Stratégies de purification de complexes supramoléculaires

Stratégies de purification de
complexes supramoléculaires
•Electrophorèse
•Purification par affinité en tandem : TAP-tag
P C P

Electrophorèse des protéines
Conditions dénaturantes (SDS-PAGE)
Conditions « natives (CN et BN-PAGE)
P C P

P C P
Electrophorèse des Protéines
•En conditions dénaturantes sur gel 1D de
polyacrylamide (SDS – PAGE) : migration
proportionnelle à la taille (nb charges /unité de
longueur)
•Le gel 2D (pI = première dimension) permet de
visualiser des différences de migration dues à des
modifications post-traductionnelles (phosphorylation)
•Estimation de taille et de pureté
•Possibilité de séparation en conditions natives

Gels 2D – Expression différentielle
1 - 3: expression augmentée dans le tissu cancéreux
4 - 11: expression diminuée dans le tissu cancéreux
Tissu sain Tissu cancéreux
P C P

Cas de complexes non caractérisés
Séparation à deux dimensions du complexe
supramoléculaire en électrophorèse
Applications :
* complexes chez E. coli et Pseudomonas aeruginosa
* complexe des deshydrogénases à NADH de la
membrane mitochondriale interne chez S. cerevisiae
P C P