Evaluation d`un nouveau test rapide pour la détection de l`antigène

MICROBIOLOGIA MEDICA, Vol. 25 (3), 2010
TEST RAPIDE RECHERCHE ANTIGENE URINARIO L. PNEUMOPHILA
Evaluation d’un nouveau test rapide pour la détection de l’antigène de
sérogroupe 1 de Legionella pneumophila dans les urines
1
1
1
Gino Ciarrocchi , Marco D’anzeo , Elisabetta Farnocchia , Maria Enrica Cimarelli
1
S.O. Laboratorio analisi, Sierologia, A.O. Ospedali Riuniti, Ancona
2
S.O. Broncopneumologia, A.O. Ospedale Civile, Jesi
Mots clés: Légionellose, Spécificité, Sensibilité, test immunochromatographique
2
Evaluation d’un nouveau test rapide pour la recherche de l’antigène urinaire de Legionella pneumophila de
sérogroupe 1.
RESUME
Pour le diagnostic de la légionellose, un nouveau test rapide immunochromatographique (V-tesT® CORIS BioConcept) pour la détection
de l’antigène de Legionella pneumophila de sérogroupe 1 dans les urines a été évalué sur 21 échantillons de patients malades de la
légionellose et sur 45 patients porteurs d’autres infections respiratoires. Les résultats ont été comparés à ceux obtenus par un test de
référence déjà commercialisé (BinaxNOW ® Legionella - Binax). La sensibilité globale est de 90.4% pour les deux tests, la concordance
de 100%, et la spécificité de 100% également. En conclusion, le V-tesT® CORIS semble être un outil de diagnostic rapide et approprié
pour la légionellose.
INTRODUCTION
La légionellose, ou maladie du légionnaire (ML) est une
forme sévère de pneumonie due à une infection par
Legionella pneumophila, non distinguable cliniquement
d’autres infections pulmonaires. La maladie est
transmise principalement par des aérosols contaminés,
des sources humides, comme des tours de
refroidissement ou des installations pour l’air
conditionné. Legionella pneumophila est responsable de
2 à 5% des pneumonies communautaires (CAP) et de 5
à 20% de celles nosocomiales. (1).
L’hospitalisation du patient est décidée en fonction de la
gravité du cas, avec éventuellement un recours aux
soins intensifs. D’un point de vue épidémiologique,
Legionella pneumophila de sérogroupe 1 est
responsable en Europe et aux Etats Unis de 90 à 95%
des cas de ML, alors qu’en Australie et en Nouvelle
Zélande, c’est la Legionella longbeachae qui a la
prévalence épidémiologique (1, 8).
La sévérité fréquente des cas et les spécificités
symptomatiques rendent indispensables un diagnostic
fiable et rapide. Toutefois, dans le cas des légionelloses,
la certitude du diagnostic dépend de nombreux facteurs,
parmi lesquels on retrouve la façon dont s’exprime
l’infection, la pertinence des analyses effectuées et la
qualité des tests utilisés dans ce but. Le test rapide
immunochromatographique (IC) est désormais reconnu
en clinique pour sa sensibilité élevée, sa presque
absolue spécificité et la rapidité d’exécution (3, 4, 5, 6, 7,
9, 10).
L’emploi du test IC, combiné à la recherche sérologique
des IgM anti-Legionella pneumophila de sérogroupe 1
représente le schéma analytique le plus efficace dans le
diagnostic de la ML (1, 2, 3, 4).
Le but de notre travail a été d’évaluer l’efficacité
diagnostique
d’un
nouveau
test
immunochromatographique utilisé pour la recherche des
antigènes de Legionella pneumophila de sérogroupe 1
dans des échantillons d’urine non concentrée
appartenant à des patients atteints de façon certaine de
légionellose.
Présentation de l’étude
Un total de 21 échantillons d’urine de patients hommes
et femmes adultes avec un diagnostic confirmé de
légionellose d’après des critères cliniques habituels
furent examinés rétrospectivement pour la recherche
des antigènes urinaires de Legionella pneumophila de
sérogroupe 1 au moyen d’un nouveau test rapide
récemment mis au point, basé sur la technique IC
®
(Legionella V-TesT – CORIS BioConcept, Belgique,
distribué en Italie par Alifax). Les patients sélectionnés
montraient des cas cliniques de pneumonie de
différentes gravités, grâce à l’imagerie par infiltration
pulmonaire prévalente et avec un ou plusieurs des
signes cliniques suivants : toux irritative, vomissements,
diarrhées, confusion mentale, fièvre, maux de tête,
hyponatrémie et une hypophosphatémie.
Les échantillons d’urines positifs pour les antigènes de
Legionella pneumophila de sérogroupe 1 ont été au
préalable examinés grâce à un test rapide IC analogue
®
(BinaxNOW Legionella, Binax – USA) puis conservés à
-30°C jusqu’au moment de l’étude. Les échantillons ont
été réexaminés simultanément avec les deux tests et la
lecture a été effectuée après 15 minutes puis répétée
après 30 et 60 minutes comme indiqué dans les
instructions d’emploi pour les deux tests.
Le test CORIS se base sur l’usage d’un dispositif avec
une membrane contenant des anticorps mono et
polyclonaux anti-Legionella pneumophila conjugués à
des particules d’or colloïdal ; dans la partie supérieure
de la membrane, des anticorps anti Legionella
pneumophila et un anticorps de contrôle (contrôle de
migration) sont fixés.
Dans la partie apicale du dispositif, une quantité précise
d’urine non concentrée est introduite (110µl), elle
diffusera par gravité le long de la membrane. La
présence d'une bande de couleur, d'intensité variable
dans l'emplacement spécifique pour l’échantillon indique
un résultat positif. Pour que le test soit considéré comme
valide, une seconde bande doit être visible au niveau du
contrôle de migration.
®
Le
test
BinaxNOW
est
un
test
immunochromatographique dans lequel les anticorps de
lapin anti-Legionella de sérogroupe 1 et les anticorps
anti-espèce sont absorbés sur deux lignes dans une
membrane de nitrocellulose (ligne du patient et ligne de
contrôle. Un prélèvement est effectué dans l’échantillon
Corresponding author: Gino Ciarrocchi
S.O. Laboratorio analisi, Sierologia,A.O. Ospedali Riuniti,Ancona
Tel. 071-5964251; Fax 071-5964638
E-mail: [email protected]
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TEST RAPIDE RECHERCHE ANTIGENE URINARIO L. PNEUMOPHILA
Tableau 1 : Sensibilité et spécificité du V-Test CORIS et BinaxNOW après incubation de 15, 30 et 60 minutes
V-TestT
CORIS
Test
BinaxNOW
Durée
d’incubation
15 minutes
30 minutes
60 minutes
15 minutes
30 minutes
60 minutes
Positifs
15 (71,4%)
17 (80,9%)
17 (80,9%)
14 (66,6%)
14 (66,6%)
14 (66,6%)
d’urine puis inséré dans le dispositif du kit. Deux gouttes
de réactifs (tampon citrate/phosphate avec Tween 20)
sont ajoutées, elles permettent la migration des
éventuels antigènes le long de la membrane.
La présence d’une bande colorée, même de faible
intensité dans la position spécifique pour l’échantillon
indique un résultat positif. Pour ce test également, une
seconde bande doit être visible au niveau du contrôle.
Les résultats des 21 échantillons d’urine ont été
interprétés visuellement après 15 minutes, et d’après les
instructions d’usage pour les deux tests, la lecture a
également été répétée après 30 et 60 minutes. Lors de
la première lecture, le test CORIS a obtenu 15
échantillons avec une bande évidente (échantillons
positifs), 4 échantillons avec une bande de faible
intensité (positifs faibles) et 2 sans trace de bande
®
(échantillons négatifs); le test BinaxNOW a, lui, montré
14 échantillons avec une bande évidente (positifs), 5
avec une bande faible (positifs faibles) et 2 sans bande
(négatifs). En regroupant les résultats positifs et ceux
limites, la concordance totale entre les deux tests est de
100%. En effectuant la lecture après 30 et 60 minutes, le
test CORIS a montré 17 positifs et 2 positifs faibles et 2
négatifs; réciproquement, le test BinaxNOW maintient
les mêmes résultats que lors de la première lecture.
L’évaluation des résultats positifs et de ceux limites a
montré une sensibilité de 90,4% pour les deux tests. Les
45 échantillons des autres patients présentant d’autres
infections respiratoires ont tous été négatifs, pour les
deux tests, et ce, après une incubation de 15, 30 et 60
minutes, ce qui montre une spécificité de 100%.
(Tableau 1).
CONCLUSIONS
L’examen des 21 échantillons d’urine non concentrée et
le fait de considérer comme positif un échantillon
montrant une bande faiblement colorée que ce soit pour
®
le test CORIS comme pour le BinaxNOW ont montré
des niveaux de sensibilité analogues de 90,4%. Les
bandes positives faibles ont été relevées dans 4 cas
pour le test CORIS et dans 5 cas pour le test
®
BinaxNOW , après l’incubation de 15 minutes après
l’ajout de l’urine dans le dispositif. L’échantillon différent
était clairement positif pour le CORIS mais faible pour le
BinaxNOW après 15 minutes. La lecture fut répétée
après 30 et 60 minutes. La première différence dans les
résultats s’est confirmée justement après l’incubation de
30 minutes : deux des quatre échantillons initialement
faibles avec le V-tesT CORIS se sont transformés en
échantillons clairement positifs et le restèrent après 60
minutes, et réciproquement les cinq échantillons faibles
®
au test BinaxNOW le restèrent même après les lectures
successives. Les deux échantillons négatifs pour les
deux tests appartenaient à des patients montrant des
Positifs
faibles
4 (19,0%)
2 (9,5%)
2 (9,5%)
5 (28,3%)
5 (28,3%)
5 (28,3%)
Sensibilité (n=21)
Spécificité (n=45)
90,4%
90,4%
90,4%
90,4%
90,4%
90,4%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
symptômes cliniques mais avec une sérologie négative
dans la phase aigue et une séroconversion des IgM sur
le sérum convalescent (données non montrées). La
recherche de l’antigène urinaire s’est révélée négative à
plusieurs reprises au moment du premier diagnostic.
Les 45 autres échantillons de patients présentant
d’autres infections respiratoires, dont 10 avec une
infection à pneumocoques se sont tous révélés négatifs,
aux trois intervalles de lecture, pour les deux tests,
confirmant ainsi l’absolue spécificité du test de référence
®
et du V-tesT CORIS en évaluation.
L’excellente performance de ce dernier, même meilleure
en termes de lecture visuelle par rapport au
®
BinaxNOW , peut résider selon notre avis dans la
qualité immunologique, mais surtout dans la bonne
standardisation et la simplification des procédures, en
utilisant une quantité précise d’échantillon et dans la
diffusion par gravité sans ajout d’autres éluants ou
réhydratants.
®
En conclusion, le V-tesT CORIS s’est démontré; même
au tout début, un dispositif de diagnostic rapide et fiable,
présentant d’excellents niveaux de sensibilité et de
spécificité.
BIBLIOGRAPHIE
1. Den Boer JW, Yzerman FPF. Diagnosis of Legionella infection in
Legionnaires’ disease. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2004; 23: 871-8.
2. Diederen BMW, Kluytmans JAJW, Peeters M. Evaluation of Vircel
enzyme-linked immunosorbent assay and indirect immunofluorescence
assay for detection of antibodies against Legionella pneumophila. Clin
Vaccine Immunol 2006; 13(3): 361-4.
3. Dirven K, Ieven M, Peeters MF, et al. Comparison of three Legionella
urinary antigen assays during an outbreak of legionellosis in Belgium. J
Med Microbiol 2005; 54: 1213-6.
4. Diederen BMW, Bruin JP, Scopes E, Peeters MF, IJzerman EPF.
Evaluation of the Oxoid Xpect legionella test kit for detection of
Legionella pneumophila serogroup 1 antigen in urine. J Clin Microbiol
2009; 47 (7): 2272-4.
5. Guerrero C, Toldos CM, Yag?e G, et al. Comparison of diagnostic
sensitivities of three assays (Bartels enzyme immunoassay - EIA, Biotest
EIA, and BinaxNOW immunochromatographic test) for detection of
Legionella pneumophila serogroup 1 antigen in urine. J Clin Microbiol
2004; 42: 467-8.
6. Helbig JH, Uldum SA, L?ck PC, Harrison TG. Detection of Legionella
pneumophila
antigen
in
urine
samples
by
BinaxNOW
immunochromatographic assay and comparison with both Binax
Legionella urinary enzyme immunoassay (EIA) and Biotest Legionella
urine antigen EIA. J Med Microbiol 2001; 50: 509-16.
7. Helbig JH, Uldum SA, Bernander S, et al. Clinical utility of urinary
antigen detection for diagnosis of community-acquired, travel-associated,
and
nosocomial Legionnaires’ disease. J Clin Microbiol 2003; 41: 838-40.
8. Rojas A, Navarro MD, Fornés FE, et al. Value of serological testing for
diagnosis of legionellosis in outbreak patients. 2000; 38: 2738-9.
9. Yzerman EP, den Boer JW, Lettinga KD, et al. Sensitivity of three
urinary antigen tests associated with clinical severity in a large outbreak
of Legionnaires' disease in the Netherlands. J Clin Microbiol 2002; 40:
3232-6.
10. Wever PC, Yzerman EP, Kuijper EJ, Speelman P, Dankert J. Rapid
diagnosis of Legionnaires' disease using an immunochromatographic
assay for Legionella pneumophila serogroup 1 antigen in urine during an
outbreak in the Netherlands. J Clin Microbiol 2000; 38: 2738-9.
Corresponding author: Gino Ciarrocchi
S.O. Laboratorio analisi, Sierologia,A.O. Ospedali Riuniti,Ancona
Tel. 071-5964251; Fax 071-5964638
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