Une matière colorante est une substance qui, en - Physique
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Thème 1 : Observer Chapitre 2 TP – Extraction et chromatographie de la chlorophylle La chlorophylle est un pigment présent dans toutes les plantes vertes sur Terre. C’est grâce à cette molécule que la plante est capable de réaliser la photosynthèse, c'est à dire la préparation de glucose à partir de molécules organiques simples (eau et dioxyde de carbone) sous l’action de la lumière visible. La chlorophylle est contenue dans les chloroplastes, de minuscules organites situés à l'intérieur de chacune des cellules d'une plante verte, essentiellement dans les feuilles. Ce que l’on nomme couramment chlorophylle est en réalité un mélange de plusieurs molécules de structures chimiques très proches. Les chlorophylles a et b (voir figures ci-contre) sont les plus abondantes chez les plantes supérieures et algues vertes, en proportions variables suivant l’espèce. Toutes les plantes vertes contiennent les chlorophylles, certaines en possédant une forte concentration dans les feuilles, comme les épinards. Chlorophylle a Chlorophylle b Objectifs du TP: Extraire la chlorophylle des feuilles d’épinards Réaliser la chromatographie sur couche mince de la chlorophylle Analyser le chromatogramme obtenu I - Extraction de la chlorophylle Protocole expérimental Placer environ 4 ou 5 feuilles d’épinards frais hachés dans un mortier ; Ajouter 2 spatules de sable de Fontainebleau et 25 mL d’éthanol ; Broyer jusqu’à ce que le solvant soit vert foncé, mettre le mortier dans une cuve de glace ; Filtrer le broyat sur papier filtre. Le récipient de récupération du filtrat doit être entouré de papier aluminium. Le filtrat obtenu doit être d’un vert limpide. Exploitation de l'expérience 1. Expliquer pourquoi l’éthanol prend une couleur vert foncé. 2. Faire ci-dessous le schéma détaillé de la filtration. II - Chromatographie du filtrat obtenu Le filtrat vert foncé d’extraction contient différentes espèces chimiques, notamment les molécules de chlorophylle a et b. L’analyse de ce mélange peut-être réalisée par chromatographie sur couche mince (CCM) en utilisant comme éluant le mélange suivant de solvants : éther de pétrole/éther diéthylique (40/60 en volume). La plaque de chromatographie utilisée est une plaque d'aluminium recouverte d'une couche de silice (partie blanche). Protocole expérimental Tracer un trait horizontal à environ 1,5 cm du bord inférieur, au crayon de papier. Réaliser un dépôt sur la ligne de dépôt pour chaque filtrat à l’aide d’une pipette pasteur. La couleur du dépôt doit être bien foncé, sinon concentrer les dépôts (réaliser des spots au même endroit, en séchant à la main entre chaque spot). Déposer délicatement le papier dans la cuve et laissez le solvant monter par capillarité jusqu’à environ 1 cm du bord supérieur. Il est important de ne pas bouger le flacon jusqu'à la fin de l'élution. Sortir la plaque et marquer le front de l'éluant à l’aide d’un trait au crayon de papier (c’est à dire l’endroit où s’est arrêté le solvant) ; entourer avec soin les taches colorées. Exploitation 3. Schématiser le dispositif de chromatographie en précisant le vocabulaire : plaque à chromatographie, ligne de dépôt, éluant, cuve à chromatographie sur couche mince. 4. Dessiner le chromatogramme ci-dessous en précisant les couleurs observées (les colorants sont photosensibles, les couleurs disparaissent en 2h). 5. Les chlorophylles sont-elles les seules molécules colorées présentes dans les feuilles d'épinards ? Justifier. 6. On voudrait identifier les espèces chimiques responsables des taches jaunes. On fait l'hypothèse que l'une d'entre elles correspond au carotène (molécule représentée ci-dessous). Comment pourrait-on procéder pour tester cette hypothèse ?
