Stage effectué du 12 avril au 28 mai 2010 sous la responsabilité de

Immeuble « Le Dufy »
1, Place de Turenne
94417 SAINT-MAURICE
Tel : [phone]
Fax : [phone]
Stage effectué
du 12 avril au 28 mai 2010 sous
la responsabilité de
Mme Florence Poty
ANALYSE
MICROBIOLOGIQUE
DE L’EAU
Année scolaire 2009/2010
L2 chimie
Marie Méligne
J’ai effectué ce stage au Centre d’Analyses Environnementales situé à Saint-Maurice aussi appelé Laboratoire
central. Sa mission est d’analyser des échantillons d’eau provenant de divers sites de prélèvement.
Mon rôle était d’effectuer différentes analyses sur des échantillons d’eau provenant d’usine de traitement et de
canalisation domestique. Ces analyses ont pour but de vérifier la propreté microbiologique de l’eau c'est-à-dire si
celle-ci ne contient pas de micro-organismes pathogènes pour l’Homme, conformément aux réglementations de
la santé publique.
I did this internship in Centre d’Analyses Environnementales located in Saint-Maurice (94) also called Laboratoire
central. Its mission is to analyze water samples taken from different sites. I had to analyse water samples
from pipeline servant and plant treatment. These tests aim to control the microbiological cleanliness of the
water, in order to determine if it is dangerous to humans, conformly to public health regulations.

Marie Méligne Analyse microbiologique de l’eau 2010
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REMERCIEMENTS
Je tiens à remercier :
- Mme Florence POTY, responsable du service technique de microbiologie et de chimie et directrice
adjointe du laboratoire, pour m’avoir accueillie au sein de son service dans le cadre de mon stage.
- Mme Stéphanie HOUDARD, responsable de l’unité technique de microbiologie ainsi que Mme Sophie
MOREAU, responsable de l’unité technique légionelle pour leur disponibilité et pour m’avoir encadré
tout au long de mon stage.
- Mme Aurore FAURE et Melle Marie-Ève BERCHERY, pour m’avoir formée en bactériologie et en
DAPI/CTC, ainsi que pour leur aide quotidienne pendant mon stage.
- Toute l’équipe de production du laboratoire d’analyse pour leur accueil, leurs conseils, leur
disponibilité et leur patience tout au long de mon stage : Isabelle BONANNI, Florian D’ARCO, Sandra
DA SILVA, Virginie DEL, Sophie DELGADO, Fabien GADY, Stéphanie HOUVET, Sébastien JEAN, Antoine
JICQUEL, Benjamin LALOE, Emilie NATALI, Camille NEGRE.

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SOMMAIRE
Remerciements ....................................................................................................................................................... 2
Sommaire ................................................................................................................................................................ 3
Glossaire .................................................................................................................................................................. 4
Introduction ............................................................................................................................................................ 5
1) Présentation du Centre d’Analyses Environnementales (CAE) ............................................................... 5
2) Activités et organisation du laboratoire de Saint Maurice .................................................................... 6
3) Le service microbiologie ........................................................................................................................ 6
Matériel et méthode du service de bactériologie ................................................................................................... 7
1) Matériel utilisé dans le laboratoire de microbiologie ............................................................................ 7
A. Les consommables et petits équipements ............................................................................................ 7
B. Appareillage ........................................................................................................................................... 7
2) Méthode d’analyse des divers échantillons ........................................................................................... 7
A. Recherche des Entérocoques et des bactéries coliformes (Escherichia coli) par filtration ................... 8
B. Recherches des micro-organismes revivifiables .................................................................................... 8
C. Recherche et dénombrement des spores de micro-organismes anaérobies sulfito-réducteurs par
filtration sur membrane ................................................................................................................................. 8
Lectures et Repiquages ......................................................................................................................................... 10
1) Dénombrement des Entérocoques ...................................................................................................... 10
2) Dénombrement des coliformes et des Escherichia coli ....................................................................... 10
3) Dénombrement des micro-organismes revivifiable ............................................................................. 10
4) Dénombrement des spores de micro-organismes anaérobies sulfito-réducteurs ............................... 11
Conclusion ............................................................................................................................................................. 12
Bibliographie ......................................................................................................................................................... 13
1) Sites internet ........................................................................................................................................ 13
2) Notices techniques .............................................................................................................................. 13
Annexe 1 ................................................................................................................................................................ 14
Annexe 2 ................................................................................................................................................................ 17
Annexe 3 : Composition des divers milieux de culture ......................................................................................... 20
Annexe 4 : Composition des divers milieux de repiquage ..................................................................................... 21
Annexe 5 : Schéma simplifié des relations entre différents acteurs du domaine de l’eau d’alimentation ............ 22

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GLOSSAIRE
Anaérobiose : désigne la capacité d'un organisme ou micro-organisme à se développer en l’absence oxygène
AFNOR : Association Française de NORmalisation
AFSSA : Agence Française de Sécurité Sanitaire des Aliments
BEA : Gélose Esculine Azide
CAE : Centre d’Analyses Environnementales
Catalase (positif ou négatif) : enzyme catalysant la dismutation de l’eau oxygénée (peroxyde d’hydrogène)
CEN : Commissions Européen de normalisation
COFRAC : COmité FRançais d’Accréditation
CSHPF : Conseil Supérieur d'Hygiène Publique de France
DASS : Direction des Affaires Sanitaires et Sociales
GIE : Groupement d’Intérêt Economique
Gram (positif ou négatif) : les bactéries à Gram positif sont mises en évidence par une technique de coloration
appelée coloration de Gram, elles apparaissent alors mauves au microscope. La technique de coloration repose
sur les caractéristiques membranaires et de paroi de la bactérie
ISO : International Organization for Standardization
Oxydase (positif ou négatif) : enzyme catalysant la réaction d'oxydo-réduction impliquant une molécule de
dioxygène, qui est réduit en eau H2O ou en peroxyde d'hydrogène.
PCA : Plate Count Agar, milieu ordinaire, sans inhibiteurs, permettant la croissance de l'ensemble des bactéries
PCR : Réaction en chaîne par polymérase (de l'anglais polymerase chain reaction), méthode de biologie
moléculaire d'amplification d'ADN in vitro
TTC : Chlorure de Triphényl Tétrazolium, milieu de culture sélectif utilisé pour le dénombrement des bactéries
coliformes
TSC : Tryptose Sulfite
Slanetz (gélose de) : milieu de culture sélectif utilisé pour le dénombrement des Entérocoques

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INTRODUCTION
L’eau est essentielle à la vie et au bien-être. La quantité moyenne d’eau contenue dans un organisme adulte est
de 65 %. Or le corps humain ne peut la stocker : l’homme doit donc chaque jour subvenir à ses besoins en eau.
C’est pourquoi elle a besoin d’être protégée, traitée et économisée. De plus en raison de son caractère vital,
l’eau consommée doit être de bonne qualité sanitaire afin d’éviter la survenue de certaines pathologies
hydrique.
Actuellement, les principaux risques sanitaires susceptibles d’être engendrés par l’ingestion de l’eau du robinet
sont de deux types :
- Le risque microbiologique
- Le risque chimique
Des laboratoires d’analyses tels que les Centres d’Analyses Environnementales (CAE) de Veolia Environnement
sont là pour procéder à un contrôle complet de l’eau afin d’assurer une bonne qualité et une protection de
l’environnement. Lors de mon stage, je me suis intéressée à ce premier type de risque.
La recherche dans l’eau de tous les micro-organismes potentiellement dangereux s’avère irréaliste, tant pour
des raisons techniques qu’économiques. Ainsi, actuellement, la stratégie de contrôle repose sur la recherche
de bactéries dites « germes témoins de contamination fécale », faciles à détecter, non directement
pathogènes, mais dont la présence laisse supposer l’existence de germes autrement dangereux. Le contrôle de
la conformité de la qualité microbiologique de l’eau porte sur la vérification de l’absence d’Escherichia coli et
d’entérocoques dans un échantillon de 100 millilitres d’eau prélevé dans le cadre du contrôle sanitaire courant.
Par ailleurs, la recherche de spores de bactéries anaérobies sulfito-réductrices telles que les Clostridium, dans
le cadre du contrôle sanitaire renseigne sur l’efficacité des systèmes de filtration.
Les efforts menés par l’ensemble des acteurs (collectivités, responsables de la production, financeurs,
administrations, etc.) ont permis d’améliorer fortement la qualité microbiologique des eaux au cours des
dernières années. Ainsi, la proportion de population ayant été exposée à des eaux non conformes vis-à-vis de la
qualité microbiologique a diminué de moitir depuis 2000 (4,4 % contre 8,8 % en 2006).
1) Présentation du Centre d’Analyses Environnementales (CAE)
Le Centre d’Analyse Environnementales a été créé afin de regrouper les différentes activités analytiques du
groupe Veolia Environnement, leader mondial des services de l’environnement. Il est composé d’un réseau de
sept laboratoires répartis en France. Les laboratoires à Saint-Maurice, à Arras, à Caen, à Florange, à Lyon, à
Rennes et à Toulouse. Il emploie environ 200 collaborateurs et traite environ 200 000 échantillons par an. Le
site de Saint-Maurice (94) se compose du Laboratoire Central, chargé des prestations analytiques de routine,
d’une équipe support (informatique, logistique, achat et administration), ainsi que de deux équipes de
recherche, principalement responsables du perfectionnement des méthodes analytiques existantes et du
développement de techniques innovantes, dans les domaines de la microbiologie et de la chimie.
Les équipes du CAE ont pour mission d’évaluer les besoins, les prélèvements et transports des échantillons, de
l’analyse, de la validation et de la restitution des résultats. Le domaine d’expertise se situe au-delà des eaux
propres et résiduaires, puisqu’il recouvre l’ensemble des domaines de l’environnement : l'air, les déchets et
combustibles et les matériaux.
De plus, le laboratoire central doit s’assurer de la conformité des opérations et propose un accompagnement et
des services complémentaires. Ces prestations font du CAE un pôle d’expertise reconnu de l’analyse
environnementale. Membre du GIE (Groupement d’Intérêt Économique), il est accrédité par le COFRAC (COmité