UE : Immunopathologie, Immunologie intervention

UE : Immunopathologie, Immunologie intervention
Date : 13 décembre 2010 plage horaire : 16h-18h.
UE : Immunologie Enseignant : Pr Moreau.
Ronéistes :
Castérès charlotte
Parisi jeanne
ED n°3
1ère partie : la cytométrie en flux et son intérêt clinique.
I ) Principe
II ) Cytométrie en flux d'un adulte normal.
III ) Cytométrie en flux d'un nourrisson normal.
IV ) Cytométrie en flux d'une mononucléose inefctieuse.
V ) Cytométrie en flux d'une leucémie lymphoide chronique.
VI ) Cytométrie en flux d'une infection par VIH.
VII ) Cytométrie en flux d'une infection à cytomégalovirus.
2ème partie : correction du sujet d'immuno de juin 2010.
/!\Message du Pr Taupin : modalités de l'examen du module optionnel d'immuno : l'article sera
disponible sur apprentoile d'ici vendredi (17/12/2010). Il y aura 10qcms sur cet article.
L'epreuve d'immuno se déroulera sous la forme de 25 QCMS et de quelques QROC.
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1ère partie : la cytométrie en flux, son intérêt clinique.
I ) Principe
La cytométrie en flux permet le dénombrement et l'identification des sous populations
lymphocytaires.
Les critères que l'on prend en compte sont : la taille des cellules, le contenu cellulaire et la
fluorescence. Les cellules ne sont pas naturellement fluorescentes, on fixe donc des Ac
monoclonaux originaires de souris associés à une molécule, de façon covalente, qui va donner la
couleur. On peut mélanger les Ac et les couleurs.
Ex : On prend un Ac ant-CD4 qui fluoresce en vert (fluorescéine isothyocyanate), on l'incube avec
un mélange de cellules, il y a reconnaissance des cellules qui expriment CD4 et vont être fluo en
vert. Pareil avec CD8 mais cette fois fluo de couleur rouge. Les Cellules CD4+ et CD8+ seront vertes
et rouges.
Activation du fluorochrome : on fait passer
le sang veineux à la queue leu-leu dans une
gaine liquidienne (0,1 microns) intersectée
par un laser qui active le fluorochrome.
On peut reconnaître le contenu et la taille
cellulaire.
Avec les populations de leucocytes on a la
taille en abscisse et le contenu cellulaire en
ordonnée, chaque point représente une
cellule.
Les PNN entourés en vert (les points le plus
en haut à droite du graphe) sont les plus
grosses et les plus compliquées avec noyau
polylobé, les monocytes ( en dessous des
PNN) sont plus
petits et moins complexes, tout en bas c'est les lymphocytes (entourés en rouge).
Il y a 1500 cellules à la seconde qui passe devant le laser, c'est l'informatique qui tri l'information.
En général on mélange 4 Ac : Anti-CD4, Anti-CD8, Anti-CD3 et Anti-CD45, pour chaque élément qui
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passe on a les 6 paramètres.
Chiffres à connaître (!) : lymphocytes totaux : 2giga/L .
giga/L : unité internationale, 2giga/L = 2000/mm3.
lymphocytes CD3- (LyB et NK)=25%, 0,5 giga/L.
lymphocytes CD3+ (LyT)= 75%, 1,5 giga/L.
II ) Cytométrie en flux d'un adulte normal :
Partie haute de la diapo : premier graphe : on a toujours la taille et le contenu cellulaire avec les
trois populations : PNN, monocytes, Lymphocytes.
Second graphe : (en partant du haut et de gauche à droite) on a la fluo (axe logarithmique) liée à
l'Ac anti-CD45.
( Il y a 1000 hématies pour 1 globule blanc, on doit donc détruire les globules rouges, s'il en reste
on va les prendre pour des lymphocytes (mêmes caractéristiques), donc on prend un Ac anti-CD45
qui est exprimé à la surface de toutes les cellules d'origine hématopoïétiques sauf les Gr car ils
n'ont pas de noyaux).
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Donc en bas à droite on a les CD45+ et à gauche les CD45- (c'est délimité par la ligne verticale
toujours sur le deuxième graphe)
Troisième graphe : On fait une fenêtre (c'est comme ça que ça s'appelle quand on prend que les
points CD45+) où on a les lymphocytes totaux. On a donc la fréquence des évènements en abscisse
et la quantité de fluorescence en ordonnée. Les lymphocytes CD3-, donc LyB et NK(27%) sont à
gauche et les CD3+, donc LyT à droite (73%).
Quatrième graphe : Ensuite on fait une autre fenêtre avec les CD3- d'un coté et les CD3+ d'un
autre selon CD8 et le CD4.
Partie basse de la diapo (compte rendu): Ce sont les numérations.
Attention : Les pourcentages en eux mêmes ne sont pas suffisants, ni les valeurs absolues.
Ex : formule leucocytaire : adulte : 1/3 lymphocytes, 2/3 polynucléaires. Elle est inversée chez
l'enfant pendant les 6 premiers mois.
On peut avoir des pourcentages normaux mais des valeurs absolues différentes.
Il faut donc corréler les deux.
III ) Cytométrie en flux d'un nourrisson normal.
On a une inversion de la formule leucocytaire et donc une lymphocytose (il en a 7000 mais il n'est
pas leucémique).
Les proportions (%) sont respectées mais les chiffres sont différents (par rapport aux constantes
physiologiques) si l'ont regarde les valeurs absolues.
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Nourrisson normal chez qui on a fait marquage avec Ac Anti-CD19 (lymphocyte B) et Anti-CD56 et
Anti-CD16 (LyNK).
On distingue bien les LyT et LyB.
On le fait quand problème sur le marquage CD3-. On voit exactement ce qu'il en est des LyNK et
des LyB séparément.
IV ) cytométrie en flux d'une mononucléose Infectieuse :
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