AT5 Orientation de 4 germes

AT5 Biotek
Orientation
de l’identification
de quatre germes
Yves DABAT Ste-Anne ANGLET
J1 : Microscopie
On étudie un mélange polymicrobien
présenté sur un BNO.
Les bactéries sont donc des bactéries nonexigeantes (car pousse sur BNO).
Gram :
On observe un mélange de 60% de BGN et
de 40% de CGP (le % donné ici est un
exemple possible).
J1 : Microscopie
N° Pairs
Mélange A
J1 : Microscopie
N° Pairs
CGP
Ronds, 2 µm,
En amas irréguliers
et grappes de
raisins
BGN
Extrémités
arrondies, 2 à 4 µm,
coloration bipolaire,
en amas irréguliers,
polymorphe,
acapsulé, asporulé.
J1 : Microscopie
N° Impairs
Mélange B
J1 : Microscopie
N° Impairs
CGP
Ovoïdes, 1 µm,
En chaînettes et
diplocoques
BGN
Extrémités
arrondies, 2 à 6 µm,
coloration bipolaire,
en amas irréguliers,
polymorphe,
acapsulé, asporulé.
J1 : Microscopie
Le gram permet de voir les différences entre les deux mélanges :
N° Impairs
N° Pairs
J1 : Dilution
Afin de bien isoler les germes de ce
mélange, on décide de diluer le mélange
polymicrobien au 1/100 par la méthode des
dilutions successives.
Nous pourrions aussi choisir de mettre une
goutte de ce mélange dans un tube de 5 mL
d’EDS.
J1 : Isolements
On décide d’isoler le mélange sur quatre
milieux d’isolement.
Deux sélectifs et deux non-sélectifs :
•
•
•
•
GNO (non-sélectif)
Gélose lactosée au BCP (non-sélectif)
Gélose lactosée de Drigalski (sélectif)
Milieu hypersalé de Chapman (sélectif)
.
Les milieux sont incubés 48H à 37°C car les germes sont mésophiles
J1 : Isolements
•
•
•
•
GNO
Gélose lactosée au BCP
Gélose lactosée de Drigalski
Milieu hypersalé de Chapman
J2 : Macroscopie
Chaque groupe fait la macroscopie des huit
milieux d’isolement.
J2 : Macroscopie
N° impairs
N° pairs
J2 : Macroscopie
GNO
N° Pairs
N° Impairs
J2 : Macroscopie
GNO
J2 : Macroscopie
N° Pairs
BCP
N° Impairs
J2 : Macroscopie
Gélose
lactosée
au
BCP
N° Pairs
J2 : Macroscopie
Gélose
lactosée
au
BCP
N° Pairs
J2 : Macroscopie
Gélose
lactosée
au
BCP
N° Impairs
J2 : Macroscopie
Gélose
lactosée
au
BCP
N° Impairs
J2 : Macroscopie
N° Pairs
Drigalski
N° Impairs
J2 : Macroscopie
Drigalski
Germe
lactose
plus
N° Pairs
J2 : Macroscopie
Drigalski
Germe
lactose
plus
J2 : Macroscopie
Drigalski
Germe
lactose
moins
N° Impairs
J2 : Macroscopie
Drigalski
Germe
lactose
moins
N° Impairs
J2 : Macroscopie
Chapman
N° pairs
J2 : Macroscopie
Chapman
N° pairs
J2 : Macroscopie
Chapman
N°
impairs
Pas de
pousse
J2 : Macroscopies
La sélectivité des milieux d’isolement nous
permet de faire les premières suspicions de
germes :
Sachant que la gélose Drigalski est sélective
pour les bacilles Gram moins,
nous suspectons les colonies de ce milieu
d’être constituées des BGN observés en J1
(BGN lactose plus ou lactose moins).
J2 : Macroscopies
La sélectivité des milieux d’isolement nous
permet de faire les premières suspicions de
germes :
Sachant que le milieu de Chapman inhibe la
pousse des bactéries Gram moins,
nous suspectons les colonies de ce milieu
d’être constituées des CGP observés en J1
(ceci est valable pour les N° pairs).
J2 : Macroscopies
La sélectivité des milieux d’isolement nous
permet de faire les premières suspicions de
germes :
Si pas de pousse sur Chapman (N° impairs),
nous suspectons les petites colonies sur BCP
et GNO d’être constituées des CGP observés
en J1.
J2 : Microscopies
On fait la microscopie sur les différents
types de colonies obtenues en J2 :
On préfère pour cela travailler (si possible)
sur les milieux sélectifs.
On recherche le BGN sur Drigalski et le CGP
sur Chapman (à défaut, sur BCP mais en
choisissant les petites colonies les plus
isolées possible).
J2 : Microscopies
On prépare deux types de suspensions :
1- une suspension de CGP
2- une suspension de BGN
On peut alors faire deux gram :
1- un sur la suspension de CGP
2- un sur la suspension de BGN
J2 : Microscopies
Drigalski
Nous avons
confirmation
que ce sont
des colonies
de BGN.
J2 : Microscopies
Chapman
(ou BCP)
Nous avons
confirmation
que ce sont
des colonies
de CGP.
J2 : Bilan
On fait une orientation grâce aux résultats des
microscopies (numéros pairs et impairs) :
Le coque est gram plus (CGP), il fait partie
d’un des quatre genres :
-
Genre Staphylococcus
Genre Micrococcus
Genre Streptococcus
Genre Enterococcus
J2 : Bilan
On fait des supputations ou suspicions grâce
aux résultats des macroscopies et des
microscopies (numéros pairs):
Le CGP est groupé en amas irréguliers et
grappes de raisins au Gram,
Il pousse sur milieu de Chapman et il est
mannitol plus, les colonies sont pigmentées
en jaune d’or,
J2 : Bilan
Tous ces résultats nous font penser à un
germe :
Genre Staphylococcus,
et principalement à (car colonies jaunes) :
Espèce Staphylococcus aureus
J2 : Bilan
On fait des supputations ou suspicions grâce
aux résultats des macroscopies et des
microscopies (numéros pairs):
Le CGP est groupé en chaînettes au Gram,
Il ne pousse pas sur milieu de Chapman, les
colonies sont petites et non-pigmentées sur
GNO,
J2 : Bilan
Tous ces résultats nous font penser à un
germe :
Genre Streptococcus,
J2 : Bilan
On fait une orientation grâce aux résultats des
microscopies (numéros pairs et impairs) :
Le BGN est polymorphe, acapsulé, asporulé
au Gram,
Il est mobile à l’état-frais (tourne sur luimême)
Il pousse sur gélose de Drigalski,
J2 : Bilan
On fait une orientation grâce aux résultats des
microscopies (numéros pairs et impairs) :
- famille des Enterobacteriaceae
- ou famille des Vibrionaceae
- ou genre Pseudomonas
J2 : Bilan
On fait des supputations ou suspicions grâce
aux résultats des macroscopies et des
microscopies (numéros pairs):
Le BGN est polymorphe, acapsulé, asporulé
au Gram,
Il est mobile à l’état-frais (tourne sur luimême)
Il pousse sur gélose de Drigalski,
J2 : Bilan
Le caractère lactose plus (numéro pairs) sur
Drigalski nous fait suspecter un germe du
groupe des :
Coliformes (germes lactose plus proches des
Escherichia coli) de la famille des
Entérobactéries.
J2 : Bilan
BGN :
Famille Enterobacteriaceae ou Vibrionaceae
ou Genre Pseudomonas
CGP :
Genres Streptococcus,
Enterococcus,
Micrococcus
Staphylococcus
J3 : Recherche des enzymes
respiratoires
A partir des GNO ensemencées grâce aux
deux souches pures isolées,
Macroscopie :
Les bactéries sont des bactéries nonexigeantes.
J3 : Recherche des enzymes
respiratoires
Nous pouvons rechercher les enzymes
respiratoires :
La catalase sur le CGP (
L’oxydase sur le BGN (
car germe Gram +),
car germe Gram -).
J3 : Recherche des enzymes
respiratoires
Recherche de l’OXYDASE :
Si on observe l’apparition d’une coloration
violette sur le disque, la bactérie possède une
oxydase, c’est une bactérie oxydase plus.
J3 : Recherche des enzymes
respiratoires
Recherche de l’OXYDASE :
Numéros pairs :
Pas d’apparition d’une
coloration violette, le
germe est oxydase moins
Numéros impairs :
Apparition d’une
coloration violette, le
germe est oxydase plus
J3 : Recherche des enzymes
respiratoires
Recherche de l’OXYDASE :
Numéros pairs :
Pas d’apparition d’une
coloration violette, le
germe est oxydase moins
Oxydase moins
Oxydase plus
Numéros impairs :
Apparition d’une
coloration violette, le
germe est oxydase plus
J3 : Recherche des enzymes
respiratoires
Recherche de la CATALASE :
Test
SI on observe un dégagement gazeux, la
bactérie possède donc une catalase, c’est
une bactérie catalase plus.
J3 : Recherche des enzymes
respiratoires
Recherche de la CATALASE :
Numéros pairs :
Apparition d’un
dégagement gazeux, le
germe est catalase plus
Numéros impairs :
Pas d’apparition d’un
dégagement gazeux, le
germe est catalase moins
J3 : Orientation
BGN
Nous nous orientons vers la famille des
Enterobacteriaceae (si oxydase -)
(avec suspicion vers les coliformes car lactose plus)
Ou vers la famille des Vibrionaceae et les
genres Pseudomonas et apparentés (si
oxydase +).
J3 : Orientation
CGP
Nous nous orientons vers les genres
Staphylococcus et Micrococcus (si cat. +)
(avec une suspicion de l’espèce Staphylococcus aureus car mannitol plus
sur milieu de Chapman)
Ou vers les genres Enterococcus et
Streptococcus (si catalase -).
J3 : Conclusion
Conclusion
Pour approfondir ces orientations il serait
nécessaire de rechercher d’autre critères de
différenciation :
1- Le type respiratoire
2- La voie d’attaque du glucose.
J3 : Orientation
Yves DABAT Ste-Anne ANGLET