B Verillaud
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Rôle du récepteur TLR3 dans la croissance tumorale des carcinomes nasopharyngés associés au virus d’Epstein-Barr Benjamin Verillaud Institut Gustave Roussy, UMR 8126 (Dir. Joëlle Wiels) Equipe « Microenvironnement tumoral, exosomes et microARN dans les tumeurs solides » (Pierre Busson ) 27/10/2012 Introduction Infiltrat lymphocytaire dans le NPC (coloration HES) Hybridation in situ des EBERs Bar-Sela et al. J Clin Pathol. 2004; 57(3):290-3. Répartition géographique des incidences du NPC dans le monde (M. Corbex, Médecine et Sciences 2004) Choe et al. Science 2005 ; 309(5734):581-5 D après Meylan et al. Nature 2006 ; 442, 39-44 TLR3 est fortement exprimé dans les lignées et biopsies de NPC TLR3 100% 86% 126% 54% Actin 100% 11% 20% 100% 26% HES 35% <1% TLR3 x50 HES <1% <1% 5% TLR3 x50 TLR3 x50 5% x200 TLR3 x50 x200 <1% <1% 9% TLR3 favorise la croissance des cellules de NPC aucun traitement 500000 poly(A:U) cellules / 25cm2 400000 La stimulation deTLR3 par un agoniste artificiel (poly(A:U)) favorise la croissance des cellules de NPC en conditions pauvres en SVF 300000 200000 100000 0 J1 J2 J3 L’invalidation de TLR3 par ARN-interférence inhibe la croissance des cellules de NPC J4 cellules / 25cm2 J0 4000000 shRNA Ctrl shRNA TLR3 3000000 2000000 1000000 0 J0 Résultats représentatifs de 3 expériences différentes J3 TLR3 permet au cellules tumorales d adapter leur métabolisme à l hypoxie Oligomycine = Blocage de la chaîne respiratoire aucun traitement concentration en protons du milieu de culture poly(A:U) RGA La stimulation de TLR3 par le ligand exogène poly(A:U) augmente la réserve de glycolyse anaérobie (RGA) des cellules tumorales de NPC Oligomycine = Blocage de la chaîne respiratoire L’invalidation de TLR3 par ARN-interférence diminue la réserve de glycolyse anaérobie des cellules de NPC Résultats représentatifs de 3 expériences différentes concentration en protons du milieu de culture shRNA Ctrl shRNA TLR3 RGA Il existe des interactions entre TLR3 et le facteur de réponse à l’hypoxie HIF1α TLR3 La détection de TLR3 et HIF1α en WB augmente en conditions pauvres en SVF HIF1α tubuline La stimulation de TLR3 en conditions pauvres en SVF permet de détecter HIF1α en WB en normoxie HIF1α tubuline shRNA Ctrl Induction du shRNA L’invalidation de TLR3 par ARN-interférence s’accompagne d’une diminution de HIF1α en WB en conditions hypoxiques - + shRNA TLR3 - + TLR3 HIF1α actine De manière paradoxale, TLR3 peut également constituer une cible thérapeutique dans le NPC CNE1 HONE1 NP69 = cellules nasopharyngées non malignes C666-1 Poly A:U RMT5265 + - + - + - - + Poly(A:U) - - + + - - + + - - + + RMT5265 - + - + - + - + - + - + 89 PARP non clivée PARP clivée 50 tubuline 116 + Conclusions ? Perspectives • Confirmer in vivo le rôle de TLR3 dans la croissance tumorale de tumeurs xénogreffées. • Mieux caractériser les ligands endogènes de TLR3. • Préciser l implication de HIF-1α dans l adaptation à l hypoxie en utilisant l interférence par l ARN. • Etudier l ensemble des voies de métabolisme induites par TLR3 grâce à une étude métabolomique. Remerciements Equipe de Pierre Busson Clément Barjon François-Régis Ferrand Aurore Gelin Claire Gourzones Mélanie Gressette Anne-Sophie Jimenez Michel Wassef Paule Opolon Olivia Bawa UMR8126 TLR3 : des effets contrastés Phase III: Poly(I:C): Cancer de vessie : Kemeny et al. Cancer 1981 Poly(A:U): Cancer colorectal : Lacour et al. Eur J Surg Oncol 1992Melanoma: Pawlicki et al. Wiad Lek 1993 Cancer de l estomac : Jeung et al. Ann Oncol 2008 Cancer du sein : Lacour et al. Lancet 1980; Laplanche et al. Breast Cancer Res Treat 2000; Salaun et al. Cancer Res 2011 Phase I: LCL161-Novartis oncology GDC0917-Genentech (Roche) AEG40826 (HGS1029)-Aegera HGSI AT-406-Ascenta therapeutics Chirurgie des NPC par voie endoscopique (NER) Chen et al. Laryngoscope 2009 37 NER pour rNPC (17 rT1N0M0, 4 rT2aN0M0, 14 rT2bN0M0, 2 rT3N0M0) Marges positives dans 1 cas Suivi 6 à 45 mois (médiane 24 mois) Survie globale à 2 ans 84.2%, 5 récidives locales (13.5%) Castelnuovo et al. Rhinology 2010 8 NER pour rNPC (4 rT1N0, 1 rT2aN0, 2 rT3N0, 1 rT3N1) Suivi 10 à 78 mois (moyenne 28 mois) Survie globale (à >10mois) 88%, 3 récidives (37.5%)
