux cytokines et chimiokines
•Récepteurs aux Ac
•Molécules d'adhésion cellulaire
•Molécules de reconnaissance et présentation des Ag
•Molécules de reconnaissance des molécules membranaires
II. Propriétés des PPN
a) Recrutement
C'est la première cellule infiltrant massivement le foyer inflammatoire. Lorsqu’un mécanisme inflammatoire
se met en place, les 1ères cellules présentes sur le site inflammatoire sont les PNN.
Les différentes étapes du recrutement forment une chorégraphie : les étapes sont effectuées suite à une
infection bactérienne.
1) Roulement
Les PNN roulent sur la paroi endothéliale : circulent dans le sang périphérique, mais aussi peuvent rouler
(cependant vont moins vite que les autres PNN qui sont circulants) à la recherche de stimuli à la surface des
cellules endothéliales (= cellules sentinelles) et détecte des changements moléculaires associés à
l'inflammation (car quand sera infecté, les cellules endothéliales vont sécréter des cytokines).
Ainsi :
•Processus de marginalisation normal et réversible
•Détectent les changements moléculaires associés à l'inflammation
•Réagissent à des stimuli IL8, TNFα, IL1-β, IL-17, fMLP via des récepteurs membranaires
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•Implication des sélectines (« selected » + lectins)
Les sélectines (sucres) existent sous 3 types :
•L-sélectine (CD62L) – expression par les leucocytes
•E-sélectine – expression par les cellules endothéliales
•P-sélectine – expression par les cellules endothéliales et plaquettes
Les sélectines sont toujours présentent à la surface des cellules, et jouent un rôle important dans les
interactions avec les récepteurs correspondants et les interactions ont une faible affinité et transitoires
(réversibles : attachement/détachement)
ENDOTHELIUM PNN RÔLE
glyCAM-1 CD62L : se lie à au glyCAM-1 Stabilise le roulement à la surface
de l'endothélium
P-sélectine PSGL1 : liée à la P-sélecine de
l'endothélium
Diminue vitesse du roulement
E-sélectine ESL1 Entretien l’interaction
L’ensemble de ces mécanismes permet la transition du roulement à l'adhésion (qui est encore réversible).
L'adhésion entraîne, en fonction du flux sanguin, une polarisation/front de polarisation.
2) Polarisation
Formation d'un front de migration avec 2 pôles :
•à l'avant de la cellule : fillipode ou lamellipode
•à l'arrière de la cellule : un uropode
La PSGL1 joue un rôle essentiel : elle va être reliée au cytosquelette du PNN et permettre sa
déformation/modification de sa morphologie en vue des étapes suivantes (notamment l'activation)
3) Activation par les facteurs chimiotactiques
Chimiotaxie : attraction cellulaire
Les facteurs sont IL8, PAF .. qui sont pro-inflammatoire particpant à l'activation de la cellule et sont libérés
par la cellule endothéliales et permettre son activation.
Production de médiateurs par l'endothélium vasculaire : IL-8, PAF, TNFα, IL1β (cytokine pro inflammatoire
participant à l'activation de la cellule, puis sont libérés par la cellule endothéliale).
Au cours de l'activation, on aura une expression croissante d'intégrine (de CD11b et de CD18).
Lorsque le PNN est activé, on a une augmentation de leur expression, → Entraîne coupure de la CD62L
(diminution de l'expression) par l'expression d'une métalloprotéinase : lors de l'activation par différentes
chimiokines, ces granulations se dégranulent et les vésicules fusionnent avec la membrane plasmique, et ces
vésicules contiennent le CD11b et CD18 et ainsi ces récepteurs se trouvent à la surface du PNN.
Ces différents médiateurs vont agir sur des récepteurs à la surface des PNN : ces récepteurs sont de type
récepteurs couplés aux protéines G.
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4) RCPG
Récepteurs à 7 domaines TM, complexe formé des protéines Gα, Gβ et Gγ.
Forme inactive lié au GDP, et la forme active liée au GRP : Gα se dissocie, Gβ et Gγ participent aux voies
de signalisation
Le 2nd messager est activé par la phospholipase C : activation de la phosphatidylinositoltriphosphate (PPI3),
génération localisée de DAG + 1,4,5 triphosphate (Ca2+ + activation de la PKC)
PPI3 participe à la réticulation des filaments de F-actine, et à la polarisation de la cellule par la création d'un
gradient interne.
5) Adhésion ferme
Expression des intégrines du PNN
PNN circulants → activés : induit un arrêt du roulement, une adhésion ferme irréversible, et l'initiation du
processus de diapédèse.
Cette adhésion est irréversible et implique l'intégrine CD11b, et CD18, on passe de l'état PNN circulant à un
état de PNN activé : d'ailleurs pour observer l'état d'activation des PNN, on utilise la cytométrie de flux où
on étudie l'expression de différents récepteurs, en utilisant des Ac dirigés vers des Ag. Ces Ac présentent un
chromophore et quand le cytomètre détecte la présence des Ac, plus le signal est important, plus l'Ag est
présent dans la cellule.
Quand on étudie l'expression de CD18 ou/et CD11b, l'expression dans la cellule activé au niveau des PNN,
est beaucoup plus importante que dans les cellules au repos. Expression des intégrines → adhésion ferme et
irréversible et initiation à la diapédèse (infiltration dans les tissus)
L'intégrine est un récepteurs avec 2 sous-unités : alpha et béta.
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