DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE DU PALUDISME
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PALUDISME OU MALARIA • Le paludisme ou malaria est une atteinte des globules rouges due à des Protozoaires sanguicoles, les Plasmodiums • Maladie fébrile et hémolysante Transmis par la piqûre nocture de l’anophèle femelle Paludisme: 5 espèces de Plasmodium • Plasmodium falciparum : seule espèce potentiellement mortelle diagnostic d’urgence, répartition ubiquitaire, surtout Afrique, • Plasmodium vivax : très fréquent en Asie et en Amérique, • Plasmodium ovale : rare, présent surtout en Afrique de l ’Ouest et Centrale • Plasmodium malariae : fièvre quarte bénigne, rare • Plasmodium knowlesi : Malaisie +/-Chine Paludisme: géographie Zones d ’endémie du paludisme à Plasmodium falciparum Paludisme: épidémiologie Données OMS 2,3 milliards de personnes (41% pop monde) 300-500 millions de cas par an 1 millions de décès par an (enfants, Afrique) France (paludisme d’importation) 5000 à 7000 cas / an 85 % Plasmodium falciparum 20-30 morts/ an Cycle sexué chez l’anophèle Cycle asexué intra-hépatique Asymptomatique Incubation FOIE ANOPHELE Schizontes Libération de sporozoïtes Oocyste Ookinète Merozoïtes Trophozoïtes SANG Gamètes Schizontes Gamètocytes Paludisme Maladie Cycle asexué intra-erythrocytaire Signes cliniques Phase de primo-invasion QUEL QUE SOIT L’HEMATOZOAIRE • Fièvre très élevée, souvent anarchique, céphalées importantes, syndrome pseudo-grippal • Troubles digestifs : nausées, diarrhées (embarras gastrique fébrile) signes non spécifiques L'accès pernicieux ou grave • P. falciparum uniquement (P. knwolesi) • Survient chez : sujets non ou mal immunisés Voyageurs Enfants de 4 mois à 6 ans • Début : Progressif : secondaire à un accès simple Brutal : coma d'emblée • Evolution : † dans 30% des cas malgré traitement Paludisme : diagnostic Y penser devant toute fièvre + retour d’une zone d’endémie palustre depuis moins de 2 mois • Examens biologiques d’orientation : Thrombopénie +++ Anémie variable Leucopénie, VS basse, CRP élevée Transa, LDH modérément élevées • Rx thorax : le plus souvent normale • ECBU : normal • Hémocultures : stériles 99 % des accès palustres à P. falciparum se déclarent dans les 2 mois qui suivent le retour de la zone d’endémie Diagnostic : Objectif : - présence ou absence de plasmodium - si oui est-ce Plasmodium falciparum Quand : Y penser devant toute fièvre + retour d’une zone d’endémie palustre depuis moins de 2 mois. Comment : au moins 2 techniques Frottis mince (lecture de 20 minutes) (sensibilité : 100 à 300 parasites /µL) +/- bandelettes antigéniques (détection HRP2) (sensibilité : 50 à 100 parasites /µL) +/- goutte épaisse (si microscopiste expérimenté) (sensibilité : 10 à 20 parasites /µL) si doute PCR (sensibilité : 0, 05 parasite /µL) Au moindre doute refaire un prélèvement 24 h ou 48 h après si la fièvre persiste sans diagnostic précis. Prélèvements : • Sang veineux ou sang périphérique prélevé par piqûre digitale (microlance), • A faire le plus rapidement possible. Techniques : • Mise en évidence du parasite – Frottis sanguin – Goutte épaisse – Test à l’acridine orange (QBC) • Recherche d’antigène circulant sang (bandelettes antigéniques) • Recherche de l’ADN de Plasmodium = PCR • (Sérologie) 1/ Mise en évidence du parasite • TECHNIQUE DU FROTTIS MINCE Petite goutte de sang déposée au bout de lame et étalée finement avec le petit côté d’une autre lame Plasmodium falciparum Frottis mince trophozoïtes Se : 100-300 parasites/µl gamétocyte Plasmodium vivax trophozoïte gamétocyte Schizonte âgé Plasmodium ovale trophozoïte schizonte gamétocyte Plasmodium malariae trophozoïte schizonte gamétocyte • TECHNIQUE DE LA GOUTTE EPAISSE Une grosse goutte de sang est déposée au centre d’une lame ; avec l’angle d’une autre lame, on défibrine le sang par des mouvements circulants visant à étaler la goutte sur un 1 cm de diamètre environ. DIAGNOSTIC POSITIF sur goutte épaisse Aspect des hématozoaires Se : 10-20 parasites/µl • Mise en évidence du parasite: technique du QBC Se : 10-20 parasites/µl 2/ Recherche d’antigène circulant sang • détecte - l’HRP-2, Ag spécifique du Pl. falciparum - p-LDH, Ag spécifique du genre Plasmodium et de P. vivax • ne détecte pas : - les faibles parasitémies - les souches dépourvues de HRP-2 Se : 50-100 parasites/µl Recherche d’antigène circulant Infection par Pl. falciparum . 3- Recherche de l’ADN de Plasmodium par PCR • Se : 0,01 – 0,005 parasites/µl • La plus sensible mais ne répond pas au diagnostic d’urgence • Détection d’infections mixtes • Intérêt : une PCR négative écarte le diagnostic d’un paludisme Diagnostic leishmaniose viscérale Phlébotome vecteur leishmanies • 2 à 5 mm • Nocturne Leishmaniose viscérale • Diagnostic de présomption FNS = pancytopénie • Diagnostic – parasitologique • Prélèvement de moelle osseuse ou de sang – Examen direct du frottis (MGG) : parasite intracellulaire à l ’intérieur de monocytes/macrophages Forme amastigote – Culture sur gélose au sang (milieu NNN) forme promastigote flagellée et mobile – Détection de l’ADN parasitaire par PCR Diagnostique microscopique Forme amastigote Forme promastigote • Diagnostic immunologique – Antigènes nombreux préparés à partir des formes promastigotes de culture de leishmania – Méthodes • Immunofluorescence • ELISA • Immunoempreinte Attention au faux négatifs et faux positifs Leishmanioses cutanées de l’ancien monde Leishmanioses cutanées du nouveau monde DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE DES FILARIOSES Eléments d’orientation: - Hyperéosinophilie - Augmentation des IgE totales 1- FILARIOSES avec microfilaires SANGUICOLES • Loase : Loa loa - périodicité diurne • Filarioses lymphatiques Wuchereria bancrofti : périodicité nocturne Loa loa (Afrique) 10-15 mm CHRYSOPS Filarioses lymphatiques • Diagnostic microscopique - mettre en évidence des microfilaires - L’heure du prélèvement est fonction de la périodicité de l’émission des microfilaires. TECHNIQUES - Frottis sang - Gouttes épaisses - Méthode de concentration technique de Knott (1 ml sang + 9ml eau formolée à 2 %) • Diagnostic sérologique Microfilaires dans le SANG Wuchereria bancrofti Loa loa 300 µm 2- ONCHOCERCOSE du à Onchocerca volvulus 2-3 mm ONCHOCERCOSE du à Onchocerca volvulus - Suc dermique sacrification au vaccinostyle sans faire saigner, réchauffement de la zone de prélèvement lampe à infra-rouge, en pays d’endémie, exposition au soleil de la zone. - Biopsie cutanée exsangue : prélèvement de peau, ciseaux courbes ou pince à sclérotomie, sans faire saigner - Nodule Diagnostic filariose Microfilaires Onchocerca volvulus Nodule cutané 300 µm DERME 3 - FILAIRE DE MEDINE OU DRACUNCULOSE Diagnostic clinique +++ ulcération cutanée membres inférieurs Diagnostic biologique les microfilaires sont recherchées dans le liquide qui exsude de la plaie où émerge la filaire
