P815 - ULB

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Lanaya Hanane
Thèse présentée en vue de l’obtention du titre de
Docteur en Sciences
Promoteur : Dr Muriel Moser
- JUIN 2008 -
UNIVERSITE LIBRE DE BRUXELLES
Faculté des Sciences
Institut de Biologie et de Médecine Moléculaires
Unité de Physiologie Animale

1
Abstract
The failure of the immune system to provide efficient protection against tumour cells has
been considered as a major issue in immunology. It is now well established that inadequate
function of the host immune system is one of the main mechanisms by which tumours escape from
immune control contributing to the limited success of cancer immunotherapy. Several cell
populations have been described which display immunosuppressive properties and may impede
tumor-specific immunity. Among them, GR1+CD11b+ immature myeloid suppressor cells and
CD4+CD25+ regulatory T cells seem to play an important role. These cells accumulate in the
spleens of tumour bearing mice and patients with cancer and contribute to immunosuppression by
inhibiting the function of CD8+ T cells and/or by promoting tumour angiogenesis.
The aim of our work was to define the mechanisms by which a single dose of
cyclophosphamide (CTX), a chemical agent commonly used in chemotherapy treatment, induces
the rejection of established P815 mastocytoma.
Our data show that CTX treatment leads to the selective loss of GR1medCD11b+ splenic
myeloid cell producing TGF-β, a cytokine which is known to suppress antitumoral response.
Furthermore, injection of CTX causes a decrease in the number of naturally occurring regulatory T
cells (CD4+CD25+Foxp3+) in the spleen and the tumor. Finally, CTX treatment induces the
differentiation of GR1highCD11b+ splenic myeloid cells into mature GR1highCD11b+CD11c+
(possibly dendritic cells?) which express high levels of CD11c, MHC class II and CD86
molecules. Of note, these cells are mainly detected in tumour necrosis areas.
Collectively, these results suggest that CTX prevents suppressive mechanisms and induces
a population of CD11c+ myeloid cells which may present tumor antigens and activate T
lymphocytes, an hypothesis in line with the requirement for CD4+ cells in CTX-induced long term
resistance.

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« Le mérite appartient à celui qui commence, même si le suivant fait mieux. »
(Proverbe Arabe)
« En vérité, le chemin importe peu, la volonté d’arriver suffit à tout. »
(Le Mythe de Sisyphe, Albert Camus)
Remerciements :
Je remercie le Fonds pour la formation à la Recherche dans l’Industrie et dans l’Agriculture ainsi que le
Télévie qui m’ont permis, par leur soutien financier, de réaliser ces cinq années de recherche scientifique.
Je remercie le Dr Muriel Moser pour m’avoir accueillie au sein de son laboratoire.
Je tiens à remercier spécialement le Professeur Jacques Urbain pour sa grande disponibilité, ses précieux
conseils scientifiques et son encouragement. Je n’ai pas de plus jolis mots pour vous témoigner ma
gratitude mais mon merci vient du plus profond de mon cœur. Merci infiniment de croire en mes
capacités…Je remercie également sa charmante épouse. Merci Georgette pour ton aide et ta grande
patience pour les longues expériences que je t’ai fait subir auprès de cette machine complexe.
Merci Marjorie, pour ton aide technique, ta patience, ta persévérance… Ce fût un plaisir de collaborer et
de travailler avec toi…
Merci à mes compagnons de laboratoire pour les beaux moments passés durant ces années de thèse, pour
vos conseils, pour votre bonne humeur et votre soutien… Merci à vous…Geoffroy, Virginie, Anne-
sophie, Soraya, Fouad, Françoise, Fabienne, Isabelle, Delphine, Sébastien, Alice…et tous les autres qui
se reconnaîtront…
Merci Anna, Louis, Jacob et Sadia pour votre grande écoute, pour votre gentillesse et vos précieux
encouragements…
Je remercie du fond du cœur Mademoiselle Jacqueline Wautelet de m’avoir encouragée à poursuivre mes
études à l’université et d’avoir fait confiance en mes capacités.
Je remercie chaleureusement tous mes amis, toujours à mes côtés pour m’encourager…J’ai beaucoup de
chance de vous avoir… Samira Ahanour, Lydia et Sina Ramechfar, Zhinus Jahangosha, Nathalie
Demoulin, Stani Angoyi, Flavio Genco, Vafa Izadinia, Raouf Boudjemaa, Babak Yazdani, ainsi que
Samandar Yazdani et tous les autres qui se reconnaîtront…
Enfin, je remercie du fond du coeur ma famille pour son amour, pour sa grande patience durant ces
derniers mois. Un grand merci à mes chers parents de m’avoir donné la chance d’arriver à ce moment et
de me soutenir jusqu’au bout…Je tiens à remercier particulièrement mon frère Majd Lanaya pour toute
sa générosité, son aide et son soutien dans les moments difficiles. Merci petit frère…
Je dédie cette thèse à mon grand-père Haj Chahmoun Mohamed (1930 -2004). Merci de m’avoir dit que
tu étais fier de moi avant que tu nous quittes subitement…

3
TABLE DES MATIERES
INTRODUCTION
1. Généralités 1
2. Définitions 1
2.1 Les mastocytes 1
2.2 La mastocytose 2
2.2.1 Le mastocytome 3
2.2.1 Le mastocytome murin P815 3
3. La Réponse Immunitaire 4
3.1 Déclenchement d’une réponse immunitaire adaptative 5
4. L’Immunité Antitumorale 6
4.1 La surveillance immunitaire innée 7
4.1.1 Les Lymphocytes T γδ 7
4.1.2 Les cellules NK et NKT 8
4.1.3 Les cellules dendritiques tueuses productrices d’IFNγ (IKDC) 10
4.1.4 Les cytokines et molécules effectrices de l’immunosurveillance 11
4.2 La surveillance immunitaire adaptative 13
4.2.1 Les différentes classes d’antigènes tumoraux 14
4.2.2 Les cellules dendritiques 17
4.2.3 Les lymphocytes T 19
4.2.4 La synapse immunologique 20
4.2.5 La cytotoxicité lymphocytaire 21
5. Mécanismes d’Echappement des tumeurs à l’immunosurveillance 22
5.1 Les Facteurs liés aux cellules tumorales 23
5.1.1 Perte ou diminution de l’expression des molécules du CMH I 23
5.1.2 Résistance des cellules tumorales à l’apoptose 24
5.1.3 Cytokines immunosuppressives sécrétées par la tumeur 24
5.2 Les Facteurs liés au dysfonctionnement cellulaire du système immunitaire 28
5.2.1 Tolérance immunitaire due aux cellules dendritiques 28
5.2.2 Tolérance immunitaire due aux lymphocytes T régulateurs 29
5.2.3 Tolérance immunitaire due aux cellules myéloïdes immatures 30

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6. Intérêt Médical : des concepts au traitement des tumeurs 34
6.1 L’Immunothérapie 34
6.2 La Chimiothérapie
6.2.1 Le cyclophosphamide 37
BUT DU TRAVAIL 39
RESULTATS 40
1. Effet de l’injection de cellules dendritiques chargée de peptides tumoraux 40
2. Un traitement au cyclophosphamide induit le rejet du mastocytome P815 41
3. Analyse des populations immunes suite à l’administration de cyclophosphamide 42
3.1 Les cellules myéloïdes GR1+CD11b+ 42
3.2 Les lymphocytes T régulateurs CD4+CD25+ 47
3.3 Les lymphocytes T CD4+ et CD8+ 48
3.4 Les cellules dendritiques CD11c+ 49
DISCUSSION 51
MATERIEL ET METHODES 61
BIBLIOGRAPHIE 69
ANNEXE