Place de l’immunohistochimie dans le diagnostic des réarrangements ALK

FICHE technique
Place de l’immunohistochimie
dans le diagnostic des réarrangements
du gène ALK dans les cancers pulmonaires
S. Lantuejoul*, L. Mescam*, P. Lorimier*
Cette fiche technique décrit les indications, les modali-
tés de réalisation pratique et d’interprétation ainsi que
la place dans l’algorithme diagnostique de l’immuno-
histochimie ALK.
GIndications
La FISH reste la technique de référence pour le dia-
gnostic des réarrangements du gène ALK dans les
adénocarcinomes pulmonaires métastatiques EGFR
et K-Ras non mutés. Cependant, pour des raisons
pratiques, les plateformes de génétique moléculaire
des cancers de l’Institut national du cancer (INCa)
réfléchissent à un préscreening par immunohisto-
chimie ; les conditions de réalisation et d’interpré-
tation de cette technique doivent être néanmoins
standardisées, et la place de l’immunohistochimie
dans l’algorithme diagnostique du réarrangement
d’ALK doit être définie et validée.
GModalités pratiques
Différents clones anti-ALK sont actuellement pro-
posés dans le commerce : le clone ALK1 (Dako,
Glostrup, Danemark), le clone 5A4 (Novocastra™,
Leica Biosystems ; Abcam® ; CliniSciences) et le clone
D5F3 (CD246, Cell SignalingTechnology ® , Danvers,
Massachusetts, États-Unis). Le clone ALK1, utilisé
dans le diagnostic des lymphomes anaplasiques à
grandes cellules ALK+, serait le moins sensible et
responsable d’un bruit de fond. Les clones D5F3 et
5A4 présentent une sensibilité de 92 à 100 % et une
spécificité de 99 % à 100 %(1-6). Les dilutions varient
de 1:25 à 1:100, avec ou sans amplification selon les
automates et les clones ; le démasquage antigénique
se fait de préférence au moyen d’un tampon basique.
Le marquage est modéré à intense(2 ou 3 croix
d’intensité), cytoplasmique diffus, parfois pseudo-
membranaire, et intéresse plus de la moitié des cel-
lules tumorales (figures 1, 2 et 3) ; il est homogène à
la tumeur, mais peut être faible(1 croix d’intensité) et
focal, notamment en cas de sous-fixation ou de fixa-
tion par l’AFA (alcool, formol, acide acétique). Il n’y a
pas de témoin interne positif, si bien qu’un témoin
externe positif est indispensable. Il s’agit idéalement
d’une tumeur pulmonaire ou d’une lignée cellulaire
dont le réarrangement a été prouvé par technique
FISH et/ou RT-PCR.
* Département de patho-
logie, pôle de biologie et
de pathologie, centre hos-
pitalier universitaire Albert-
Michallon ; Inserm U 823,
institut Albert-Bonniot,
université Joseph-Fourier,
Grenoble.
Correspondances en Onco-Théranostic - Vol. I - n° 3 - juillet-août-septembre 2012
I
Figure 1. Marquage positif cytoplasmique diffus
des cellules tumorales avec le clone 5A4.

FICHE technique
G
Place de l’immunohistochimie ALK
dans l’algorithme diagnostique
Pour des raisons de facilité de réalisation, de rapidité
et de coût, et parce que de rares cas EGFR mutés et ALK
réarrangés ont été décrits, tous les adénocarcinomes
adressés aux plateformes devraient être testés par
immunohistochimie ALK ; les cas douteux ou positifs,
et les cas négatifs, mais survenant chez des “petits”
fumeurs ou des non-fumeurs, ou présentant une mor-
phologie évocatrice (architecture acinaire et solide,
cellules en bague à chaton TTF1 positives et KRAS non
mutées) devraient être vérifiés par FISH et/ou RT-PCR.
Cette proposition d’algorithme reste à valider à grande
échelle par des études multicentriques.
Correspondances en Onco-Théranostic - Vol. I - n° 3 - juillet-août-septembre 2012
II
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Références
Figure 2. Marquage négatif avec le clone 5A4.
Figure 3. Résultat douteux avec seulement 30 % de cellules tumorales
positivement marquées avec une intensité faible (à une croix).