PROJET DE RECHERCHE Etude des mécanismes de

2014
Docteur Charlotte Ngô
Praticien Hospitalo-universitaire
Chirurgie cancérologique gynécologique et
du sein
Hôpital Européen Georges Pompidou
FSF
91 boulevard de Sébastopol
75002 Paris
PROJET DE RECHERCHE
Etude des mécanismes de chimiorésistance dans le cancer du sein

Docteur Charlotte Ngô
Chirurgie cancérologique gynécologique et du sein - Hôpital Européen Georges Pompidou
FSF - 91 boulevard de Sébastopol - 75002 Paris
Contact : Marie DELANOË
[email protected]
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Étude des mécanismes de chimiorésistance :
Étude de la régulation par les adipocytes de l'expression tumorale
des pompes d'efflux dans le cancer du sein
Prise en compte du rôle de l'obésité
1 - RESUME DU PROJET
Le cancer du sein est le premier cancer féminin dans le monde. En France, on compte près de 50 000
nouveaux cas chaque année avec 11 000 décès (chiffres de l'Institut National du Cancer 2012). Par
ailleurs, la prévalence globale du surpoids et de l'obésité augmente. Aujourd'hui, plus de 30% de la
population mondiale est concernée par un surpoids et un adulte sur 10 est obèse (Indice de Masse
Corporelle IMC > 30 kg/m²) [1]. En France, le taux d'obésité moyen est de 14.5% en 2012, il est de
18.7% chez les adultes de plus de 65 ans [2]. Il est aujourd'hui démontré que l'obésité est un facteur
de risque de cancer du sein et un facteur de mauvais pronostic [3]. Environ 10% des cancers du sein
sont directement attribuables à l'obésité. Il est prouvé qu'une femme obèse atteinte d'un cancer du
sein a un risque de mortalité majoré de 30% par rapport à une femme non obèse, ceci serait en
partie lié à une moins bonne réponse à la chimiothérapie.
Au vu de ces constats, il est essentiel de décrypter les mécanismes par lesquels l'obésité altère le
pronostic des femmes atteintes de cancer du sein, afin de proposer des stratégies différentes à ces
patientes.
1-1 JUSTIFICATION SCIENTIFIQUE
Valider in vivo l'hypothèse selon laquelle les cellules graisseuses pourraient contribuer à la
chimiorésistance des cancers du sein chez les patientes obèses.
1-2 INDICATION
Cancer du sein opéré. Patientes obèses et non obèses.
1-3 MÉTHODOLOGIE RETENUE
Il s’agit d’une étude rétrospective sur des échantillons de tumeurs mammaires provenant de
patientes opérées d'un cancer du sein. L'étude de l'expression des pompes d'efflux se fera par
immunohistochimie (étude de la morphologie des cellules destinée à mettre en évidence certains
constituants cellulaires et tissulaires sur des coupes de tissus).

Docteur Charlotte Ngô
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FSF - 91 boulevard de Sébastopol - 75002 Paris
Contact : Marie DELANOË
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1-4 OBJECTIFS
Objectif principal : comparer la quantité des pompes d'efflux présentes à la surface des cellules
cancéreuses mammaires chez des patientes obèses et non obèses.
Objectifs secondaires : corréler les niveaux d'expression des pompes d'efflux aux caractéristiques des
patientes et des tumeurs.
1-5 CRITÈRES DE JUGEMENT
Critère de jugement principal : mesure semi-quantitative de l'immunomarquage pour les protéines
impliquées dans l'efflux (mesure de la quantité de transporteurs présents à la surface des cellules par
la quantification du nombre de cellules marquées et de l'intensité du marquage).
Critères de jugement secondaires: caractéristiques cliniques des patientes, caractéristiques
biologiques des tumeurs.
1-6 PRINCIPAUX CRITÈRES D’INCLUSION
 Patientes âgées de plus de 18 ans, ayant donné leur consentement pour l'utilisation de leurs
échantillons.
 Cancer du sein opéré avec échantillons tissulaires conservés en paraffine.
1-7 PRINCIPAUX CRITÈRES DE NON INCLUSION
 Patiente enceinte
 Patiente ayant eu de la chimiothérapie avant d'être opérée
1-8 COHORTE CONCERNÉE
 patientes (20 femmes non obèses et 20 femmes obèses)
2 - JUSTIFICATION DE L’ETUDE
L'augmentation du risque de cancer observée chez les personnes obèses est liée à des modifications
conséquentes à l'expansion du tissu graisseux et qui sont favorables au développement et à la
croissance des tumeurs [4-8]. Il a été montré que les cellules composant la glande mammaire de
patientes obèses proliféraient plus que les cellules de patientes de poids normal [9-11]. La
progression tumorale est le produit d'un dialogue entre les cellules tumorales et leur environnement
[12]. Les adipocytes (cellules graisseuses) représentent le composant majoritaire du
microenvironnement du cancer du sein.

Docteur Charlotte Ngô
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L'équipe du Pr Catherine Muller de l'Institut de Pharmacologie et de Biologie Structurale a montré
l'existence d'un dialogue entre les cellules graisseuses et les cellules tumorales donnant lieu à des
modifications des deux types cellulaires [13-17]. Ces modifications stimulent les propriétés invasives
des cellules tumorales [18]. Il a été montré chez la souris et chez l'humain que l'obésité induisait une
résistance à la chimiothérapie de certains types de cancers du sein [9-11, 19]. En effet, les cellules
tumorales mises en culture avec des cellules graisseuses deviennent résistantes à la chimiothérapie
par augmentation de l'efflux des drogues (efflux: mécanisme par lequel les drogues sont expulsées
hors de la cellule), ce mécanisme est augmenté si les cellules graisseuses proviennent de sujets
obèses. L'expulsion des drogues hors de la cellule se fait grâce à des transporteurs, également
appelés pompes d'efflux, situés à la surface de la cellule. Parmi ces transporteurs, on distingue entre
autres: la glycoprotéine P, la BCRP (breast cancer resistance protein) et la LRP (Lung resistance
protein).
Des études cliniques ont clairement établi un lien entre la surexpression de ces pompes et une
résistance à la chimiothérapie avec un pronostic altéré dans le cancer du sein et dans le cancer du
poumon [20-22]. Les travaux récents montrent que l'expression de ces transporteurs est augmentée
in vitro dans les cellules tumorales cultivées avec les cellules graisseuses provenant de souris obèses.
Ces données doivent être confirmées in vivo sur des échantillons tumoraux humains.
L'objectif de notre étude est de confirmer ces hypothèses en étudiant l'expression des pompes
d'efflux par les cellules tumorales au front invasif, site de contact avec les adipocytes péri-tumoraux,
et leur régulation dans l'obésité.
3 - OBJECTIFS DE L’ÉTUDE
 Objectif principal
L’objectif principal est de comparer l'expression par les cellules tumorales des pompes d'efflux LRP,
BCRP et PgP chez des patientes obèses et non obèses opérées d'un cancer du sein.
 Objectifs secondaires
Les objectifs secondaires sont de corréler le taux d'expression de ces pompes aux caractéristiques
cliniques et biologiques dans les deux groupes de patientes.
4 - MÉTHODOLOGIE
a) Plan experimental
Etude préliminaire rétrospective sur des patientes ayant donné leur consentement pour la
conservation de leurs échantillons biologiques et l'utilisation de leurs données personnelles. L'étude
consiste à évaluer l'expression des protéines LRP, BCRP et PgP par immunohistochimie sur des

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échantillons tumoraux conservés en paraffine.
b) Population
 Critères d’inclusion :
 Patientes âgées de plus de 18 ans ;
 Ayant été opérée d'un cancer du sein infiltrant entre le 01/01/2013 et le 31/12/2014
 Patientes ayant donné leur consentement pour la conservation et l'utilisation de leurs
échantillons biologiques et de leurs données personnelles.
 Traitement chirurgical premier
 Groupe de patientes non obèses: BMI < 25
 Groupe de patientes obèses: BMI > 30
 Critères de non inclusion :
 Chimiothérapie ou hormonothérapie précédent l'intervention ;
 Grossesse en cours
c) Durée de l’étude
Durée en mois
Sélection des patientes et recueil des données
2 mois (en cours)
Réalisation des techniques d'immunohistochimie
2 mois
Interprétation et exploitation des résultats
2 mois
Durée totale
6 mois
d) Techniques
Les immunomarquages seront réalisés sur des échantillons tumoraux inclus en paraffine, sur des
coupes montrant le front invasif, c'est-à dire montrant la limite entre les cellules tumorales et le tissu
adipeux péritumoral.
e) Critères d’évaluation
 Critère d’évaluation principal
Evaluation semi-quantitative de l'immunomarquage pour les protéines LRP, BCRP et PgP par le score
suivant, prenant en compte à la fois l'intensité du marquage et la proportion de cellules marquées: -,
absent; +, faible; ++, modéré; +++, fort.