TP 12 Glycémie

EXPÉRIENCE DU FOIE LAVÉ
Protocole
1- Laver soigneusement sous le robinet un échantillon de foie d’une
vingtaine de grammes jusqu'à ce que l’eau qui s’écoule soit claire.
2- Découper l’échantillon en dés d’environ 2 cm de côté et rincer de
nouveau.
3- Placer les morceaux dans un récipient, les recouvrir avec de l’eau
distillée et mener immédiatement un test de détection du glucose le
réactif de la Liqueur de Fehling ***. Noter le résultat dans le
tableau (T0 ; + ou -). Si le test est +, recommencer le lavage et
refaire un test.
4- Placer le récipient à 37°C et agiter légèrement de temps en temps
avec une baguette de verre. Refaire un test au bout de 30 minutes
(Tn,) et noter le résultat( + ou -).
5- Eventuellement refaire un test quelques minutes plus tard
Matériel
En 2 exemplaires
- foie frais
- ciseaux, couteau
- planche à
découper
- Bécher 250 ml
- Glucotest
- Passoire
- Bain-marie à
37º sans support
de tubes
- Bain-marie à
100ºC
- Liqueur de
fehling
- Tubes à essai
-
*** test à la Liqueur de Fehling : 2 cm de liquide à analyser + 1 cm de Liqueur. On place au
bain-marie à 90ºC- 100ºC. Il y a du glucose si on observe un précipité rouge brique.
Représenter le protocole dans votre compte rendu par quelques schémas simples. Noter les résultats et répondre au problème.
Mesure de la glycémie dans les veines porte et sus-hépatiques
Après un repas
Dans veine porte
hépatique
2,5 ou plus
Glycémie (en g/L)
Dans veine sus-hépatique
1 à 1,2
Mesure de la glycémie dans les veines porte et sus-hépatiques
Après jeûne de quelques heures
Dans veine porte
hépatique
0,8
Glycémie (en g/L)
Dans veine sus-hépatique
0,95 à 1,05
MISE EN EVIDENCE DE RESERVES DE GLUCOSE DANS LE FOIE
Protocole
Matériel
Extraction d’une molécule de mise en réserve du glucose
Protocole pour environ 20 g de foie frais
• Couper en petits morceaux le foie.
• Faire bouillir 2 minutes dans 100 mL d’eau distillée puis égoutter à la
passoire.
• Broyer dans 100 mL d’eau distillée puis remettre à bouillir pendant 5
minutes.
• Filtrer dans l’entonnoir
• ajouter au filtrat quelques gouttes d’acide chlorhydrique.
•
Filtrer à nouveau.
• Ajouter au filtrat quatre fois son volume d’alcool à 96% pour obtenir un
précipité.
• Filtrer sous pompe à vide et récupérer le papier filtre avec le précipité
• Faire un test à l’eau iodée directement sur le papier filtre
• Prévoir les expériences témoins indispensables avec de l’amidon , du
glycogène… ou d’autres molécules…
-
Foie frais laissé à température ambiante
depuis le matin ou la veille
Couteau et ciseaux
Planche à découper
4 béchers 500 ml
8 tubes à essai
Entonnoir et support
Filtre en papier pour entonnoir
Plaque chauffante et casserole
Egouttoir
Mixeur
Eau distillée 1l
HCl à 10%
Ethanol à 96º
Centrifugeuse avec les 8 tubes de
plastiques blancs
Eau iodée
Solution d’empois d’amidon ( 50 ml
1%). Solution de glucose
Solution de glycogène ( 50 ml à 1%)
Que peut-on en déduire sur la forme de stockage du glucose dans le foie ?
MISE EN EVIDENCE DE L’EFFET DE L’INSULINE SUR LE GLUCOSE
Solutions mises à disposition : insuline (3,6 U/mL), glucose (1 g/L), glycogène (1g/L), amidon (1g/L)
Réactifs mis à disposition : bandelettes glucotest, eau iodée
•
•
Présenter sous forme d’un tableau le protocole à réaliser (Nº de tube, contenu des tubes, résultats observés, résultats
déduits) et appeler le professeur pour vérification.
Réaliser le protocole après avis du professeur.
1) Présenter et expliquer les résultats obtenus.
2) Que peut-on en déduire quant à l’effet de l’insuline sur le glucose ?
-
Protocole frottis de cellules hépatiques
Couper un petit morceau de foie
Gratter délicatement avec un scalpel sur la face qui vient d’être tranchée pour détacher des
cellules ( très peu de prélevement)
Etaler sur une lame propre
Mettre une goutte d’eau iodée.
Recouvrir d’une lamelle
Observer au microscope.
Comparer avec une observation des cellules d’épithélium buccal. ( utiliser un coton tige
individuel pour le prélèvement)
Interpréter les observations
Observation des molécules de mise en réserve du glucose dans les cellules du foie
Utiliser le microscope de grande qualité ( contraste de phase)
Les préparations de coupe du foie mises à disposition présentent une coloration rouge spécifique de la molécule de
mise en réserve du glucose dans le foie.
•
•
•
Rechercher et localiser sur la préparation les molécules de mise en réserve du glucose.
Appeler le professeur pour vérification.
Schématiser au tableau ou sur une grande feuille de papier 2 ou 3 cellules du foie
Recherche du glucose dans des cellules musculaires :
-
Broyer un fragment de 20 g de blanc de poulet dans de l’eau distillée
Filtrer
Récupérer le filtrat et tester la présence de glucose
Faire les témoins nécessaires.
Photographies de cellules de foie
Cellules de foie de Lapin colorées à l’eau iodée X 400
Photo Didier Pol
Cellules de foie de Lapin colorée à l’eau iodée X 1000
Photo Didier Pol