Préparation des 2 gels :
Gel de migration 15% il permet la séparation des molécules :
- acrylamide + Bis acrylamide
- Tris-HCl 1,5 M pH 8,8
- eau distillée
Au dernier moment ajouter
-PSA : un indicateur de polymérisation
-Du TEMED N, N, N’, N’- tétraméthylénediamin : accélérateur de
polymérisation (il est en solution)
D’abord, on met un peigne dans l’electrohorèse pour tracer la limite du gel
de migration puis verser une gélose pour éviter les fuites du gel et verser le
gel de migration immédiatement avant qu’il se gélifier. Entre temps on
prépare le gel de concentration 5% :
-acrylamide + Bis acrylamide
-Tris-HCl 0,5 M pH 6,8
-Eau distillée
-TEMED
-PSA (persulfate d’ammonium) a 10%
Apres la polymérisation du gel de migration verser le gel de concentration
sur le premier et placer le peigne profondément laissé polymériser 15 a 20
min.
Dosage :
1 ml de l’extrait de feuilles + 3 ml de Bradford dans 2 tubes.
20 µl de l’extrait de graines + 3 ml de Bradford + dilution 1/5 80 µl de l’eau
dans deux tubes. Après agiter les dans un agitateur.
Enlever le peigne, retourner l’appareil puis a l’aide d’une seringue déposer
les échantillons après avoir calculé la quantité a déposer.
VI. Résultat :