Place de l’immunohistochimie dans le diagnostic des réarrangements ALK

FICHE
t e c h n i q u e
Place de l’immunohistochimie
dans le ­diagnostic des réarrangements
du gène ALK dans les cancers pulmonaires
S. Lantuejoul*, L. Mescam*, P. Lorimier*
diffus
positif cytoplasmique
Figure 1. Marquage
4.
5A
s avec le clone
des cellules tumorale
Cette fiche technique décrit les indications, les modalités de réalisation pratique et d’interprétation ainsi que
la place dans l’algorithme diagnostique de l’immunohistochimie ALK.
GGIndications
La FISH reste la technique de référence pour le diagnostic des réarrangements du gène ALK dans les
adénocarcinomes pulmonaires métastatiques EGFR
et K-Ras non mutés. Cependant, pour des raisons
pratiques, les plateformes de génétique moléculaire
des cancers de l’Institut national du cancer (INCa)
réfléchissent à un préscreening par immunohistochimie ; les conditions de réalisation et d’interprétation de cette technique doivent être néanmoins
standardisées, et la place de l’immunohistochimie
dans l’algorithme diagnostique du réarrangement
d’ALK doit être définie et validée.
GGModalités pratiques
Différents clones anti-ALK sont actuellement proposés dans le commerce : le clone ALK1 (Dako,
Glostrup, Danemark), le clone 5A4 (Novocastra™,
Leica Biosystems ; Abcam® ; CliniSciences) et le clone
D5F3 (CD246, Cell SignalingTechnology®, Danvers,
Massachusetts, États-Unis). Le clone ALK1, utilisé
dans le diagnostic des lymphomes anaplasiques à
grandes cellules ALK+, serait le moins sensible et
responsable d’un bruit de fond. Les clones D5F3 et
5A4 présentent une sensibilité de 92 à 100 % et une
spécificité de 99 % à 100 % (1-6). Les dilutions varient
de 1:25 à 1:100, avec ou sans amplification selon les
automates et les clones ; le démasquage antigénique
se fait de préférence au moyen d’un tampon basique.
Le marquage est modéré à intense (2 ou 3 croix
­d’intensité), cytoplasmique diffus, parfois pseudomembranaire, et intéresse plus de la moitié des cellules tumorales (figures 1, 2 et 3) ; il est homogène à
la tumeur, mais peut être faible (1 croix d’intensité) et
focal, notamment en cas de sous-fixation ou de fixation par l’AFA (alcool, formol, acide acétique). Il n’y a
pas de témoin interne positif, si bien qu’un témoin
externe positif est indispensable. Il s’agit idéalement
d’une tumeur pulmonaire ou d’une lignée cellulaire
dont le réarrangement a été prouvé par technique
FISH et/ou RT-PCR.
Correspondances en Onco-Théranostic - Vol. I - n° 3 - juillet-août-septembre 2012
* Département de pathologie, pôle de biologie et
de pathologie, centre hospitalier universitaire AlbertMichallon ; Inserm U 823,
institut Albert-Bonniot,
université Joseph-Fourier,
Grenoble.
I
FICHE
t e c h n i q u e
5A4.
négatif avec le clone
Figure 2. Marquage
GGPlace de l’immunohistochimie ALK
dans l’algorithme diagnostique
Pour des raisons de facilité de réalisation, de rapidité
et de coût, et parce que de rares cas EGFR mutés et ALK
réarrangés ont été décrits, tous les adénocarcinomes
adressés aux plateformes devraient être testés par
immunohistochimie ALK ; les cas douteux ou positifs,
et les cas négatifs, mais survenant chez des “petits”
fumeurs ou des non-fumeurs, ou présentant une morphologie évocatrice (architecture acinaire et solide,
cellules en bague à chaton TTF1 positives et KRAS non
mutées) devraient être vérifiés par FISH et/ou RT-PCR.
Cette proposition d’algorithme reste à valider à grande
échelle par des études multicentriques.
Références
1. Takeuchi K, Choi YL, Togashi Y et al. KIF5B-ALK, a novel fusion oncokinase identified by an immunohistochemistry-based diagnostic system
for ALK-positive lung cancer. Clin Cancer Res 2009;15(9):3143-9.
2. Mino-Kenudson M, Chirieac LR, Law K et al. A novel, highly sensitive
antibody allows for the routine detection of ALK-rearranged lung adenocarcinomas by standard immunohistochemistry. Clin Cancer Res
2010;16(5):1561-71.
3. Jokoji R, Yamasaki T, Minami S et al. Combination of morphological
les t­ umorales
ulement 30 % de cellu une croix).
se
ec
av
x
eu
ut
do
t
faible (à
Figure 3. Résulta
es avec une intensité
positivement marqué
feature analysis and immunohistochemistry is useful for screening of
EML4-ALK-positive lung adenocarcinoma. J Clin Pathol 2010;63(12):106670.
4. Yi ES, Boland JM, Maleszewski JJ et al. Correlation of IHC and
FISH for ALK gene rearrangement in non-small cell lung carcinoma: IHC score algorithm for FISH. J Thorac Oncol 2011;6(3):
459-65.
5. Paik JH, Choe G, Kim H et al. Screening of anaplastic lymphoma
kinase rearrangement by immunohistochemistry in non-small cell
lung cancer: correlation with fluorescence in situ hybridization. J Thorac
Oncol 2011;6(3):466-72.
6. McLeer-Florin A, Moro-Sibilot D, Melis A et al. DualIHC and FISH testing
for ALK gene rearrangement in lung adenocarcinomas in a routine
practice: a French study. J Thorac Oncol 2012;7(2):348-54.
II
Correspondances en Onco-Théranostic - Vol. I - n° 3 - juillet-août-septembre 2012