Endocell® : première culture cellulaire autologue

INNOVATION EN ASSISTANCE MÉDICALE À LA PROCRÉATION
POUR LES COUPLES INFERTILES EN DÉSIR D’ENFANT
Conférence de presse du 27 septembre 2011
INNOVATION EN ASSISTANCE MÉDICALE À LA PROCRÉATION
POUR LES COUPLES INFERTILES EN DÉSIR D’ENFANT
Endocell®: première culture cellulaire autologue « prête à l’emploi »
Pr François Olivennes,
Gynécologue-obstétricien, coordinateur du centre de FIV Clinique de la Muette, Paris
Implantation des embryons au stade blastocyste (J5) : données
biologiques
Pr Paul Barrière,
Médecin biologiste et directeur du pôle mère-enfant, CHU de Nantes
Bénéfices de la coculture embryonnaire sur cellules endométriales
autologues
Dr Guy Cassuto
Biologiste Laboratoire Drouot, Hôpital Des Diaconesses, Paris
INNOVATION EN ASSISTANCE MÉDICALE À LA PROCRÉATION
POUR LES COUPLES INFERTILES EN DÉSIR D’ENFANT
Endocell®: première culture cellulaire autologue « prête à l’emploi »
Pr François Olivennes,
Gynécologue-obstétricien, coordinateur du centre de FIV Clinique de la Muette, Paris
Implantation des embryons au stade blastocyste (J5) : données
biologiques
Pr Paul Barrière,
Médecin biologiste et directeur du pôle mère-enfant, CHU de Nantes
Bénéfices de la coculture embryonnaire sur cellules endométriales
autologues
Dr Guy Cassuto
Biologiste Laboratoire Drouot, Hôpital Des Diaconesses, Paris
Endocell® : première culture
cellulaire autologue
« prête à l’emploi »
Pr François Olivennes
Gynécologue-obstétricien, coordinateur centre de FIV Clinique la Muette, Paris
HISTOIRE DE LA CULTURE EMBRYONNAIRE
Années 70 : Développement de milieux de culture plus
complexes à partir de données nouvelles sur les
secrétions tubaires
Années 90 : Limites des milieux de cultures
traditionnels « conditions de culture sub-optimales »
Métabolisme embryonnaires inapproprié :
retard ou arrêt du développement au moment de l’activation du
génome embryonnaire (J3)
Taux très modeste de blastocystes
Nombre de cellules du bouton embryonnaire anormalement bas
impact au moment de l’éclosion
Problématique : échecs répétés d’implantation
Source : Les JTA,
M.Plachot, 1996, Bolton et al. 1989, Bowman et Mc Laren 1970, Human : Vlad et al 1996
HISTOIRE DE LA COCULTURE
1962 : 1ère coculture chez l’animal
1989 : 1ère coculture chez l’homme (Wiemer)
Début des années 90 : « l’effet coculture »
Différents types de supports cellulaires :
Origine génitale (cumulus, granulosa, utérus, endomètre….)
Origine extra-génitale (lignée VERO = cellules épithéliales de reins de
singe)
Meilleures connaissances de besoins métaboliques de l’embryon
Coculture de blastocystes : obtenir des embryons à fort potentiel
implantatoire + meilleure synchronisation endomètre-embryon
HISTOIRE DE LA COCULTURE
Arrêté du 12 janvier 1999 fixant les règles de bonnes
pratiques en A.M.P : interdiction de la coculture non
autologue :
« Seule la coculture sur cellules autologues n’induit pas de
risques infectieux exogènes »
Conséquences :
Arrêt de la coculture embryon-VERO
Amélioration des milieux de culture :
Milieux séquentiel (Gardner…)
Milieu unique de type Global®
ENDOCELL® : LE CONCEPT
Culture de cellules épithéliales d’endomètre autologue :
Sécrétion de facteurs d’attachement embryonnaire :
- Intégrines, métalloprotéinase, CSF1
Sécrétion de facteurs embryotrophiques :
- facteurs de croissance : LIF, IL6, PAF, VEGF, G-CSF, autres ….
Double but :
Améliorer le développement embryonnaire in vitro
Favorise l’implantation in vivo
ENDOCELL® : LE CONCEPT
Permettre le transfert d’un seul embryon au stade
ultime de son développement
Diminuer le taux de grossesses multiples
Diminuer le nombre d’HSO
Permettre la congélation d’un nombre moindre
d’embryons mais dont les taux de survie après
décongélation sont plus élevés
Obtenir un taux cumulatif de grossesses supérieur par
cycle de stimulation ovarienne
LE PRÉLÈVEMENT ENDOMÉTRIAL
Concept : importance de la fenêtre d’implantation
Human menstrual cycle
Period
1
Proliferative phase
5
6
Phase secrétoire
14
15
ovulation
19
Fenêtre d’implantation
Quand ?
Phase lutéale de J20 à J23 (LH+7 à LH+11)
Comment ?
Par aspiration à la Pipelle de Cornier®
24
COMMANDE ENDOCELL®
Dès l’injection d’Hcg pour le déclenchant l’ovulation
la production d’Endocell® est lancée par les
Laboratoires Genévrier
Injection
hCG
Décongélation et
Culture Endocell®
Production Endocell
Isolement
cellulaire et
comptage
Culture cellulaire
Ratio fixe de cellules
stromales et épithéliales
48h culture
Epithelial cells
Stromal cells
Robot
Endocell® produit final
ENDOCELL® : CONCLUSION
Progrès majeur en culture embryonnaire prolongée
Dès la première tentative de FIV
Pour donner toutes les chances à l’embryon :
de se développer harmonieusement
de s’implanter
INNOVATION EN ASSISTANCE MÉDICALE À LA PROCRÉATION
POUR LES COUPLES INFERTILES EN DÉSIR D’ENFANT
Endocell®: première culture cellulaire autologue « prête à l’emploi »
Pr François Olivennes,
Gynécologue-obstétricien, coordinateur du centre de FIV Clinique de la Muette, Paris
Implantation des embryons au stade blastocyste (J5) : données
biologiques
Pr Paul Barrière,
Médecin biologiste et directeur du pôle mère-enfant, CHU de Nantes
Bénéfices de la coculture embryonnaire sur cellules endométriales
autologues
Dr Guy Cassuto
Biologiste Laboratoire Drouot, Hôpital Des Diaconesses, Paris
Implantation des embryons au stade
blastocyste (J5) : données biologiques
Pr Paul Barrière
Médecin biologiste et directeur du pôle mère-enfant, CHU de Nantes
PHYSIOLOGIE
L’ implantation embryonnaire se produit au stade blastocyste éclos.
Elle nécessite :
Un embryon capable d’exprimer des signaux pour son implantation et
ayant le moins « souffert » possible en culture
Un endomètre « réceptif »:
non infecté
ayant développé sa microvascularisation
sans obstacle intra cavitaire utérin: polype, myome sous
muqueux…
capable de recevoir les « signaux embryonnaires » et
d’échanger avec l’embryon
PHYSIOLOGIE DU DÉVELOPPEMENT
EMBRYONNAIRE
Le développement embryonnaire montre plusieurs périodes :
Période de pré-activation génomique : l’embryon se
développe sur ses réserves et ses transcrits d’origine
ovocytaire
Progressivement relayée par une période de post-activation
génomique : il démarre sa propre activité transcriptionnelle
DÉVELOPPEMENT EMBRYONNAIRE
PRE-IMPLANTATOIRE
Activation du génome embryonnaire entre J2 et J3 pendant 24h
Longest step of pre-implantation embryonic development
D1
D2
Fertilization 2 cells
2PN
Genomic activation
cycle
4 cells
D3
D4
D5
8 cells
Morula
Blastocyste
Transcrits ovocytaires
Transcription embryonnaire
Activation génomique de l’embryon
Hardy, K, Spano, S. J Endocrinol 2002; 172: 221-36
PHYSIOLOGIE
La phase d’activation génomique est une période critique du
développement préimplantatoire de l’embryon
Tout retard de cette activation provoquera un arrêt du
développement : la cinétique de l’activation est primordiale
Impact des milieux sur l’activité transcriptionnelle et
traductionnelle de l’embryon après l’activation de son génome
QUALITÉ DU BLASTOCYSTE
Harmonie du développement pendant 5 jours
Critères morphologiques :
État d’expansion du blastocele
Inner Cell Mass : nombre de cellules
Régularité du trophectoderme
Plusieurs classifications :
Dkras ; Gardner ( tiennent compte des mêmes critères)
Relation de cause à effet entre aspect morphologique du
blastocyste et implantation (Gardner)
Gardner DK, et al. Fertil Steril. 2000;73(6):1155-8.
QUALITÉ DU BLASTOCYSTE
Critères biologiques :
Consommation d’IL6 par l’embryon (Dominguez et al.)
Consommation de glucose par l’embryon (Gardner et al.)
G.CSF dans le liquide folliculaire de l’ovocyte ayant généré la
blastocyste (groupe Embic)
Etude génomique de la granulosa (Hammamah)
Etude protéomique (prometteuse)
Etude métabolomique (à ce jour décevante)
Consommation d’IL6 par l’embryon implanté
(Dominguez et al.)
LES MILIEUX DE CULTURE SYNTHÉTIQUES
Ils tentent de répondre aux besoins métaboliques de l’embryon
et aux changements dynamiques de son environnement
L’embryon utilise :
Les lactates/pyruvates jusqu’à l’activation de son génome
Du glucose après activation du génome
L’utilisation d’un seul milieu pour la culture prolongée
est apparue insuffisante dans un premier temps puis
débattue pour adopter soit des milieux dits
« séquentiels », soit un milieu unique supplémenté.
LA COCULTURE
Culture simultanée :
D’embryons
Et de cellules somatiques
Les cellules somatiques constituent un tapis cellulaire
Le dialogue entre ce tapis cellulaire et l’embryon va favoriser
son développement
Sécrétion par le support cellulaire de facteurs embryotrophiques
(facteurs de croissance, cytokines…) (Simon et al.)
ENDOCELL®
Permet de débloquer des voies métaboliques
Détoxification du milieu liquide : l’embryon rejette des déchets
dans le milieu (ammoniac², créatinine….qui par accumulation
deviennent embryotoxiques)
Diffère totalement de la culture embryonnaire classique
Choix du milieu capital : doit satisfaire aux besoins de l’embryon
et du tapis cellulaire
LA COCULTURE
Présentation des cellules (suspension, tapis à confluence ou non)
interfère avec les résultats
Morphologie embryonnaire améliorée
Meilleure survie des blastocystes congelés
Augmentation des taux de grossesse
BILAN ABM 2009
TECHNIQUE
TENTATIVES*
CULTURE
PROLONGEE
FIV Hors ICSI
21 323
13,4%
ICSI
35 552
13,9%
TEC
17 540
15,0%
RÉSULTATS CULTURE PROLONGÉE
Répartition de l’âge des femmes à la ponction 2009
Age à la
ponction
FIV
ICSI
N
%
N
%
<30 ans
532
19,5%
1 177
25,3%
30 - 34 ans
991
36,4%
1 688
36,3%
35 - 37 ans
600
22,0%
942
20,3%
38 - 39 ans
356
13,1%
443
9,5%
40 - 42 ans
210
7,7%
306
6,6%
Taux de grossesses échographiques par transfert 2009
FIV
Grossesses
ICSI
N
%
N
%
2 196
38,3%
3 766
37,3%
EVOLUTION DES TECHNIQUES D’AMP
Apport d’Endocell®
Vitrification embryonnaire
Taux de survie
Taux de grossesse
Taux cumulatifs
Nouvelle politique de stimulation et de transfert embryonnaire en
fonction des progrès de la vitrification ovocytaire et embryonnaire
CONCLUSION
Progrès attendus des prises en charge en FIV
Optimisation des protocoles, des monitorages et des conditions
de déclenchement des stimulations ovariennes
Optimisation des conditions de culture au laboratoire de FIV
« Primum non nocere »
Permettre au potentiel biologique des gamètes confiés par le couple de
s’exprimer au mieux
Merci de votre attention
INNOVATION EN ASSISTANCE MÉDICALE À LA PROCRÉATION
POUR LES COUPLES INFERTILES EN DÉSIR D’ENFANT
Endocell®: première culture cellulaire autologue « prête à l’emploi »
Pr François Olivennes,
Gynécologue-obstétricien, coordinateur du centre de FIV Clinique de la Muette, Paris
Implantation des embryons au stade blastocyste (J5) : données
biologiques
Pr Paul Barrière,
Médecin biologiste et directeur du pôle mère-enfant, CHU de Nantes
Bénéfices de la coculture embryonnaire sur cellules endométriales
autologues
Dr Guy Cassuto
Biologiste Laboratoire Drouot, Hôpital Des Diaconesses, Paris
Bénéfices de la coculture embryonnaire
sur cellules endométriales autologues
Dr Guy Cassuto
Biologiste Laboratoire Drouot, Hôpital Des Diaconesses, Paris
Résultats Étude clinique Endocell® :
Analyse intermédiaire
• Etude multicentrique, contrôlée et randomisée
• Comparaison entre le transfert d’un embryon à J3 et
d’un blastocyste en coculture; en terme de grossesse.
• 230 patientes
• 17 centres d’AMP Français
Critères d’inclusion
•
Femmes ≤ 36 ans
•
Statut ovarien:
•
•
FSH basale ≤ 12 UI/L
E2
•
Rang: 1ère ou 2éme tentative
•
Technique AMP: FIV ou ICSI
•
Sérologies:
•
HIV½ , AgP24, VHB, VHC, HTLV ½, TPHA, toxoplasmose
Méthodologie de l’essai
Stimulation
Ponction
Fécondation
Inclusion
M. S. J3
SET Transfert
Grossesse
Prélèvement
d’endomètre
J22
Stimulation
Ponction
Fécondation
Coculture J5
SET Transfert
Grossesse
Caractéristiques de la population étudiée
J3
(n=115)
Endocell®
(n=115)
p
Age
30.9 ± 3.2
30.6 ± 3.3
0.33
FSH (UI/L)
6.5 ± 1.8
6.6 ± 1.7
0.36
BMI (kg/m²)
22.9 ± 3.8
23.2 ± 4.4
0.55
Estradiol (pg/ml)
50.9 ± 37.6
51.3 ± 33.1
0.29
Sperm/mL (x106 spz/ml)
39.9 ± 46.0
43.7 ± 48.4
0.46
Mobilité progressive (%)
37.1 ± 19.4
36.5 ± 18.1
0.77
Morphologie normale (%)
22.9 ± 19.4
22.0 ± 18.2
0.68
Pas de différence significative entre les 2 groupes
Caractéristiques des cycles (per protocole)
J3
Endocell®
p
Consommation de
gonadotrophines (UI)
1847 ± 685
1845 ± 645
0.98
Durée de stimulation (jours)
10.5 ± 2.0
10.8 ± 1.6
0.28
Nb d’ovocytes recueillis
11.4 ± 5.4
11.0 ± 5.2
0.58
Ovocytes matures (MII)
10.1 ± 5.2
9.4 ± 4.8
0.43
Nb m.d’embryons à J2
6.6 ± 3.7
6.5 ± 3.5
0.83
Pas de différence significative entre les 2 groupes
Population globale étudiée
Patientes
J3
Endocell®
Cycles débutés
115
115
Embryons à J2
109
87
Transfert (SET)
91
69
Critère principal
Taux de grossesses
clinique par transfert
Résultats de l’étude Endocell®
Patientes
Grossesses
Taux de grossesses/ transfert
J3
Endocell®
30
35
33, 0%
50,7%
P
0,02
Les patientes ENDOCELL® ont 1 chance sur 2 d’être enceinte
contre 1 chance sur 3 pour celles du J3
Différence de 17,7% entre les 2 groupes: Hypothèse de départ 12% de différence
In Vitro Fertilization with Single Blastocyst Stage versus Single Cleavage Stage Embryos.
E. G. Papanikolaou New England Journal of Medicine 2006. (J3 vs J5 milieu synthétique)
Endocell pour qui ?
Pour les femmes
Conclusion
Endocell pourquoi ?
Endocell : une prise en charge personnalisée
Endocell®
-Permet un meilleur développement embryonnaire par
la sécrétion de nombreux facteurs embryotrophiques,
absents dans les milieux synthétiques
-Permet de gérer le stress oxydatif et d’éliminer les
déchets métaboliques
-Permet de créer un environnement proche des
conditions physiologiques