Chap 1 TP 2 : CHROMATOGRAPHIE PRINCIPE DE LA CHROMATOGRAPHIE La chromatographie, d’abord appliquée aux substances colorées (du grec khroma = couleur) permet la séparation de plusieurs constituants d’un mélange lors de leur migration sur un support fixe (phase stationnaire). Les constituants sont entraînés par une phase mobile (éluant) qui monte par capillarité (comme dans un buvard) sur le support fixe. La montée de l’éluant le long de la phase stationnaire sépare les constituants du mélange en fonction de leur différence d’affinités vis à vis du support ou de l’éluant. Si l’espèce A est plus soluble dans l’éluant que l’espèce B, elle sera entraînée plus vite, alors que l’espèce B, plus retenue par la phase stationnaire montera moins vite. On peut ainsi séparer les deux constituants. I/ ÉTUDE DES COLORANTS ALIMENTAIRES Réalisation des chromatographies sur papier de solutions aqueuses de colorants (jaune, vert et bleu). MODE OPERATOIRE Réaliser les opérations suivantes avec les deux éluants suivants : Éluant Composition 1 2 Éthanol Eau salée à 20 g/L a. Dans un bécher, verser l'éluant (environ 1 cm en hauteur), puis couvrir d’un couvercle. b. Préparer le papier Whatman en traçant un trait fin, au crayon à papier, à 1,5 cm du bas. c. Sur cette ligne, disposer à l’aide d’un pic à apéritif (un pour chaque colorant !), un point pour chaque colorant jaune, vert et bleu. Renouveler une fois l’opération. Laisser sécher. d. Introduire le papier dans le bécher en le faisant tenir avec un morceau de fil de cuivre. Attention, les dépôts ne doivent pas tremper dans le solvant ! Replacer le couvercle. e. Lorsque la plaque est imbibée jusqu’à 1 cm du haut environ, la retirer du bécher puis la sécher : le résultat obtenu est appelé le « chromatogramme ». Q1) Conclure sur le choix de l’éluant pour réaliser une chromatographie des colorants alimentaires. ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. Q2) Ces colorants sont-ils constitués d’une seule espèce chimique colorée ou sont-ils des mélanges d’espèces chimiques colorées ? De combien d’espèces chimiques colorées est constitué le colorant vert ? ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. II/ CHROMATOGRAPHIE DE MÉDICAMENTS Problème : Mme Colette Stérole désire prendre rapidement un médicament pour soigner une fièvre. Elle dispose d’un médicament contre les douleurs et fièvres : l’Actron®. Elle n’a plus la boîte ni la notice. Elle doit être très vigilante car elle est allergique à l’aspirine. Peut-elle prendre de l’Actron ? Nous allons identifier le(s) principe(s) actif(s) de ce médicament en réalisant une chromatographie sur couche mince. Dans la Chromatographie sur Couche Mince (C.C.M) la phase stationnaire est un gel de silice (SiO2) ou d’alumine (Al2O3) déposé sur un support rigide (feuille métallique). MANIPULATION Manipuler les plaques CCM par la tranche pour éviter les traces de doigts ! 1. Sur une plaque de CCM, tracer avec soin (sans appuyer) la ligne de base à 1,5 cm du bas de la plaque. 2. Récupérer une cuve à chromatographie placée sous la hotte. 3. Vérifier que la ligne se situe bien au dessus du niveau d'éluant dans la cuve. 4. Réaliser trois dépôts à l’aide de trois capillaires (un pour chaque dépôt). Garder la pointe bien verticale et répéter des dépôts brefs pour obtenir des taches fines et concentrées. Un "d’Aspirine" dans l’éthanol. Un de "Doliprane" dans l’éthanol. Un "d’Actron" dans l’éthanol 5. Placer délicatement la plaque dans la cuve et laisser migrer l’éluant jusqu’à environ 1 cm du bord supérieur de la plaque (vérifier régulièrement la migration, elle peut durer plus de 10 min). 6. Pendant l'élution, ne pas faire bouger la cuve. 7. Sortir la plaque et la sécher la plaque à l’aide d’un sèche-cheveux. Le chromatogramme obtenu n’est pas visible à l’oeil nu ! Il faut donc révéler les taches. 8. Éclairer la plaque à l’aide d’une lampe UV en la tenant avec une pince en bois et entourer au crayon de papier les taches qui apparaissent. Reproduction du chromatogramme : Lecture du chromatogramme : ……………………………………………………………………..………………………… ……………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………..…………………………… ……………………………………………………………………..………………………… ……………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………..……………………………… …………………………………………………………………..………………………… …………………………………………………………………………………………… Conclusion : ………………………………………………………..……………………………………… ………………………………………………………..………………………………………
