Electrophorèse SDS PAGE : principe et exemple d'application en STL Biotechnologies
L'objectif de cet article est de :
recenser quelques ressources (vidéos, animations, diaporamas...) permettant d'appréhender le principe de cette
technique électrophorétique,
présenter des ressources en anglais permettant d'envisager une utilisation dans la cadre de la LV technologique
de section STL Biotechnologies,
présenter un exemple d'application pratique en STL Biotechnologies, portant sur l'identification variétale de
protéines de tissu musculaire de poisson.
Principe et mise en oeuvre de la SDS-PAGE
L'électrophorèse SDS-PAGE (électrophorèse en gel de polyacrylamide contenant du dodécysulfate de sodium) est
une technique consistant à faire migrer des protéines dans un gel, sous l'influence d'un champ électrique, permettant
ainsi leur séparation.
Voir le diaporama de présentation de la SDS-PAGE (en anglais) utilisé au lycée Senghor lors de l'échange
Comenius sur la protéomique :
<a href="sites/biotech.spip.ac-rouen.fr/IMG/zip/SDS-PAGE.pps.zip" title='Zip - 1.7 Mo' type="application/zip">
SDS-PAGE Principle
La manipulation nécessite :
une cuve à électrophorèse + un générateur électrique,
un gel de polyacrylamide (précoulé en cassette ou à préparer) contenant des puits pour dépôt,
des solutions tampons adaptées au gel.
Le gel de polyacrylamide est créé par la polymérisation d'acrylamide et de bis-acrylamide, en présence d'agents de
polymérisation (TEMED, persulfate d'ammonium par exemple). Plus la concentration en acrylamide est élevée, plus
les pores seront petits et plus les molécules seront freinées dans le gel.
Comme toute technique électrophorétique, la SDS-PAGE permet la séparation des particules se fait en fonction de
leur charge électrique et pour des charges identiques, en fonction de leur taille.
Dans le cas de la SDS-PAGE, la séparation est réalisée en conditions dénaturantes en raison de l'ajout de SDS
(dodécylsulfate de sodium) : le SDS est un détergent fort possédant une longue queue hydrocarbonée hydrophobe
et une extrémité chargée négativement. Il intéragit avec les protéines par sa portion hydrocarbonée en liant leurs
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