Microscopie en champ large

Université Paris Descartes
L3 - Licence Professionnelle
«Industries chimiques et Pharmaceutiques –Option Biotechnologie»
Microscopie Confocale
Principes de base & Applications en Biologie Cellulaire
Bruno SAUBAMEA
EA3621 – Service de Biologie Cellulaire
Service Commun d’Imagerie Cellulaire et Moléculaire

Principe de la microscopie
Former une image de l’objet grâce à des photons ou des électrons
Agrandir cette image grâce à des lentilles
Pourquoi faire de la microscopie ?
Limite de résolution ~0.1 mm

Principe de la Microscopie
Microscopie en transmission Microscopie en émission
Microscopie optique traditionnelle
&
Transmission Electron Microscopy
(TEM)
Origine du contraste
Différences d’absorption
Microscopie de fluorescence
&
Scanning Electron Microscopy
(SEM)
Origine du contraste
Différences d’émission

Microscopie optique
Transmission Emission
(fluorescence)
Fond clair
Fond noir
Contraste de phase
Champ large
Confocal

Grossissement et résolution en microscopie optique
G = γob x Goc
Grossissement
n
α
α
λ
sin
61.0
0⋅
×= n
R
Résolution
Lentilles
(focale de l’objectif)
Lentilles
(NA de l’objectif)
+
Rayonnement
(longueur d’onde) 45.1sin
500
=⋅=
=
α
λ
nNA nm nmR210
0=
1500
max ≈
G